SECUENCIA DE ÁCIDO NUCLÉICO Y PROTEINA ASÍ COMO POLIPEPTIDOS QUE CODIFICAN MANITOL-DESHIDROGENASAS O PARTES DE LOS MISMOS ASÍ COMO SU PRODUCCIÓN Y USO EN DIAGNOSTICO Y TERAPIA.

Secuencia de ácido nucleico y proteína así como polipéptidos que codifican manitol-deshidrogenasas o partes de los mismos así como su producción y uso en diagnóstico y terapia Las más distintas substancias causan en determinadas personas reacciones alérgicas. No son conocidas solo alergias frente a componentes de animales, como por ejemplo pelos de gato, sino también alergias frente a plantas o partes de plantas, como polen de flores. Pero también son conocidas alergias frente a microorganismos, como por ejemplo mohos. Noeldner y col. [Physiological and Molecular Plant Pathology (1994) pág. 281-289] describen la purificación y caracterización de una manitol-deshidrogenasa del hongo patógeno para los tomates Cladosporium fulvum. Era objetivo de este trabajo aclarar manifiestamente el mecanismo a través del cual los hongos fitopatógenos obtienen y utilizan el carbono de sus células huésped. Hult y col [Auch. Microbiol. 128 (1980) pág. 253-255] describe la distribución del NADPH que genera el ciclo del manitol bajo distintas especies de hongos. Aquí se trata de un trabajo de investigación básica. De este estado de la técnica no se desprende indicación alguna anterior por la que los polipétidos reivindicados puedan jugar un papel esencial en enfermedades alérgicas. Es objeto de la presente invención una vacuna para la desensibilización de pacientes frente a una alergia por mohos así como el uso del alérgeno principal del moho Cladosporium herbarum en diagnóstico y terapia. En el marco de la presente invención se ha establecido que en el caso de este alérgeno principal sorprendentemente se trata de una manitoldeshidrogenasa (MtDH). Otro objeto de la presente invención se refiere a un alérgeno principal de Alternaria alternata. Se da a conocer un polipéptido que presenta al menos 10 aminoácidos consecutivos de la secuencia de aminoácidos con la Secuencia ID Nº 1. La secuencia de aminoácidos está representada en la Fig. 1 al igual que la correspondiente secuencia del ADN. La invención se refiere también a los polipéptidos con las Sec. ID Nº 4, 5 y 6. Se da a conocer además la secuencia completa de un polipéptido que codifica una manitol-deshidrogenasa. La Sec. ID Nº 7 representa la secuencia del ácido nucleico y la Sec. ID Nº 8 la secuencia de aminoácidos de este. Las secuencias están representadas en la Figura 3. Además se da a conocer un polipéptido que presenta al menos 10 aminoácidos consecutivos de la secuencia de aminoácidos con la Secuencia ID Nº 11. La secuencia de aminoácidos está representada en la Fig. 4., esta representa un alérgeno principal que se aisló de Alternaria alternata. La secuencia de aminoácidos del alérgeno principal de Alternaria alternata, que se trata de la manitol-deshidrogenasa, está reproducida en la Fig. 5 en código de letras únicas junto con la secuencia de ADN (Secuencia ID Nº 12) que la codifica así como las secuencias de nucleótidos flanqueantes en el extremo 5 y el 3. Un polipéptido presenta al menos un epítopo. Por un epítopo se entiende una zona a la que pueden unirse anticuerpos. Fundamentalmente hay epítopos lineales. En este caso los aminoácidos que forman el epítopo se encuentran unos al lado de otros. Sin embargo son más frecuentes los llamados epítopos conformacionales. Estos se forman por el plegado del polipéptido. De este modo, aminoácidos que no están próximos en la secuencia, debido al plegamiento tridimensional del polipéptido, pueden aproximarse espacialmente y unirse a esta estructura superficial un anticuerpo. Preferiblemente los epítopos son específicos para un moho. Básicamente pueden producirse anticuerpos contra casi todas las secuencias de aminoácidos usando técnicas adecuadas, por ejemplo usando adyuvantes. Los polipéptidos conforme a la invención juegan sin embargo en el diagnóstico y terapia un papel fundamental. Por consiguiente los polipéptidos presentan preferiblemente epítopos específicos, siendo los epítopos específicos para un moho. Frecuentemente las proteínas o polipéptidos que proceden de un determinado organismo presentan similitudes con una proteína o polipéptido correspondiente que procede de un organismo emparentado. Por consiguiente es posible que anticuerpos que estén dirigidos contra un epítopo de un moho determinado, reaccionen también con un epítopo correspondiente de un moho emparentado. Cuanto más específico es un epítopo, tanto menos reaccionan anticuerpos dirigidos contra él con un epítopo de un polipéptido homólogo de un organismo emparentado. Los polipéptidos presentan por consiguiente preferiblemente aquellos epítopos que son específicos para un moho. Con especial preferencia los polipéptidos presentan aquellos epítopos que son específicos para un moho del género Cladosporium. Con muy especial preferencia los polipéptidos presentan un epítopo que es específico para Cladosporium herbarum. Los anticuerpos que están dirigidos contra un epítopo de este tipo no reaccionan con otros polipéptidos. En el marco de la presente invención se ha encontrado que el polipéptido con la secuencia de aminoácidos ID Nº 1 codifica una manitol-deshidrogenasa. Son objeto de la presente invención vacunas con partes de esta secuencia de 2   aminoácidos con al menos 11 aminoácidos. Los polipéptidos conforme a la invención presentan preferiblemente por lo menos 20 aminoácidos consecutivos de la secuencia con la Secuencia ID Nº. Preferiblemente son polipéptidos tales que presenten por lo menos 50 aminoácidos consecutivos, y con muy especial preferencia polipéptidos tales que presenten por lo menos 100 aminoácidos consecutivos de la secuencia de aminoácidos con la Secuencia ID Nº 1. La invención se refiere también a una vacuna con pelipéptido de extremo N con la secuencia PGQQATKHESLLDQLS (Sec ID Nº 4) así como dos polipéptidos de extremo C terminal con la secuencia LDTGLSDFWK (Sec ID Nº 5) y MGRDGLAKEL (Sec ID Nº 6). Es también objeto de la invención una vacuna con un polipéptido con la Secuencia ID Nº 8, así como partes de este polipéptido, que contienen un epítopo. Las partes de la Secuencia ID Nº 8 presentan por lo menos 11, preferiblemente por lo menos 20, todavía más preferiblemente por lo menos 50 y con muy especial preferencia por lo menos 100, aminoácidos consecutivos de la secuencia con la Secuencia ID Nº 8. Otro objeto de la presente invención se refiere a una vacuna con un polipéptido con la Secuencia ID Nº 11 así como partes de este polipéptido que contienen un epítopo. Tales epítopos son específicos para Alternaria, más precisamente para Alternaria alternata. Las partes de la Secuencia ID Nº 11 presentan por lo menos 11, preferiblemente por lo menos 20, todavía más preferiblemente por lo menos 50 y con muy especial preferencia por lo menos 100, aminoácidos consecutivos de la secuencia de aminoácidos con la Secuencia ID Nº 11. Preferiblemente estos polipéptidos presentan por lo menos un epítopo. Es posible, por ejemplo, detectar mediante determinaciones de hidrofilia/hidrofobia qué partes del polipéptido son especialmente adecuadas para reacciones inmunológicas. Esto puede realizarse, por ejemplo, mediante programas informáticos adecuados. Como alternativa a esto es también posible producir, usando el llamado método Pepscan, fragmentos de la secuencia y hacer ensayos con ellos por reacción con sueros de pacientes alérgicos si los fragmentos cortos contienen epítopos procedentes. Además, debe aclararse si a este respecto se trata de epítopos que son específicos para un moho, en especial para un moho del género Cladosporium y/o Alternaria y en especial para Cladosporium herbarum y/o Alternaria alternata. Para la determinación se utilizan series de sueros adecuados. El Cladosporium es un género de hongos que pertenece a los mohos. Las especies de Cladosporium son muy frecuentes y se encuentran preferiblemente en zonas pantanosas, en bosques y en jardines, pues crecen bien sobre plantas putrefactas o sobre follaje. Además, se encuentran en invernaderos y en frigoríficos mal limpiados. También crece el Cladosporium sobre productos textiles, p.ej. tejidos de lino. El Cladosporium puede desencadenar reacciones alérgicas, como p.ej. rinitis fluida, tos, estornudos, urticaria o asma (alergia a los mohos). La Alternaria es un género de hongos que también pertenece a los hongos. Las especies de Alternaria se encuentran preferiblemente en zonas pantanosas, en bosques y en jardines, pues crecen bien sobre plantas putrefactas o sobre follaje. En el ámbito doméstico se encuentran sobre todo en la harina, frutas y verduras. Pero también crecen sobre productos textiles, p.ej. tejidos de lino. La Alternaria puede desencadenar reacciones alérgicas, como p.ej. rinitis fluida, tos, estornudos, urticaria o asma (alergia a los mohos). Con el descubrimiento de la secuencia de aminoácidos... [Seguir leyendo]

1. Vacuna para la desensibilización de pacientes frenta a una alergia por mohos, caracterizada porque contiene por lo menos un polipéptido con por lo menos un epítopo que presenta por lo menos 11 aminoácidos consecutivos de la secuencia de aminoácidos con la Secuencia ID Nº 1 o la Secuencia ID Nº 8 o una secuencia seleccionada de la Secuencia ID Nº 4, 5 y 6 o que presenta por lo menos 11 aminoácidos consecutivos de la secuencia de aminoácidos con la Secuencia ID Nº 11. 2. Uso de un polipéptido con por lo menos un epítopo que presenta por lo menos 11 aminoácidos consecutivos de la secuencia de aminoácidos con la Secuencia ID Nº 1 o la Secuencia ID Nº 8 o una secuencia seleccionada de la Secuencia ID Nº 4, 5 y 6 o que presenta por lo menos 11 aminoácidos consecutivos de la secuencia de aminoácidos con la Secuencia ID Nº 11 para la fabricación de una vacuna contra una alergia por mohos. 3. Uso de un polipéptido que presenta por lo menos 11 aminoácidos consecutivos de la secuencia de aminoácidos con la Secuencia ID Nº 1 o la Secuencia ID Nº 8 o una secuencia seleccionada de la Secuencia ID Nº 4, 5 y 6 o que presenta por lo menos 11 aminoácidos consecutivos de la secuencia de aminoácidos con la Secuencia ID Nº 11 para la detección diagnóstica de una enfermedad, concretamente de una alergia. 4. Uso conforme a la reivindicación 3, caracterizado porque la enfermedad es una alergia contra mohos. 26   Figura 1 27   Figura 2 Alineamiento de las NADP-MtDH de C. fulvum y C. herbarum sobre la base de los datos de ADN y proteínas presentes Alineamiento de las secuencias de aminoácidos derivadas de las manitol-deshidrogenasas de Cladosporium herbarum y Cladosporium fulvum. -... significa que en ese sitio la secuencia de aminoácidos de C. herbarum todavía debe secuenciarse. 28   Fig. 3: Secuencia completa de nucleótidos y de proteína de la MtDH de Cladosporium herbarum 29     Fig. 4: MtdH de Alternaria alternata (Sec. ID Nº 11) MtDH de Alternaria alternata 31   Fig. 5: Secuencia de ADN (Sec. ID Nº 12) de la manitol-deshidrogenasa de Alternaria alternata 32   Fig. 6: Comparación de la secuencia de ADN de C. herbarum y A. alternata 33