Polipéptidos hipoalergénicos para el tratamiento de alergia contra ácaros del polvo doméstico.

Un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº 9.

Polipéptidos hipoalergénicos para el tratamiento de alergia contra ácaros del polvo doméstico Campo de la invención La presente invención se refiere al campo de la inmunoterapia contra alergia mediada por IgE, particularmente alergia contra ácaros del polvo doméstico (HDM) . Más específicamente, la invención se refiere al diseño de una nueva vacuna hipoalergénica recombinante contra alergia a HDM.

Antecedentes de la invención Los ácaros del polvo doméstico (HDM) son uno de los factores de riesgo más importante asociados con el desarrollo de enfermedades alérgicas tales como rinitis, dermatitis atópica y asma (1, 2) y más del 50 % de todos los pacientes alérgicos en todo el mundo padecen alergia a HDM (3) .

Hasta ahora, se han identificado y caracterizado 23 proteínas diferentes como alérgenos HDM (4, 5) . Los alérgenos del grupo 1 y grupo 2 de Dermatophagoides pteronyssinus representan los alérgenos HDM clínicamente más importantes con frecuencias de unión a IgE de más del 80 % (6-9) , y que pueden encontrarse a elevadas concentraciones en ácaros y en heces de ácaros (10, 11) .

La inmunoterapia específica de alérgeno (SIT) representa el único enfoque causativo y modificador de enfermedad con efectos duraderos (12-16) , que se basa en la administración de dosis crecientes de los alérgenos que provocan enfermedad. Actualmente, se realiza SIT con extractos de alérgeno natural. Pero varios estudios recientes han revelado la baja calidad de los extractos de alérgeno natural del polen, caspa de animales y ácaros del polvo doméstico que pueden limitar la eficacia clínica de SIT (17-19) . Además, la SIT puede inducir efectos secundarios graves en pacientes alérgicos, que limitan la amplia aplicabilidad de este tratamiento en particular para alergia a ácaros del polvo doméstico.

Se ha hecho muchos esfuerzos por diseñar derivados hipoalergénicos recombinantes para mejorar la seguridad y eficacia de la SIT. Y ya se han desarrollado varios derivados hipoalergénicos de los alérgenos de ácaros del grupo 2 y han demostrado ser adecuados para inmunoterapia (20-26) . En contraste, existen solamente unos pocos derivados hipoalergénicos de alérgenos de ácaros del grupo 1, que no están bien caracterizados (27, 28) .

La mayoría de las estrategias que usan derivados hipoalergénicos solamente pueden tratar la alergia a Der p 1 o Der p 2 y más del 50 % de los pacientes alérgicos a HDM reaccionan con ambos alérgenos, Der p 1 y Der p 2 (29) . Las ventajas de moléculas híbridas son que contienen todos los epítopos de células T en una molécula y estudios previos demostraron que moléculas híbridas inducen respuestas más fuertes y más tempranas de IgG que las moléculas más pequeñas individuales (30, 31) .

El WO 2009/118642 A2 describe proteínas híbridas hipoalergénicas compuestas por fragmentos de alérgenos Der p 1 y Der p 2. Puede encontrarse una descripción similar en Asturias et al. (2009) Clinical & Experimental Allergy 39, 1088-1098. Sin embargo, uno de los derivados, es decir, QM1, descrito en Asturias mostró casi la misma reactividad de IgE que el alérgeno natural. El segundo derivado descrito por Asturias, es decir, QM2, mostró reactividad reducida de IgE pero no se demuestra que la inmunización con este derivado indujera anticuerpos IgG específicos para el alérgeno Der p 1. Además, la inhibición media de las IgE de pacientes alérgicos a ácaros del polvo doméstico por anticuerpos IgG anti-QM2 en una mezcla de Der p 1 y Der p 2 no fue mator de un 20 % de inhibición media.

Bussieres et al. (2010) International archives of allergy and immunology 153/2, 141-151 describen estudios sobre proteínas de fusión recombinantes que ensamblan los alérgenos Der p 1 y Der p 2 de Dermatophagoides pteronyssinus. Estos derivados muestran ninguna reducción o solamente una reducción moderada de aproximadamente 10 veces de su actividad alergénica y no se ha investigado si la inmunización con estos derivados induce IgG específica de alérgeno que inhiba la unión de IgE de pacientes alérgicos.

Chen et al. (2008) Molecular Immunology Volumen 45, Tema 9, 2486-2498 describe estudios sobre la reducción de la alergenicidad de Der p 2 por ingeniería genética. Este derivado incluye solamente Der p 2 pero no Der p 1 y por lo tanto no puede usarse para tratar a pacientes alérgicos a Der p 1.

Los inventores de esta solicitud usaron la tecnología de híbridos para construir una vacuna de combinación hipoalergénica para inmunoterapia de alergia a HDM. Las dos proteínas mosaico construidas consisten en fragmentos derivados de Der p 1 y Der p 2. Una construcción contenía los aminoácidos originales de los dos alérgenos de tipo silvestre (Der p 2/1C, también mencionados en este documento como Dp 2/1 C) mientras que en la otra construcción los restos de cisteína se remplazaron con restos de serina (Der p 2/1 S, también mencionados en este documento como Dp 2/1 S) . Estas dos proteínas mosaico se caracterizan por una ausencia casi completa de reactividad IgE y actividad alergénica y por lo tanto son diferentes del QM1 descrito por Asturias y los derivados

descritos por Bussieres. Ambos derivados incluyen todos los elementos de secuencia de Der p 1 y por lo tanto son diferentes de los derivados descritos por Chen. Los anticuerpos IgG inducidos por ambos derivados (es decir, Der p 2/1C y Der p 2/1S) inhibieron la unión de IgE de pacientes alérgicos a cada uno de los dos alérgenos, Der p 1 y Der p 2 (Tabla I) , que no se había mostrado para la IgG inducida por QM2 hecho por Asturias.

Inesperadamente, los anticuerpos IgG inducidos por Der p 2/1S que difiere solamente por el remplazo de los restos de cisteína en restos de serina, inhibieron la unión de IgE de pacientes alérgicos a Der p 1 más del doble de lo inducido por inmunización con Der p 2/1C (véase el ejemplo 6 y los datos en la Tabla I) . La presente invención por lo tanto se refiere específicamente a los polipéptidos que comprenden la secuencia de aminoácidos de Der p 2/1 S o sustancialmente la misma secuencia de aminoácidos.

Sumario de la invención Un primer aspecto de la invención es un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº 9 o 7.

Otro aspecto de la invención es un polinucleótido que codifica el polipéptido de esta invención.

Otro aspecto más de esta invención es un vector o plásmido, que comprende el polinucleótido de la presente invención.

Otro aspecto de la invención es una composición farmacéutica que comprende el polipéptido de la invención, el polinucleótido de la invención, o el vector o plásmido de la invención; y un diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Otro aspecto de la invención es el uso del polipéptido de la invención para la prevención y/o tratamiento de alergia, preferiblemente de alergia a ácaros del polvo doméstico. La invención también se refiere al uso del polipéptido de la invención para la fabricación de un medicamento para la prevención y/o tratamiento de alergia, preferiblemente de alergia a ácaros del polvo doméstico.

Otro aspecto más de la invención es un método para tratar y/o prevenir un trastorno alérgico, que comprende administrar a un individuo que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz del polipéptido o polinucleótido de esta invención. Otro aspecto más de la invención es un método para tratar y/o prevenir un trastorno alérgico, que comprende administrar a un individuo que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición farmacéutica o vacuna de esta invención.

Breve descripción de los dibujos La Figura 1A muestra una ilustración del modo en que se construyeron las proteínas mosaico Der p 2/1. Se volvieron a ensamblar tres fragmentos de Der p 1 que comprende los aminoácidos (aa) 1-84, aa 85-143 y aa 144-222 (1.1, 1.2 y 1.3) y dos fragmentos de Der p 2 que comprenden los aa 1-53 y aa 54-129 (2.1 y 2.2) en el orden 1.3, 2.2, 1.2, 2.1, 1.1. Dp 2/1C contiene la secuencia original de aa de Der p 1 y Der p 2 con doce restos de cisteína (líneas punteadas) , en Dp 2/1 S los restos de cisteína se intercambiaron con restos de serina.

La Figura 1B y C muestran las secuencias de ADN con codones optimizados y los correspondientes aminoácidos de Der p2/1C (B) y Derp 2/1S (C) .

La Figura 2 muestra un gel de SDS-PAGE teñido con Coomassie con las proteínas mosaico Der p 2/1C y Der p 2/1S expresadas (carriles 1) y purificadas (carriles 2) (A) . Y un gel de SDS-PAGE teñido con Coomassie que contenía Der p 2/1C y Der p 2/1 S purificadas se separó en condiciones reductoras (carriles r) y no reductoras (carriles nr) y un marcador molecular (carriles M) (B) .

La... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº 9.

2. El polipéptido de la reivindicación 1, que comprende una estructura seleccionada entre el grupo que consiste en:

(I) Met-X-marca,

(II) Met-X,

(III) X-marca, 10 (IV) Met-marca-X,

(V) marca-X,

(VI) marca-X-marca,

(VII) X,

y 15 (VIII) Met-marca-X-marca,

en el que X es la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº 9, Met es metionina, y marca es secuencia de marca peptídica.

3. El polipéptido de la reivindicación 2, que consiste en la estructura X-marca.

4. El polipéptido de las reivindicaciones 2 o 3, en el que la marca consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en laSEC ID Nº 11.

5. El polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº 7.

6. El polipéptido de la reivindicación 5, que consiste en la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID Nº 7.

7. El polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que tiene menor actividad alergénica que Der p 2 de tipo silvestre.

8. El polipéptido definido en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para su uso en el tratamiento o la prevención de un trastorno alérgico. 35

9. El polipéptido de acuerdo con la reivindicación 8, en el que el trastorno alérgico es alergia a ácaros del polvo doméstico.

10. Un polinucleótido que codifica el polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7. 40

11. El polinucleótido de la reivindicación 10, que tiene la secuencia de ácido nucleico mostrada en las SEC ID Nº 8 o 10.

12. Un vector o un plásmido que comprenden el polinucleótido de las reivindicaciones 10 u 11. 45

13. Una composición farmacéutica que comprende el polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, el polinucleótido de las reivindicaciones 10 u 11, o el vector o el plásmido de la reivindicación 12; y un diluyente o un excipiente farmacéuticamente aceptables.

14. Una vacuna que comprende el polipéptido de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, el polinucleótido de las reivindicaciones 10 u 11, o el vector o el plásmido de la reivindicación 12; y opcionalmente un adyuvante.

15. Una célula hospedadora que comprende el polinucleótido de las reivindicacione 10 u 11, o el vector o el

plásmido de la reivindicación 12. 55