PROCEDIMIENTO DE ANTI-RESISTENCIA AL OXALIPLATINO.

- el tratamiento por unas medicaciones que contrarían o que esquivan los mecanismos de resistencia.

Es importante señalar que no existe en la técnica anterior ningún ensayo precoz de resistencia al tratamiento mediante oxaliplatino.

Resistencia al oxaliplatino: el oxaliplatino es una sal de platino que posee un espectro de actividad anti-tumoral mucho más amplio que las sales de platino convencionales tales como el cisplatino o el carboplatino. Los mecanismos de resistencia al cisplatino han podido ser dilucidados en su mayoría pero no dan cuenta de la resistencia al oxaliplatino. Más particularmente, las desregulaciones de los sistemas de reparación MMR o NER asociados a la resistencia al cisplatino no confieren ninguna resistencia al oxaliplatino. La resistencia al oxaliplatino seguía estando inexplicada hasta la presente invención. El oxaliplatino (CgH, 4N204Pt, [(1R,2R)-1,2-ciclohexanodiamina-N,N'][oxalato (2-)-O,O']platino) es un diaminociclohexano conocido por dañar el ADN. La presente invención se refiere a la resistencia al oxaliplatino, así como, llegado el caso, a unos derivados del oxaliplatino que dan lugar asimismo a una resistencia.

Dos estudios, llevados a cabo sobre el mismo modelo celular de cáncer ovárico (línea ATCC A2780), identifican un mecanismo potencialmente efector de la resistencia al oxaliplatino de este tipo de cáncer: un aumento de glutatión intracelular, así como una disminución de la acumulación intracelular de platino y de aductos de ADN-platino están asociados a la resistencia al oxaliplatino. Pero estos estudios no aportan ninguna demostración funcional a estas identificaciones. La hipótesis de implicación del glutatión se subraya en el documento Cancer Lett. 19 de julio de 1996, 105(1):5-14, Altered glutathione metabolism in oxaliplatin resistant ovarian carcinoma cells (El-akawi Z, Abu-hadid M, Perez R, Glavy J, Zdanowicz J, Creaven PJ, Pendyala L.), Department of Investigational Therapeutics, Roswell Park Cancer Institute, Buffalo, NY 14263, USA.

Una hipótesis de la intervención de mecanismos de reparación del ADN se presenta en el documento Cellular and Molecular Pharmacology of Oxaliplatin, Vol. 1, 227-235, Enero de 2002, Molecular Cancer Therapeutic, (Eric Raymond, Sandrine Faivre, Stephen Chaney, Jan Woynarowski y Esteban Cvitkovic).

Sin embargo, se puede citar el documento Arango et al. (Proceedings of the American Association for Cancer Research, vol. 43, página 457, 2002) que presenta un estudio sobre el mecanismo de la resistencia de células cancerígenas al oxaliplatino y que describe ciertos genes, como el gen p53, implicados en esta resistencia.

Se puede citar asimismo el documento de MacPherson et al. (Proceedings of the American Association for Cancer Research, vol. 43, páginas 407-408, 2002) que describe el uso in vitro de un agente antisentido dirigido contra la expresión de la proteína Bcl-xl para mejorar la eficacia del oxaliplatino para el tratamiento de células tumorales.

Sin embargo, estos estudios no permiten explicar con certeza los mecanismos de resistencia observada.

Así, la invención prevé paliar los inconvenientes de la técnica anterior, y en particular elucidar los mecanismos de resistencia de los cánceres, en particular de los cánceres colorrectales, con oxaliplatino, para poder usar un diagnóstico precoz de la resistencia durante el tratamiento, y concebir una conducta farmacológica racional que puede llegar a la puesta a punto de tratamientos "anti-resistencia" mejor determinados sobre estos mecanismos.

Inversamente, la realización de ensayos diagnósticos precoces de la resistencia permitirá, por lo menos, informar al médico cancerólogo de la necesidad de reorientar el tratamiento (por ejemplo introduciendo otros medicamentos en el esquema terapéutico). El beneficio será la reducción de efectos indeseables y la limitación de gastos en sanidad inútiles. Además, la disponibilidad de tratamientos específicos (medicamentos, terapias génicas, etc.) que contrarían o esquivan la resistencia a nivel de los mecanismos demostrados (apoptosis mitocondrial), restaurará la eficacia del oxaliplatino. El beneficio será evidentemente médico pero asimismo económico: el beneficio de eficacia justificará el mantenimiento y la extensión del uso del oxaliplatino.

Los inventores han tenido que resolver varios problemas técnicos incluyendo la realización de un modelo experimental fiable (selección y caracterización de líneas celulares resistentes al oxaliplatino a partir de líneas referenciadas) y la exploración de este modelo (identificación de la alteración de la apoptosis mitocondrial como marcador de la resistencia específica al oxaliplatino).

Los inventores han conseguido demostrar que la resistencia al oxaliplatino está asociada a la expresión anormal de genes de apoptosis mitocondrial. La técnica anterior describe unos compuestos inductores de apoptosis que actúan directa y específicamente a nivel mitocondrial. Sin embargo, la relación entre la apoptosis mitocondrial (AM) y unos mecanismos de resistencia al oxaliplatino no se describe o se sugiere de ninguna manera en la técnica anterior.

Los inventores han puesto a punto así un método de diagnóstico de la resistencia al oxaliplatino, que se basa en la demostración de marcadores de la alteración de la apoptosis mitocondrial en las células tumorales, mediante cualquier medio apropiado: bioquímico como la inmunodetección, y genético como la secuenciación o la cuantificación de los transcritos.

Así, según un primer aspecto, la invención se refiere a un procedimiento de detección, in vitro o in vivo, de la resistencia de células cancerígenas a un tratamiento con oxaliplatino, que comprende la medición de la apoptosis mitocondrial de células cancerígenas tratadas o que pueden o que deben ser tratadas con oxaliplatino, comprendiendo esta medición por lo menos la medición de la expresión del gen de apoptosis mitocondrial que codifica la proteína Bar. Mediante "resistencia de células cancerígenas tratadas con oxaliplatino" se entiende que las células cancerígenas, de un paciente o en cultivo, resisten al tratamiento con oxaliplatino de tal manera que este tratamiento no resulta totalmente satisfactorio porque no permite destruirlas a un nivel suficiente.

Este procedimiento de detección se refiere en particular a los cánceres colorrectales. Sin embargo, otros cánceres cuyo tratamiento comprende la administración de oxaliplatino...

b) comparar el nivel medido con una muestra de control de células no resistentes al oxaliplatino.

7. Procedimiento según la reivindicación 4, caracterizado porque comprende la puesta en contacto de las células cancerígenas con un anticuerpo capaz de reconocer la proteína Bax de apoptosis mitocondrial o uno de sus fragmentos biológicamente activos, y la demostración del complejo antígeno-anticuerpo eventualmente formado.

8. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque usa una secuencia cebador o sonda específica del gen Bax de apoptosis mitocondrial.

9. Procedimiento según la reivindicación 8, caracterizado porque comprende: