ALERGENO DE ACAROS DE POLVO DOMESTICO.

Un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 60% de identidad con la secuencia de aminoácidos SEQ ID No.

1 o que comprende al menos un fragmento de aminoácidos de al menos 8 restos de aminoácidos consecutivos de la secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1 o que tiene reactividad cruzada inmunológica para la secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1 o sus fragmentos, en el que la secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1 codifica un alérgeno y el polipéptido comprende al menos un epítope de células T reconocido por un receptor de células T específico para una molécula que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1

Alérgeno de ácaros de polvo doméstico.

La presente invención se refiere a un polipéptido que tiene propiedades alergénicas.

Más de 25% de la población en los países industrializados sufren de alergias mediadas por IgE. Los pacientes alérgicos se caracterizan por un aumento de la producción de anticuerpos IgE contra los antígenos perjudiciales per se (es decir, alérgenos). Los síntomas inmediatos de alergia de tipo I (rinoconjuntivitis alérgica, asma, dermatitis, choque anafiláctico) están provocados por la reacción cruzada inducida por alérgenos de los anticuerpos de IgE unidos a mastocitos y la liberación de mediadores biológicamente activos (por ejemplo, histamina, leukotrienos).

Los ácaros de polvo doméstico (HDM) representan una de las fuentes más importantes de alérgenos en todo el mundo. Casi el 10% de la población y más del 50% de pacientes alérgicos son sensibles a los alérgenos de ácaros. El HDM Dermatophagoides pteronyssinus (Der p) es predominantes en Europa Central. Los alérgenos de Der p comprenden más de 30 proteínas o glicoproteínas de las que veintiún alérgenos se han caracterizado hasta ahora. Los alérgenos de Grupo 1 y 2 (Der p 1 y Der p 2) representan los alérgenos más importantes de HDM, que se reconocen por más de un 80% de pacientes alérgicos a Der p, pero también otros alérgenos HDM (por ejemplo, Der p 5 y Der p 7) se mostraron que representan alérgenos Der p importantes a pesar de una frecuencia de unión a IgE considerablemente menor.

Weghofer M. et al. (Clin Exp Allergy 35 (2005): 1384-1391) mostraron que alérgenos de ácaros de polvo recombinantes son capaces de inhibir la reactividad de IgE y por lo tanto se puede usar para ensayos de diagnóstico y terapia de alergia Der p.

Pittner G. et al. (Clin Exp Allergy 34 (2004): 597-603) describieron los procedimientos de ensayo de diagnóstico que implican los alérgenos de ácaros de polvo principales Der p 1 y Der p 2 y alérgenos de ácaros de polvo de alta reactividad cruzada (por ejemplo Der p 10) que se va a usar para la selección de pacientes para inmunoterapia con extractos de Der p.

Vrtala S. et al. (Methods 32 (2004): 313-320) describen estrategias para la producción y evaluación de derivados de alérgenos que muestran una actividad de alergénica reducida (por ejemplo, moléculas hipo energéticas) y adecuadas para la vacunación.

El documento EP 1 612 219 A1 se refiere a alérgenos derivados de ácaros de polvo doméstico (Der p).

Los extractos de HDM brutos, que se usan actualmente para la diagnosis y terapia de pacientes alérgicos a HDM, están solamente normalizados para Der p 1 y Der p 2, mientras que otros alérgenos importantes están solamente presentes en pequeñas cantidades en los extractos de HDM.

Es un objeto de la presente invención proporcionar polipéptidos novedosos con propiedades alergénicas e hipoalergénicas que se pueden usar en diagnosis, terapia y prevención de alergias, en particular de ácaros de alergia al polvo doméstico.

Por lo tanto, la presente invención se refiere a un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 60% de identidad con la secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1 o que comprende al menos una un fragmento de aminoácidos de al menos 8 restos de aminoácidos consecutivos de la secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1 o que tienen una reactividad cruzada para las secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1 o sus fragmentos, en la que la secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1 codifica un alérgeno y el polipéptido comprende al menos un epítope de las células T reconocido por un receptor de células T específico para una molécula que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1. El polipéptido con la secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1 (MKFNIIIVFI SLAILVHSSY AANDNDDDPT TTVHPTTTEQ PDDKFECPSR FGYFADP-KDP HKFYICSNWE AVHKDCPGNT RWNEDEETCT) es un nuevo alérgeno principal de Der p que puede ser útil, por ejemplo, para diagnosis y terapia de pacientes alérgicos a Der p. El nuevo alérgeno de Der p tiene un peso molecular de aproximadamente 8 kDa y se une a IgE entre más de un 50% de pacientes alérgicos a ácaros.

La alta frecuencia de unión a IgE del alérgeno con la secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1 y la observación que éste alérgeno es biológicamente activo lo hace una molécula importante molécula para diagnosis de alergia de ácaros de polvo domésticos en un individuo.

Además, este nuevo alérgeno de ácaros también es útil para la terapia o prevención de alergia de ácaros de polvo domésticos. El polipéptido de acuerdo con la presente invención induce altas titulaciones de anticuerpos de IgG en mamíferos. Si estos anticuerpos específicos de IgG se administran a un individuo, el alérgeno de ácaros de polvo doméstico expuesto añadido a una muestra, preferiblemente suero, obtenido a partir de un individuo alérgico a ácaros de polvo domésticos, que comprende moléculas de IgE de dicha unión a IgE individual a este nuevo alérgeno está inhibido. Esto muestra que la inmunoterapia específica de alérgeno con este nuevo alérgeno a ácaros inducirá el bloqueo de anticuerpos IgG en seres humanos. La importancia de la inducción de bloqueo de los anticuerpos de IgG para una inmunoterapia exitosa se ha mostrado recientemente en ensayos de inmunoterapia con alérgenos definidos y derivados de alérgenos (Gafvelin, G., et al. (2005) Int Arch Allergy Inmunol 138: 59; Jutel, M., et al. (2005) J Allergy Clin Inmunol 116: 608). Se indujeron altos niveles de anticuerpos de IgG específicos de alérgeno que inhibían la desgranulación de basófilos inducida por alérgeno (Niederberger, V., et al. (2004) PNAS USA 101 Suppl 2: 14677). Las modificaciones del polipéptido de acuerdo con la presente invención que muestra propiedades alergénicas conducen a derivados hipoalergénicos con actividad alergénica reducida e inmunogenicidad conservada puede además mejorar la inmunoterapia mediante la reducción de efectos secundarios anafilácticos (Valenta, R., et al. (2004) Adv Inmunol 82: 105). Los derivados hipo alergénicos se pueden producir mediante técnicas biológicas moleculares o mediante la síntesis de péptidos derivados de las células T o los epítopes de células B del alérgeno (Kyte, J., and R. F. Doolittle. (1982) J Mol Biol 157: 105).

Como se usa en el presente documento, un "polipéptido" se refiere a una molécula que comprende al menos 6 restos de aminoácidos, preferiblemente al menos 8 restos de aminoácidos.

El término "identidad", como se usa en el presente documento, indica si cualquiera de dos (o más) secuencias de péptido, polipéptido o proteína tienen la secuencia de aminoácidos que son "idénticas "en cierto grado ("% de identidad") entre sí. Este grado se puede determinar usando los algoritmos de ordenador conocidos tal como el programa "FAST A", que usa por ejemplo, los parámetros por como en Pearson et al. (1988) PNAS USA 85: 2444 (otros programas incluyen el paquete de programas GCG (Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research (1984) Nucleic Acids Res., 12, 387-395), BLASTP, BLASTN, FASTA (Atschul, S.F., et al., J Molec Biol 215: 403 (1990); Guide to Huge Computers, Martin J. Bishop, ed., Academic Press, San Diego, 1994, y Carilloet al, (1988)SIAM J Applied Math 48: 1073). Por ejemplo, la herramienta BLAST de la base de datos NCBI se puede usar para determinar la identidad. Otros programas comercialmente o públicamente disponibles incluyen, el programa DNAStar "Meg-Align" (Madison, WI) y el programa "Gap" del Grupo de Ordenadores de Genética de la Universidad de Wisconsin (UWG) (Madison, WI)). El porcentaje de identidad de las moléculas de proteína se puede además determinar, por ejemplo, mediante comparación de la información de secuencias usando el programa de ordenadores GAP (por ejemplo Needleman et al., (1970) J. Mol. Biol. 48: 443, revisado por Smith y Waterman (1981) Adv. Appl. Math. 2: 482). En resumen, el programa GAP define identidad como el número de símbolos adecuados (es decir, nucleótidos o aminoácidos) que son idénticos, dividido por el número total de símbolos en la más corta de las dos secuencias. Los parámetros por defecto del programa GAP puede incluir:(1) una matriz de comparación unaria (que contiene un valor de 1 para identidades y para no identidades) y la matriz de comparación pesada de Gribskov et al. 14: 6745, como se describe por Schwartz y Dayhoff, eds., ATLAS OF PROTEIN SEQUENCE AND STRUCTURE, National Biomedical Research Foundation, p. 353-358 (1979); (2) una penalización de...

1. Un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 60% de identidad con la secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1 o que comprende al menos un fragmento de aminoácidos de al menos 8 restos de aminoácidos consecutivos de la secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1 o que tiene reactividad cruzada inmunológica para la secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1 o sus fragmentos, en el que la secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1 codifica un alérgeno y el polipéptido comprende al menos un epítope de células T reconocido por un receptor de células T específico para una molécula que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1.

2. Polipéptido de acuerdo con la reivindicación 1, que se caracteriza porque la secuencia de aminoácidos es al menos 70%, preferiblemente al menos 80%, más preferiblemente al menos 90%, lo más preferiblemente al menos 95%, en particular 100%, idéntica a la secuencia de aminoácidos SEQ ID No. 1.

3. Polipéptido de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, que se caracteriza porque dicho polipéptido es hipoalérgenico.

4. Polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que se caracteriza porque dichos fragmentos de aminoácidos están fusionados conjuntamente en un orden diferente del orden de dichos fragmentos en la SEQ ID No. 1.

5. Polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que se caracteriza porque dicho al menos un fragmento de aminoácido se selecciona entre el grupo constituido por moléculas de aminoácido que comprende los aminoácidos NDDDPTTTV, PTTTVHPTT, TTTVHPTTT, TTVHPTTTE, TVHPTTTEQ, TTTEQPDDK, TTEQPDDKF, FYICSNWEA, YICSNWEAV, ICSNWEAVH, SNWEAVHKD, AVHKDCPGN y TRWNEDEET.

6. Molécula de ADN que codifica un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

7. Vector que comprende una molécula de ADN de acuerdo con la reivindicación 5.

8. Célula transformada con un vector de acuerdo con la reivindicación 6.

9. Anticuerpo que se une a un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.

10. Formulación de vacuna que comprende un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 9.

11. Uso de un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para la diagnosis in vitro de una alergia, en particular de la alergia a ácaros de polvo doméstico, en un individuo.

12. Uso de un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 9 para la preparación de un medicamento para la inmunoterapia de una alergia, en particular de alergia a ácaros de polvo doméstico.

13. Uso de un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o un anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 9 para la preparación de un medicamento para la prevención de sensibilización a alérgeno, en particular de sensibilización a alérgeno de ácaros de polvo doméstico.

14. Uso de acuerdo con la reivindicación 12 ó 13, que se caracteriza porque dicho medicamento además contiene adyuvantes, diluyentes, conservantes o sus mezclas.

15. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 12 a 14, que se caracteriza porque el medicamento comprende 10 ng a 1 g, preferiblemente 100 ng a 10 mg, especialmente 0,5 µg a 200 µg de dicho polipéptido.