COMPOSICIONES ANTIMICROBIANAS QUE COMPRENDEN UN PEPTIDO CATIONICO Y UNA ENDOPEPTIDASA DE GLICILGLICINA.

Composición que comprende lisostafina y un péptido catiónico que es ranalexina, dermaseptina S3 o una mezcla de las mismas

Composiciones antimicrobianas que comprenden un péptido catiónico y una endopeptidasa de glicilglicina.

La presente invención se refiere a unas composiciones para inhibir la propagación de organismos procariotas, como las bacterias.

Se conocen diversos tipos de agentes con actividad bactericida o bacteriostática, por ejemplo los antibióticos. Sin embargo, cada vez más, la resistencia microbiana a los antibióticos está creando dificultades en el tratamiento de algunas infecciones. Surgen dificultades concretas con infecciones causadas por Staphylococcus aureus que es una causa importante de infecciones hospitalarias y comunitarias. En los hospitales, los pacientes cateterizados o que se recuperan de procedimientos quirúrgicos tienen una tasa de infección significativamente mayor con morbilidad y mortalidad considerables. En algunos países el problema empeora debido a que la mayoría de las infecciones nosocomiales por S. aureus son causadas por cepas que son multirresistentes a los antibióticos. Estas cepas multirresistentes a fármacos se denominan "MRSA" (Staphylococcus aureus resistente a la meticilina). Se ha dado un aumento drástico en la proporción de aislados de S. aureus clasificados como MRSA. Por ejemplo, en el RU en 2.004, el 40% de todos los aislados de bacteriemias por S. aureus se clasificaron como MRSA. Queda claro por tanto que el MRSA es un problema considerable, especialmente en el mundo desarrollado.

Se han desarrollado combinaciones específicas de antimicrobianos para tratar enfermedades derivadas de microorganismos en seres humanos y animales, especialmente enfermedades causadas por bacterias resistentes a los antibióticos. Por ejemplo, la infección por la bacteria Gram positiva Mycobacterium tuberculosis (el agente etiológico de la tuberculosis), que adquiere fácilmente resistencia a los antibióticos, puede tratarse más eficazmente con una combinación de antibióticos diferentes. Además, la combinación del antibiótico betalactámico amoxicilina y el ácido clavulónico inhibidor de la beta-lactamasa (Nadler JP et al., Chest, 1991, Vol. 99, pp. 1025-1026) ha tenido como resultado el desarrollo de un tratamiento eficaz para algunas bacterias resistentes a la penicilina. De esta manera, los métodos de combinaciones de tratamiento de la infección bacteriana tienen el beneficio de tener menos probabilidades de inducir resistencia en las bacterias debido a que tienen como diana múltiples sitios de acción diferentes. Si las combinaciones de antimicrobianos presentan un modo sinérgico de acción también tienen el beneficio añadido de ser más económicas ya que la combinación utiliza cantidades menores de antimicrobianos que si se utilizaran solos. Las infecciones nosocomiales suelen implicar bacterias multirresistentes y éstas tiene como resultado un aumento de la mortalidad, morbilidad y coste de tratamiento de los pacientes afectados.

Los agentes antimicrobianos se derivan de una amplia variedad de fuentes. Por ejemplo, la proteína ranalexina es secretada por la rana toro norteamericana (Rana catesbelinana) y consiste en 20 aminoácidos (N-terminal F-L-G-G-L-I-K-I-V-P-A-M-I-C-A-V-T-K-K-C C-terminal) con un único enlace disulfuro intramolecular que forma un anillo heptapéptido dentro de la molécula (Clark et al., J Biol Chem, 1994, Vol. 269 No. 14, pp 10849-10855). La ranalexina tiene una estructura similar al antibiótico bacteriano polimixina, que también es un péptido amfipático con un anillo heptapéptido. La ranalexina se ha sometido a ensayo in vivo con éxito para evitar la infección de injertos vasculares causada por Staphylococcus epidermidis Gram positivo resistente a antibióticos (Giacometti et al., J Antimicrob Chemother, 2000, Vol. 46, pp 751-756). También se ha demostrado que otros péptidos amfipáticos catiónicos tienen actividad antimicrobiana. Hasta la fecha, se han descrito más de 500 de tales péptidos (véase Zasloff Nature, 2002, 415:389-395). Estos péptidos son todos moléculas amfipáticas: tienen unos dominios hidrófobos que comprenden cadenas laterales de aminoácidos no polares, y unos dominios hidrófilos de residuos polares y cargados positivamente. Por ejemplo las dermaseptinas, como la dermaseptina S3, muestran actividad antimicrobiana, p. ej., contra las levaduras, incluso en forma truncada (Coote et al., Antimicrob Agents Chemother, 1998, Vol. 42, No. 9, pp 2160-2170). Se han llevado con éxito estudios funcionales in vitro de péptidos catiónicos como la ranalexina o la megainina2 en combinación con antibióticos utilizados clínicamente como la claritromicina o la polimixina E contra aislados clínicos de la bacteria Gram negativa Psudomonas aeruginosa. Una combinación de los péptidos con estos antibióticos dio como resultado un efecto sinérgico (Giacometti et al., J Antimicrob Chemother, 1999, Vol. 44, pp 641-645). Las megaininas se derivan de la rana de uñas africana Xaenopus laevis y las dermaseptinas de la rana arbórea sudamericana Phyllomedusa sauvagii (que comprende s1 a s5) son de 23-24 aminoácidos de longitud, catiónicos y amfipáticos, y pueden adoptar una conformación alfa helicoidal.

Determinadas enzimas también pueden mostrar una actividad antimicrobiana, por ejemplo interfiriendo con la pared celular bacteriana. Un ejemplo de una enzima de este tipo es la lisozima, que puede aislarse del líquido lagrimal o la clara de huevo. La lisozima hidroliza el enlace glucosídico beta-1,4 entre la N-acetil glucosamina y el ácido N-acetilmurámico, llevando así a la ruptura de la pared. Otra enzima que también tiene como diana la pared celular bacteriana es la lisostafina. Esta metalopeptidasa dependiente del cinc de 27 KDa, que es secretada por cepas de Staphylococcus stimulans y S. staphylolyticus, escinde los enlaces glicina-glicina en los puentes cruzados de pentaglicina entre las capas de peptidoglicano de las paredes celulares estafilocócicas, lo que lleva a la lisis celular. La lisostafina puede matar Staphylococcus aureus a concentraciones bajas en cuestión de minutos (Wu et al., Antimicrob Agents Chemother, 2003, Vol. 47, No. 11, pp 3407-3414). Lamentablemente, se da un nivel alto de resistencia a la lisostafina tras la exposición a niveles sub-inhibitorios. En un método para superar los problemas de resistencia, se utilizó lisostafina con un antibiótico betalactámico, que suprimía la resistencia de las bacterias a la lisostafina y que dio como resultado adicional un efecto letal sinérgico (Kiri et al., Antimicrob Agents Chemother, 2002, Vol. 46, no. 6, pp 2017-2020).

La presente invención se basa en que la lisostafina y la ranalexina actúan sinérgicamente en su acción antibaceteriana.

La resistencia a la lisostafina puede seleccionarse fácilmente in vitro y se ha citado como un problema potencial si la enzima se desarrolla para aplicaciones comerciales (Climo et al., 2001, Antimic Agents Chemother, 45:1431-1437). La lisostafina también es inmunogénica, de manera que los pacientes expuestos anteriormente a la enzima podrían producir potencialmente anticuerpos que secuestraran el compuesto y redujeran así la actividad (Walsh et al., 2003, Antimic Agents Chemother, 47:554-558). Nuestra demostración de sinergia inhibitoria entre combinaciones de ranalexina y lisostafina podría abordar estos dos problemas potenciales. En primer lugar, es menos probable que se de resistencia cuando las bacterias se exponen a una combinación de dos compuestos con modos de acción divergentes, y en segundo lugar, la naturaleza sinérgica de la combinación significa que se requieren cantidades reducidas de cada compuesto individual para inducir el mismo efecto letal permitiendo el uso de niveles menores de lisostafina en circulación que tienen menos probabilidades de inducir una respuesta inmunogénica mientras mantienen la eficacia del tratamiento.

Sin embargo, sigue existiendo una necesidad de terapias y agentes antimicrobianos adicionales, especialmente aquellos destinados a tener como diana bacterias multirresistentes como el MRSA.

De acuerdo con la presente invención se proporciona una composición que comprende un péptido catiónico, que es ranalexina, dermaseptina S3 o una mezcla de las mismas, y una endopeptidasa de glicilglicina, la lisostafina.

La composición que comprende un péptido catiónico y lisostafina (una endopeptidasa de glicilglicina) inhibe la propagación de un procariota, como una bacteria Gram positiva, por ejemplo Staphylococcus sp. La bacteria puede ser Staphylococcus aureus, por ejemplo Staphylococcus aureus...

1. Composición que comprende lisostafina y un péptido catiónico que es ranalexina, dermaseptina S3 o una mezcla de las mismas.

2. Composición según la reivindicación 1, en la que el péptido catiónico y la lisostafina se encuentran en forma de suspensión o solución acuosa.

3. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, que comprende ranalexina y lisostafina.

4. Composición según la reivindicación 3 que comprende ranalexina a una concentración de 0,001 µg/ml a 100 µg ml, preferentemente de 5 a 50 µg/ml, y lisostafina a una concentración de 0,01 µg/ml a 100 µg/ml, preferentemente 0,15 a 1,05 µg/ml.

5. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, que comprende dermaseptina S3 y lisostafina.

6. Composición según la reivindicación 5, que comprende dermaseptina a una concentración de 0,001 µg/ml a 100 µg/ml, preferentemente de 5 a 10 µg/ml, y lisostafina a una concentración de 0,01 µg/ml a 100 µg/ml, preferentemente de 0,05 a 100 µg/ml.

7. Apósito o matriz porosa sólida que contiene una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

8. Matriz según la reivindicación 7 que es una venda, trapo, tampón, hilo médico, ropa quirúrgica, apósito o similar.

9. Dispositivo médico o instrumento quirúrgico impregnado o recubierto con una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

10. Método para tratar una superficie de un objeto o una superficie de una habitación para combatir la propagación bacteriana sobre la misma, comprendiendo dicho método aplicar a dicha superficie una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6.

11. Método según la reivindicación 10, en el que dicha composición se aplica como un rociador de aerosol.

12. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para su uso para combatir la propagación de las bacterias.

13. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para su uso en el tratamiento de una superficie de un objeto o una superficie de una habitación para combatir la propagación bacteriana sobre la misma.

14. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 para su uso para combatir o evitar una infección bacteriana en un paciente.

15. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 12 a 14, en la que las bacterias son bacterias Gram positivas, preferentemente Staphylococcus sp.

16. Composición según la reivindicación 15, en la que la bacteria es Staphylococcus aureus, preferentemente Staphylococcus aureus MRSA.

17. Composición que comprende un péptido catiónico que es ranalexina, dermaseptina S3 o una mezcla de las mismas y lisostafina para inhibir la propagación de un organismo procariota, en la que el organismo procariota tiene una pared celular que comprende una membrana de fosfolípidos que comprenden uno o más fosfolípidos acídicos y un saco de mureína que comprende por lo menos dos capas de mureína reticuladas mediante un puente peptídico que comprende por lo menos un enlace peptídico que conecta por lo menos dos residuos de glicina, en la que dicha composición desintegra dicha pared celular, y en la que dicha lisostafina hidroliza dicho enlace peptídico que conecta los por los menos dos residuos de glicina y en la que dicho péptido catiónico interactúa con dicha membrana.