ANTICUERPOS ANTI-IL-20 Y COMPONENTES DE UNION Y PROCEDIMIENTO DE USO EN ANTIINFLAMACION.

Un hibridoma, que comprende un hibridoma seleccionado del grupo de:

(a) el clon de hibridoma 2662.4.1.2.2.1 (ATCC [PTA-5350]);

(b) el clon de hibridoma 262.5.1.6.4.4 (ATCC [PTA-5351]); o

(c) el clon de hibridoma 262.7.1.3.2.4 (ATCC [PTA-5352])

Anticuerpos anti-IL-20 y componentes de unión y procedimiento de uso en antiinflamación.

Antecedentes de la invención

Las citocinas son proteínas pequeñas solubles que median una variedad de efectos biológicos que incluyen la regulación del crecimiento y la diferenciación de muchos tipos de células (véase, por ejemplo, Arai y col., Annu. Rev. Biochem. 59:783 (1990); Mosmann, Curr. Opin. Immunol. 3:311 (1991); Paul y Seder, Cell 76:241 (1994)). Las proteínas que constituyen el grupo de las citocinas incluyen interleucinas, interferones, factores estimulantes de colonias, factores de necrosis tumoral y otras moléculas reguladoras. Por ejemplo, la interleucina-17 humana es una citocina que estimula la expresión de interleucina-6, molécula de adhesión intracelular 1, interleucina-8, factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos, y la expresión de prostaglandina E2, y desempeña una función en la maduración preferencial de precursores hematopoyéticos CD34+ en neutrófilos (Yao y col., J. Immunol. 155:5483 (1995); Fossiez y col., J. Exp. Med. 183:2593 (1996)).

Los receptores que unen citocinas están compuestos normalmente por una o más proteínas integrales de membrana que unen la citocina con alta afinidad y transducen este acontecimiento de unión a la célula mediante las partes citoplásmicas de ciertas subunidades de receptores. Los receptores de citocinas se han agrupado en varias clases basándose de similitudes en sus dominios de unión a ligando extracelulares. Por ejemplo, las cadenas de receptores responsables de unir y/o transducir el efecto de interferones son miembros de la familia de los receptores de citocinas de la clase II basada en un dominio extracelular característico de 200 residuos.

Las actividades in vivo demostradas de citocinas y sus receptores ilustran el potencial clínico de, y la necesidad de, otras citocinas, receptores de citocinas, agonistas de citocinas y antagonistas de citocinas. Por ejemplo, las actividades in vivo demostradas de la familia de citocinas proinflamatorias ilustra el enorme potencial clínico de, y la necesidad de, antagonistas de moléculas proinflamatorias.

Los documentos US 2002/042366 y WO 01/46261 describen un procedimiento para tratar inflamación usando un antagonista de IL-20.

El documento WO 99/27103 describe un polipéptido de mamífero similar a citocinas, Zcyto10, y polinucleótidos, anticuerpos y usos correspondientes del mismo.

La presente invención proporciona un hibridoma que comprende un hibridoma seleccionado del grupo de:

(a) el clon de hibridoma 262.4.1.2.2.1 (ATCC [PTA-5350]);

(b) el clon de hibridoma 262.5.1.6.4.4 (ATCC [PTA-5351]); o

(c) el clon de hibridoma 262.7.1.3.2.4 (ATCC [PTA-5352]).

La presente invención también proporciona un anticuerpo monoclonal expresado por dicho hibridoma. La presente invención proporciona además un inmunoconjugado que comprende dicho anticuerpo monoclonal, y una composición farmacéutica que comprende dicho inmunoconjugado.

La presente invención también proporciona un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que puede competir por la unión a los polipéptidos de SEQ ID Nº: 2 ó 3 con dicho anticuerpo monoclonal.

La presente invención trata estas necesidades proporcionando anticuerpos para citocinas proinflamatorias y receptores de citocinas. En particular, la presente invención se refiere a anticuerpos para IL-20 (denominados indistintamente en lo sucesivo Zcyto10) y uno de sus receptores, IL-20RA/IL-20RB (denominados indistintamente en lo sucesivo ZcytoR7/pDIRSI), que incluye anticuerpos anti-IL-20, anticuerpos anti-IL-20RA, anticuerpos anti-IL-20RB y anticuerpos anti-IL-20RA/IL-20RB neutralizadores, además de proporcionar usos de los mismos en enfermedad inflamatoria, además de composiciones relacionadas y procedimientos.

Entre otras invenciones, la presente invención proporciona usos novedosos para anticuerpos neutralizadores para IL-20, y sus subunidades de receptores IL-20RA y IL-20RB, además del heterodímero de receptor, IL-20RA/IL-20RB. Específicamente, estos anticuerpos son útiles en el tratamiento de enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias humanas. La presente invención también proporciona fragmentos de anticuerpos de los mismos, es decir, para uso en enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias humanas. Los anticuerpos anti-IL-20, anticuerpos anti-IL-20RA, anticuerpos anti-IL-20RB neutralizadores y los anticuerpos de heterodímeros anti-IL-20RA/IL-20RB de la presente invención pueden usarse para antagonizar la actividad de IL-20 en el tratamiento de enfermedades humanas específicas tales como psoriasis, artritis psoriásica, artritis, endotoxemia, enfermedad inflamatoria del intestino (EII), colitis y otras afecciones inflamatorias desveladas en este documento.

Una secuencia de nucleótidos ilustrativa que codifica IL-20 humana se proporciona por SEQ ID Nº: 1. Los polipéptidos codificados correspondientes se muestran en SEQ ID Nº: 2. El análisis de un clon de ADNc humano que codifica IL-20 (SEQ ID Nº: 1) reveló un marco de lectura abierto que codificaba 176 aminoácidos (SEQ ID NO: 2), con la Met inicial como se muestra en SEQ ID Nº: 1 y SEQ ID Nº: 2. Se cree que los residuos amino 1-24 son una secuencia señal, y el polipéptido de IL-20 maduro se representa por la secuencia de aminoácidos compuesta por los residuos 25, una leucina hasta el residuo 176, un ácido glutámico, también definido por SEQ ID Nº: 3. Otra realización de la presente invención se define por las secuencias de SEQ ID Nº: 4 y SEQ ID Nº: 5. El polipéptido de SEQ ID Nº: 5 está compuesto por 151 residuos de aminoácidos en el que los aminoácidos 1-24 comprenden una secuencia señal y la secuencia madura está compuesta por los residuos de aminoácidos 25, una leucina, hasta el aminoácido 151, un ácido glutámico, también definido por SEQ ID Nº: 6. Otra variante activa está compuesta por los residuos de aminoácidos 33, una cisteína, hasta el residuo de aminoácidos 176 de SEQ ID Nº: 2. Esta variante también se define por SEQ ID Nº: 7. La IL-20 murina está codificada por SEQ ID Nº: 8-12. La IL-20 se desvela en la patente de EE.UU. en propiedad como la presente nº 6.576.743 y la publicación WIPO en propiedad como la presente WO 98/25228.

Un receptor para la IL-20 está compuesto por dos cadenas, una cadena alfa y una cadena beta. La cadena alfa, denominada en lo sucesivo IL-20RA, se llamó formalmente ZcytoR7. La cadena beta, denominada en lo sucesivo IL-20RB, se llamó formalmente DIRS1. Una secuencia de nucleótidos ilustrativa de IL-20RA es SEQ ID Nº: 13. El polipéptido codificado se muestra en SEQ ID Nº: 14. El análisis de un clon de ADNc humano que codifica IL-20RA (SEQ ID Nº: 13) reveló un marco de lectura abierto que codificaba 553 aminoácidos (SEQ ID Nº: 14) que comprende un dominio de unión a ligando extracelular de aproximadamente 221 residuos de aminoácidos (residuos 30-250 de SEQ ID Nº: 14 y SEQ ID Nº: 15), un dominio transmembrana de aproximadamente 24 residuos de aminoácidos (residuos 251-274 de SEQ ID Nº: 14) y un dominio intracelular de aproximadamente 279 residuos de aminoácidos (residuos 275-553 de SEQ ID Nº: 14). Por tanto, el dominio extracelular de la IL-20RA humana está compuesto por un polipéptido seleccionado del grupo que está constituido por SEQ ID Nº: 16, 17, 18 y 19, estando la subunidad de receptores de longitud completa compuesta por SEQ ID Nº: 14. La IL-20RA se desvela en la patente de EE.UU. en propiedad como la presente nº 5.945.511 y la publicación WIPO en propiedad como la presente WO 98/03029.

Una secuencia de nucleótidos ilustrativa que codifica IL-20RB humana (pDIRS1) se proporciona por SEQ ID Nº: 20. El polipéptido codificado se muestra en SEQ ID Nº: 21. Una IL-20RB variante se proporciona por SEQ ID Nº: 22 y 23. El dominio extracelular de IL-20RB está compuesto por un polipéptido seleccionado del grupo que está constituido por SEQ ID Nº: 24, 25, 26, 27, 28, 29 y 30. La IL-20RB se desvela en la patente de EE.UU. nº 6.586.228.

Como se describe más adelante, la presente solicitud describe polipéptidos aislados que comprenden una secuencia de aminoácidos que es idéntica al menos el 70%, al menos el 80%, o al menos el 90%, o superior al 95%, tal como el 96%, el 97%, el 98%, o superior al 99% o más, a SEQ ID Nº: 2, 3, 14, 15, 21 ó 23, en la que el polipéptido aislado se une específicamente con un anticuerpo que se une específicamente con un polipéptido que está constituido por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID Nº: 2, 3, 14, 15, 21 ó 23. Además,...

1. Un hibridoma, que comprende un hibridoma seleccionado del grupo de:

(a) el clon de hibridoma 262.4.1.2.2.1 (ATCC [PTA-5350]);

(b) el clon de hibridoma 262.5.1.6.4.4 (ATCC [PTA-5351]); o

(c) el clon de hibridoma 262.7.1.3.2.4 (ATCC [PTA-5352]).

2. Un anticuerpo monoclonal expresado por un hibridoma según la reivindicación 1.

3. Un anticuerpo monoclonal según la reivindicación 2, en el que el anticuerpo reduce o neutraliza la actividad proinflamatoria de IL-20 humana (SEQ ID Nº: 2 ó 3).

4. Un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo monoclonal según la reivindicación 2.

5. Un inmunoconjugado según la reivindicación 4, en el que el inmunoconjugado se une a IL-20 (SEQ ID Nº: 2 ó 3).

6. Un inmunoconjugado según la reivindicación 4 ó 5, en el que el inmunoconjugado reduce o neutraliza la actividad proinflamatoria de IL-20 humana (SEQ ID Nº: 2 ó 3).

7. Un inmunoconjugado según cualquiera de las reivindicaciones 4-6, en el que el inmunoconjugado está PEGizado.

8. Un inmunoconjugado según cualquiera de las reivindicaciones 4-6, en el que el inmunoconjugado comprende además un radionúclido, enzima, sustrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminiscente, marca de péptido, partícula magnética, fármaco o toxina.

9. Una composición farmacéutica que comprende un inmunoconjugado según cualquiera de las reivindicaciones 4-8.

10. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que puede competir por la unión a los polipéptidos de SEQ ID Nº: 2 ó 3 con un anticuerpo monoclonal según la reivindicación 2.

11. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo según la reivindicación 10, en el que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.

12. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo según la reivindicación 10, en el que el anticuerpo es un anticuerpo humanizado.

13. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo según la reivindicación 10, en el que el fragmento de anticuerpo es F(ab')2, F(ab)2, Fab', Fab, Fv o scFv.

14. Un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 10-13, en el que el anticuerpo reduce o neutraliza la actividad proinflamatoria de los polipéptidos de SEQ ID Nº: 2 ó 3.

15. Un inmunoconjugado que comprende un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 10-14.

16. El inmunoconjugado según la reivindicación 15, en el que el inmunoconjugado reduce o neutraliza la actividad proinflamatoria de los polipéptidos de SEQ ID Nº: 2 ó 3.

17. Un inmunoconjugado según la reivindicación 15 ó 16, en el que el inmunoconjugado está PEGizado.

18. Un inmunoconjugado según la reivindicación 15 ó 16, en el que el inmunoconjugado comprende además un radionúclido, enzima, sustrato, cofactor, marcador fluorescente, marcador quimioluminiscente, marca de péptido, partícula magnética, fármaco o toxina.

19. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 10-14.

20. Un procedimiento in vitro para reducir o inhibir la proliferación o diferenciación inducida por IL-20 de células hematopoyéticas y progenitores de células hematopoyéticas que comprende cultivar médula ósea o glóbulos sanguíneos periféricos con una composición que comprende un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 2-3 ó 10-14; un inmunoconjugado según cualquiera de las reivindicaciones 4-8 ó 15-18; o una composición farmacéutica según la reivindicación 9 ó 19;

en el que dicha reducción o inhibición se mide como una proliferación o diferenciación de las células hematopoyéticas en la médula ósea o glóbulos sanguíneos periféricos con respecto a médula ósea o glóbulos sanguíneos periféricos cultivados en ausencia de receptor de citocina soluble.

21. Un procedimiento según la reivindicación 20, en el que las células hematopoyéticas y las células progenitoras hematopoyéticas son células linfoides.

22. Un procedimiento según la reivindicación 21, en el que las células linfoides son macrófagos o células T.

23. Uso de un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 2-3 ó 10-14; un inmunoconjugado según cualquiera de las reivindicaciones 4-8 ó 15-18; o una composición farmacéutica según la reivindicación 9 ó 19, para la preparación de un medicamento para tratar una enfermedad inflamatoria inducida por IL-20.

24. Uso según la reivindicación 23 para reducir inflamación por IL-20 en un mamífero.

25. Uso de un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 2-3 ó 10-14; un inmunoconjugado según cualquiera de las reivindicaciones 4-8 ó 15-18; o una composición farmacéutica según la reivindicación 9 ó 19, para la preparación de un medicamento para suprimir una respuesta inflamatoria en un mamífero, en el que la supresión de dicha respuesta inflamatoria se define por una falta de aumento o disminución en el nivel de proteína amiloide A sérica en el mamífero.

26. Uso según las reivindicaciones 23-25, en el que la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica.

27. Uso según la reivindicación 26, en el que la enfermedad es una enfermedad inflamatoria crónica que comprende enfermedad inflamatoria del intestino, colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn, artritis, dermatitis atópica o psoriasis.

28. Uso según las reivindicaciones 23-25, en el que la enfermedad es una enfermedad inflamatoria aguda.

29. Uso según la reivindicación 28, en el que la enfermedad es una enfermedad inflamatoria aguda que comprende endotoxemia, septicemia, síndrome de choque tóxico o enfermedad infecciosa.

30. Un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 2-3 ó 10-14; un inmunoconjugado según cualquiera de las reivindicaciones 4-8 ó 15-18; o una composición farmacéutica según la reivindicación 9 ó 19, para tratar una enfermedad inflamatoria inducida por IL-20.

31. Un anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 2-3 ó 10-14; un inmunoconjugado según cualquiera de las reivindicaciones 4-8 ó 15-18; o una composición farmacéutica según la reivindicación 9 ó 19, para suprimir una respuesta inflamatoria en un mamífero, en el que la supresión de dicha respuesta inflamatoria se define por una falta de aumento o disminución en el nivel de proteína amiloide A sérica en el mamífero.