Un agente de formación de imágenes que comprende un compuesto de benzofurano de fórmula (II):

en la que R 1 es alquil hidroxi; y R 2 es un radical hidrocarburo seleccionado entre el grupo que consiste en las estructuras 1a a 53a; comprendiendo dicho compuesto, adicionalmente, un marcador seleccionado entre el grupo que consiste en radioisótopos, partículas paramagnéticas y partículas ópticas

CAMPO DE LA INVENCIÓN

La presente divulgación se refiere a la detección de beta-amiloide soluble y a nuevas composiciones, agentes de formación de imágenes y un derivado de benzofurano en relación con la misma.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Las características histopatológicas principales de la enfermedad de Alzheimer (“EA”) son la presencia de placas y ovillos neuríticas combinada con inflamación asociada en el cerebro. Se sabe que las placas están compuestas principalmente por formas fibrilares depositadas (o insolubles en solución acuosa) del péptido beta-amiloide (“beta-A”). La formación de péptido beta-A, por completo en agregados fibrilares, es un proceso complejo que se inicia por la escisión de la proteína precursora de amiloide (“APP”). Después de la escisión de la APP, la forma monomérica del beta-A puede asociarse con otros monómeros, presumiblemente a través de interacciones hidrófobas y/o intercambio de dominios, para formar dímeros, trímeros y oligómeros de orden superior. Los oligómeros de beta-A pueden asociarse adicionalmente para formar protofibrillas y fibrillas finales, que son el constituyente principal de las placas neuríticas. Se ha demostrado recientemente que los oligómeros solubles (solubles en tampón acuoso) de beta-A pueden contribuir significativamente a una disfunción neuronal. De hecho, modelos animales sugieren que simplemente disminuyendo la cantidad de péptido beta-A soluble, sin afectar a los niveles de beta-A en placas, puede ser suficiente para mejorar la función cognitiva. Actualmente, el único procedimiento definitivo de diagnóstico de la EA es el examen post-mórtem del cerebro para determinar la presencia de placas y ovillos. El diagnóstico ante-mórtem de la EA es difícil, especialmente durante las fases tempranas, ya que los síntomas de la EA se comparten por un espectro de otras demencias. Actualmente, el diagnóstico de la EA se realiza usando ensayos cognitivos simples diseñados para ensayar la capacidad mental de un paciente tales como, por ejemplo, la ADAS-cog (escala de evaluación de la enfermedad de Alzheimer-subescala cognitiva) o MMSE (Miniexamen del estado mental). La naturaleza subjetiva y la variabilidad intrínseca al paciente es un defecto fundamental del diagnóstico de la EA por dichos medios. El hecho de que la EA no pueda diagnosticarse anticipadamente con exactitud genera un desafío formidable para compañías farmacéuticas que tengan como objetivo ensayar fármacos anti-beta-A como terapia para ralentizar o detener la patogénesis de la EA. Además, incluso si la EA pudiera detectarse anticipadamente y los pacientes pudieran tratarse con compuestos que disminuyan el nivel de beta-A, actualmente no existe forma de saber si la terapia está siendo clínicamente eficaz. Por lo tanto, existe una necesidad significativa de desarrollar procedimientos para medir

los niveles de péptido beta-A soluble localmente en el cerebro.

El diagnóstico de la EA, midiendo directamente los niveles de beta-amiloide de forma no invasiva, se ha intentado mediante la formación de imágenes dirigida de placas seniles. Esta estrategia no representa una medida específica del péptido beta-A soluble debido a que los agentes de formación de imágenes dirigidos a beta-A actuales están dirigidos a los agregados insolubles que son característicos de los depósitos fibrilares de beta-A en el cerebro. Además, la formación de imágenes dirigida de placas puede no proporcionar un diagnóstico anticipado, ya que una gran carga de placas se asocia principalmente con una enfermedad en fase de intermedia a tardía. Además, no se ha demostrado que las terapias anti-beta-A actuales afecten sensiblemente a los depósitos fibrilares como para detectarlo por técnicas de formación de imágenes a puntos temporales clínicamente relevantes. Como alternativa, las mediciones in vitro de beta-A pueden ser específicas para beta-A soluble en el líquido cefalorraquídeo, pero carecen de la selectividad necesaria para el beta-A local en el cerebro que es necesaria para una evaluación precisa directa de los niveles cerebrales de especies de beta-A solubles. Hasta la fecha, no se ha abordado la medición no invasiva dirigida y la formación de imágenes de las especies peptídicas de beta-A soluble (incluyendo monómeros, dímeros, trímeros y n-oligómeros) que existen en el sistema nervioso central (“SNC”).

A diferencia de los agentes de formación de imágenes descritos actualmente que se unen a beta-A soluble, existen agentes y colorantes de formación de imágenes que se unen exclusivamente a depósitos insolubles de beta-A o placas seniles. Las moléculas pequeñas que se unen específicamente a depósitos de beta-A insoluble incluyen, por ejemplo, moléculas de bajo peso molecular, tales como rojo Congo, Crisamina G, metoxi-X04, TZDM, [11C]6, IMSB, Tioflavina S y T, TZDM, 1-BTA, derivados de benzotiazol, [125I]3, BSB, IMSB, derivados de estiril-benceno, IBOX, derivados de benzoxazol, IMPY, derivados de piridina, DDNP, FDDNP, FENE, derivados de dialquilaminonaftilo, derivados de benzofurano y derivados de los mismos (véanse, por ejemplo, las Patentes de Estados Unidos Nº: 6.133.259; 6.168.776; 6.114.175).

Se ha demostrado que las secuencias de ácido nucleico y derivados de las mismas se unen a placas seniles insolubles de beta-A, incluyendo ARNm para furina y proteína precursora de amiloide (“APP”).

También se han desarrollado péptidos como agentes de formación de imágenes para depósitos insolubles de beta-A y placas seniles. Los péptidos específicos de secuencia que se han marcado con el fin de formar imágenes de beta-A insoluble incluyen el propio péptido beta-A marcado, péptido beta-A-gadolinio-putrescina, beta-A radiomarcado, [111In]beta-A, [125I]beta-A marcado con radioisótopos de emisión gamma, derivados de beta-A-DTPA, putrescina

radiomarcada, ligandos basados en KVLFF y derivados de los mismos.

Se ha sugerido que los inhibidores del beta-A agregado alteran la formación de estos agregados interaccionando con fibrillas solubles y/o insolubles de beta-A. Los ejemplos de inhibidores o agentes antiagregación incluyen péptidos de beta-A, ligandos basados en KVLFF, compuestos de bajo peso molecular, nanoestructuras de carbono, rifamicina, IDOX, acridona, benzofurano, apomorfina y derivados de los mismos.

También se han conocido agentes que promueven agentes de agregación tales como beta-A42, proteínas, metales, compuestos de bajo peso molecular y lípidos. Los agentes que promueven la agregación o desagregación de fibrillas de beta-A presumiblemente interaccionan con beta-A soluble o insoluble, o con ambos, sugiriendo que es posible desarrollar compuestos que se unan exclusivamente a beta-A.

Los anticuerpos para beta-A son similares al derivado de KLVFF ya que también interaccionan con beta-A soluble e insoluble. Pueden prepararse anticuerpos específicos para beta-A soluble e insoluble contra un antígeno o hapteno adecuado que comprende el epítope diana deseado, tal como la región de unión que consiste en los restos aminoacídicos 13-26 y/o el extremo carboxi-terminal que consiste en los restos aminoacídicos 33-42 del beta-A. Se desvela un anticuerpo adecuado para beta-A soluble en Kayed, y col., Science, vol. 300, página 486, 18 de abril de 2003. También pueden prepararse péptidos sintéticos mediante técnicas en fase sólida convencionales acopladas a un inmunógeno adecuado, y usarse para preparar antisueros o anticuerpos monoclonales por técnicas convencionales. Los haptenos peptídicos adecuados comprenderán típicamente al menos cinco restos contiguos dentro del beta-A y pueden incluir más de seis restos. Pueden producirse haptenos polipeptídicos sintéticos mediante la técnica de síntesis en fase sólida de Merrifield, en la que se añaden secuencialmente aminoácidos a una cadena en crecimiento (Merrifield (1963) J. Am. Chem. Soc. 85: 2149-2156). Los anticuerpos adecuados incluyen, por ejemplo, los de las Patentes de Estados Unidos Nº 5.811.310; 5.750.349; y 5.231.000, R1282, 21F12, 3D6, FCA3542 y anticuerpos monoclonales y policlonales para beta-A 1-40, 1-42 y otras isoformas. Se han desarrollado determinados agentes de formación de imágenes que pueden informar sobre la presencia específica de una molécula diana sin unirse a esa molécula. En tales casos, los agentes de formación de imágenes se consideran “activables” debido a que su señal se activa

o inactiva basándose en la presencia de una molécula diana específica. Se han usado ejemplos de dichos agentes...

1. Un agente de formación de imágenes que comprende un compuesto de benzofurano de fórmula (II):

**(Ver fórmula)**

en la que R1 es alquil hidroxi; y R2 es un radical hidrocarburo seleccionado entre el grupo que consiste en las estructuras 1a a 53a;

**(Ver fórmula)**

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**(Ver fórmula)**

**(Ver fórmula)**

**(Ver fórmula)**

**(Ver fórmula)**

comprendiendo dicho compuesto, adicionalmente, un marcador seleccionado entre el grupo que consiste en radioisótopos, partículas paramagnéticas y partículas ópticas.

2. Un agente de formación de imágenes de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el marcador es un radioisótopo seleccionado entre el grupo que consiste en 3H, 11C, 14C, 18F, 32P, 35S, 123I, 125I, 131I, 51Cr, 36CI, 57Co, 59Fe, 75Se y 152Eu.

3. Un agente de formación de imágenes de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el marcador es una partícula paramagnética seleccionada entre el grupo que consiste en 157Gd, 55Mn, 162Dy, 52Cr y 56Fe.

4. Un agente de formación de imágenes de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el marcador es una partícula óptica, seleccionada entre el grupo que consiste en fluoróforos y entidades quimioluminiscentes.

5. Un procedimiento para detectar, al menos, uno de especies de beta-A y péptidos amiloidogénicos, que comprende las etapas de proporcionar una muestra sospechosa de comprender, al menos, uno de especies de beta-A y péptidos amiloidogénicos; aplicar el agente de formación de imágenes de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4; y detectar una cantidad del agente de formación de imágenes unido a, al menos, uno de especies de beta-A y péptidos amiloidogénicos.

6. El procedimiento de acuerdo con la reivindicación 5, en el que la especie de beta-A es beta-A soluble seleccionado entre el grupo que consiste en monómeros, dímeros, trímeros, oligómeros de hasta 24 péptidos beta-A y combinaciones de los mismos.

7. Un procedimiento según la reivindicación 5, en el que la especie de beta-A se selecciona entre el grupo que consiste en monómeros, dímeros, trímeros, oligómeros de beta-A 1-38, beta-A 1-39, beta-A 1-40, beta-A 1-41, beta-A 1-42, beta-A 1-43 y combinaciones de los mismos.

8. El agente de formación de imágenes de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 4,

para su uso en un procedimiento de evaluación de una enfermedad relacionada con amiloide, en el que dicho procedimiento comprende:

administrar a un sujeto que tiene o que se sospecha que tiene una enfermedad relacionada con amiloide, el agente de formación de imágenes de las reivindicaciones 1 a 4; y

detectar el agente de formación de imágenes unido a al menos uno de especies beta-A y péptidos amiloidogénicos, usando formación de imágenes no invasiva.

9. El agente de formación de imágenes de la reivindicación 8, en el que la especie de beta-A soluble es como se ha definido en la reivindicación 6 ó 7.

10. El agente de formación de imágenes de la reivindicación 8, en el que la enfermedad relacionada con amiloide es la enfermedad de Alzheimer.

11. El agente de formación de imágenes de la reivindicación 8, en el que la etapa de detección comprende medir, de forma no invasiva, el nivel del agente de formación de imágenes dentro del sujeto.

12. El agente de formación de imágenes de la reivindicación 8, en el que la etapa de detección comprende la formación de imágenes del cerebro del sujeto.

13. El agente de formación de imágenes de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en la fabricación de una composición para evaluar la eficacia de una terapia, comprendiendo dicho procedimiento:

administrar a un sujeto una primera dosis de una composición que comprende el agente de formación de imágenes de las reivindicaciones 1 a 4;

obtener de forma no invasiva una medición inicial del agente de formación de imágenes dentro del sujeto;

administrar al sujeto una terapia a evaluar;

administrar al sujeto una segunda dosis de dicha composición;

obtener de forma no invasiva una segunda medición del agente de formación de imágenes dentro del sujeto; y

comparar las dos o más mediciones separadas en el tiempo, en el que un aumento o disminución en la cantidad del agente de formación de imágenes presente indica la eficacia de la terapia.

14. El agente de formación de imágenes de la reivindicación 13, en el que la terapia a evaluar se administra antes de la administración de la primera dosis de la composición.

15. El agente de formación de imágenes de la reivindicación 13, en el que la primera dosis de

5 la composición comprende el agente de formación de imágenes en una cantidad que varía de 0,1 nmol a aproximadamente 100 mg.

16. El agente de formación de imágenes de la reivindicación 13, en el que las etapas de obtención de mediciones de forma no invasiva comprende generar y analizar una imagen usando una técnica seleccionada entre el grupo que consiste en tomografía de emisión de positrones, formación de imágenes por resonancia magnética, formación de imágenes ópticas, tomografía computerizada de emisión de fotón único, ultrasonidos y tomografía computerizada por rayos x.

17. El agente de formación de imágenes de la reivindicación 13, en el que la etapa de obtención de mediciones de forma no invasiva comprende, adicionalmente, la medición de la cantidad del agente de formación de imágenes que está activado por al menos uno de especies de beta-A y péptidos amiloidogénicos.

18. Una composición de formación de imágenes que comprende: el agente de formación de imágenes de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4; y un vehículo farmacéuticamente aceptable.