Vacunas de ARN.

Vacuna de ARN que comprende al menos una molécula de ARN que codifica al menos un alérgeno oderivado de mismo,

siendo dicho alérgeno un alérgeno de Alnus glutinosa, Alternaria alternata, Ambrosiaartemisiifolia, Apium graveolens, Arachis hypogaea, Betula verrucosa, Carpinus betulus, Castanea sativa,Cladosporium herbarum, Corylus avellana, Cryptomeria japonica, Cyprinus carpio, Daucus carota,Dermatophagoides pteronyssinus, Fagus sylvatica, Felis domesticus, Hevea brasiliensis, Juniperus ashei,Malus domestica, Quercus alba y Phleum pratense.

Vacunas de ARN

La presente invención se refiere a vacunas de ARN

Durante las últimas décadas, las enfermedades alérgicas de tipo I han aparecido como un problema de salud pública importante en los países occidentales industrializados, estando ahora afectado el 25% de la población.

Además de la predisposición familiar, se ha demostrado que las condiciones de crecimiento, incluidas las infecciones tempranas en la infancia, y los hábitos alimentarios, así como los factores ambientales como el tabaquismo pasivo o la exposición a los contaminantes del aire, son de gran importancia para el desarrollo de enfermedades atópicas.

La inmunoterapia específica, que se realiza mediante inyecciones de dosis crecientes del o los alérgenos durante años, representa actualmente la única intervención terapéutica disponible. No obstante, debido a las elevadas dosis administradas, el riesgo de efectos secundarios anafilácticos es evidente y el uso de extractos alergénicos brutos, apenas caracterizados, implica la posibilidad de sensibilizar al paciente contra componentes previamente no reconocidos. Adicionalmente, no existe una vacunación preventiva contra la alergia de tipo I, aunque la prevención de niños pequeños con mayor riesgo hereditario de desarrollar una enfermedad alérgica puede ser el abordaje más factible. Entrenar a un sistema inmunitario no expuesto es más fácil de conseguir que equilibrar un fenotipo inmunitario que ya ha manifestado alergia.

En Ying et al. (Nature Med (1999) 5:823-827) se divulgan vacunas de ARN autorreplicante cuyo ARN codifica la [beta]-galactosidasa, que a menudo se usa como molécula modelo para estudiar procesos inmunológicos. En Ying et al., se estudió la reacción antitumoral y se observó la inducción de células positivas para CD8. No obstante, las células positivas para CD4, que no se investigaron en Ying et al., participan en contraste con la protección inmunológica de las células positivas para CD8 contra las alergias y previenen un desplazamiento de clase hacia la IgE en los linfocitos B.

En Gabler et al. (J. All. Clin. Immunol. 118 (3) 2006:734-741) se divulgan vacunas de ADN que comprenden moléculas de ácido nucleico que codifican Phl p 5.

Mandl C.W. et al. (Nat. Med. 4 (12) 1998:1438-1440) muestran que las moléculas de ARN obtenibles mediante procedimientos in vitro se pueden usar como vacunas con el fin de producir una respuesta inmunitaria hacia el antígeno codificado por dichas moléculas de ARN.

Recientemente, las vacunas a base de ácido nucleico se han convertido en un prometedor abordaje a los mecanismos inmunitarios subyacentes a las enfermedades alérgicas. En numerosos estudios con animales se ha demostrado que las vacunas de ADN pueden prevenir la inducción de respuestas alérgicas de tipo I e incluso invertir un estado inmunitario alérgico de TIPO TH2 ya establecido (Weiss, R. et al. (2006) Int Arch Allergy Immunol 139:332-345) .

No obstante, se han planteado problemas generales con respecto a la seguridad de las vacunas a base de ADN, Las moléculas de ADN introducidas podrían integrarse potencialmente en el genoma del huésped o, debido a su distribución en varios tejidos, podrían conducir a una liberación sostenida del alérgeno, de modo que inducirán reacciones anafilácticas incontrolables en los pacientes con moléculas de IgE específicas del alérgeno preexistentes. Además, la vacunación de niños sanos requiere las mejores normas de seguridad para cualquier vacuna anti-alergia.

Por tanto, es un objetivo de la presente invención proporcionar una vacuna frente a un alérgeno que supere los inconvenientes de las vacunas de ADN pero que siga permitiendo un tratamiento eficaz de las alergias o que prevenga con éxito la sensibilización contra un alérgeno.

Por consiguiente, la presente invención se refiere a una vacuna de ARN que comprende al menos una molécula de ARN que codifica al menos un alérgeno o derivado de mismo, siendo dicho alérgeno un alérgeno de Alnus glutinosa, Alternaria alternata, Ambrosia artemisiifolia, Apium graveolens, Arachis hypogaea, Betula verrucosa, Carpinus betulus, Castanea sativa, Cladosporium herbarum, Cor y lus avellana, Cr y ptomeria japonica, Cyprinus carpio, Daucus carota, Dermatophagoides pteronyssinus, Fagus sylvatica, Felis domesticus, Hevea brasiliensis, Juniperus ashei, Malus domestica, Quercus alba y Phleum pratense.

Se descubrió que las moléculas de ARN que codifican un alérgeno o derivado del mismo también se pueden usar con eficiencia como vacunas de ARN. Las vacunas de ARN exhiben las características atribuidas a las vacunas de ADN para el tratamiento de enfermedades alérgicas. Proporcionan el alérgeno en su forma más pura, es decir, su información genética, y, de forma similar a las vacunas de ADN, inducen reacciones inmunitarias desviadas a TH1. Además, con las vacunas de ARN también se pueden implementar procedimientos similares a los desarrollados para las vacunas de ADN con el fin de crear productos génicos hipoalergénicos.

Además, las vacunas de ARN ofrecen sorprendentes ventajas sobre las vacunas de ADN. (I) La vacuna contiene la información genética pura del alérgeno pero no secuencias extrañas adicionales, tales como promotores virales, genes de resistencia a antibióticos o secuencias reguladoras virales/bacterianas que suelen estar presentes en la estructura de los plásmidos usados para vacunas de ADN. (ii) el ARN no se puede integrar en el genoma del huésped, de modo que se anula el riesgo de neoplasias malignas. (iii) el ARN se traduce en el citoplasma de la célula, por lo que no es necesaria la maquinaria de la transcripción del núcleo celular, lo que hace que las vacunas de ARN sean independientes del transporte hacia el interior y hacia el exterior del núcleo, así como de etapas nucleares. (iv) Debido a la rápida degradación del ARN, la expresión del transgén extraño tiene una vida corta, por lo que se evita la expresión prolongada e incontrolable del antígeno.

La vacuna de ARN de la presente invención puede comprender más de una molécula de ARN que codifica un alérgeno, preferentemente dos, tres, cinco, diez, etc. No obstante, una molécula de ARN puede también codificar al menos un alérgeno, lo que significa que una molécula de ARN comprende una secuencia de nucleótidos que codifica al menos uno, dos, tres, cinco, diez etc. alérgenos diferentes o idénticos. Los alérgenos a codificar por una o más moléculas de ARN se pueden seleccionar de la siguiente lista en cualquier combinación.

Como se usa en el presente documento, el término “vacuna de ARN” hace referencia a una vacuna que comprende una molécula de ARN como se define en el presente documento. No obstante, dicha vacuna puede comprender, por supuesto, otras sustancias y moléculas que son necesarias o que son ventajosas cuando dicha vacuna se administra a un individuo (p. ej., excipientes farmacéuticos) .

La expresión “alérgeno de” se usa de forma intercambiable con las expresiones "alérgeno derivado de" y "alérgeno obtenido de". Esto significa que el alérgeno se expresa de forma natural en dichos organismos y el ADN/ARN que codifica dichos alérgenos se aísla con el fin de producir las moléculas de ARN de la presente invención.

Se descubrió que no todas las moléculas de ARN que codifican un alérgeno pueden inducir la formación de anticuerpos específicos del alérgeno cuando se administran a un mamífero o ser humano. Las moléculas de ARN que codifican el alérgeno Art v 1 de Artemisia vulgaris y el alérgeno Ole e 1 de Olea europea no son capaces de inducir memoria de Th1 y de suprimir la respuesta de IgE específica del alérgeno. No obstante, las moléculas de ARN que codifican el alérgeno de las fuentes mencionadas anteriormente son capaces de hacerlo.

De acuerdo con una realización preferida de la presente invención, el alérgeno de Alnus glutinosa es Aln g 1, el alérgeno de Alternaria alternata se selecciona del grupo constituido por Alt a 1, Alt a 3, Alt a 4, Alt a 5, Alt a 6, Alt a 7, Alt a 8, Alt a 10, Alt a 12 y Alt a 13, el alérgeno de Ambrosia artemisiifolia se selecciona del grupo constituido por Amb a 1, Amb a 2, Amb a 3, Amb a 5, Amb a 6, Amb a 7, Amb a 8, Amb a 9 y Amb a 10, el alérgeno de Apium graveolens se selecciona del grupo constituido por Api g 1, Api g 4 y Api g 5, el alérgeno de Arachis hypogaea se selecciona del grupo constituido por Ara h 1, Ara h 2, Ara h 3, Ara h 4, Ara h 5, Ara h 6, Ara h 7 y Ara h 8, el alérgeno de Betula verrucosa se selecciona del grupo constituido por Bet v 1, Bet v 2, Bet v 3, Bet v 4, Bet v 6 y Bet v 7, el alérgeno de Carpinus betulus es Car b 1, el alérgeno de Castanea sativa se selecciona del grupo constituido... [Seguir leyendo]

1. Vacuna de ARN que comprende al menos una molécula de ARN que codifica al menos un alérgeno o derivado de mismo, siendo dicho alérgeno un alérgeno de Alnus glutinosa, Alternaria alternata, Ambrosia artemisiifolia, Apium graveolens, Arachis hypogaea, Betula verrucosa, Carpinus betulus, Castanea sativa,

Cladosporium herbarum, Cor y lus avellana, Cr y ptomeria japonica, Cyprinus carpio, Daucus carota, Dermatophagoides pteronyssinus, Fagus sylvatica, Felis domesticus, Hevea brasiliensis, Juniperus ashei, Malus domestica, Quercus alba y Phleum pratense.

2. Vacuna de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada porque el alérgeno de Alnus glutinosa es Aln g 1, el alérgeno de Alternaria alternata se selecciona del grupo constituido por Alt a 1, Alt a 3, Alt a 4, Alt a 5, Alt a 10 6, Alt a 7, Alt a 8, Alt a 10, Alt a 12 y Alt a 13, el alérgeno de Ambrosia artemisiifolia se selecciona del grupo constituido por Amb a 1, Amb a 2, Amb a 3, Amb a 5, Amb a 6, Amb a 7, Amb a 8, Amb a 9 y Amb a 10, el alérgeno de Apium graveolens se selecciona del grupo constituido por Api g 1, Api g 4 and Api g 5, el alérgeno de Arachis hypogaea se selecciona del grupo constituido por Ara h 1, Ara h 2, Ara h 3, Ara h 4, Ara h 5, Ara h 6, Ara h 7 y Ara h 8, el alérgeno de Betula verrucosa se selecciona del grupo constituido por Bet v 1, 15 Bet v 2, Bet v 3, Bet v 4, Bet v 6 y Bet v 7, el alérgeno de Carpinus betulus es Car b 1, el alérgeno de Castanea sativa se selecciona del grupo constituido por Cas s 1, Cas s 5 y Cas s 8, el alérgeno de Cladosporium herbarum se selecciona del grupo constituido por Cla h 2, Cla h 5, Cla h 6, Cla h 7, Cla h 8, Cla h 9, Cla h 10 y Cla h 12, el alérgeno de Cor y lus avellana se selecciona del grupo constituido por Cor a 1, Cor a 2, Cor a 8, Cor a 9, Cor a 10 y Cor a 11, el alérgeno de Cr y ptomeria japonica se selecciona del grupo 20 constituido por Cr y j 1 y Cr y j 2, el alérgeno de Cyprinus carpio es Cyp c 1, el alérgeno de Daucus carota se selecciona del grupo constituido por Dau c 1 y Dau c 4, el alérgeno de Dermatophagoides pteronyssinus se selecciona del grupo constituido por Der p 1, Der p 2, Der p 3, Der p 4, Der p 5, Der p 6, Der p 7, Der p 8, Der p 9, Der p 10, Der p 11, Der p 14, Der p 20, Der p 21 y Clone 30 , el alérgeno de Fagus sylvatica es Fag s 1, el alérgeno de Felis domesticus se selecciona del grupo constituido por Fel d 1, Fel d 2, Fel d 3, Fel d 4, Fel d 25 5w, Fel d 6w y Fel d 7w, el alérgeno de Hevea brasiliensis se selecciona del grupo constituido por Hev b 1, Hev b 2, Hev b 3, Hev b 4, Hev b 5, Hev b 6.01, Hev b 6.02, Hev b 6.03, Hev b 7.01, Hev b 7.02, Hev b 8, Hev b 9, Hev b 10, Hev b 11, Hev b 12 y Hev b 13, el alérgeno de Juniperus ashei se selecciona del grupo constituido por Jun a 1, Jun a 2 y Jun a 3, el alérgeno de Malus domestica se selecciona del grupo constituido por Mal d 1, Mal d 2, Mal d 3 y Mal d 4, el alérgeno de Quercus alba es Que a 1 y el alérgeno de Phleum

pratense se selecciona del grupo constituido por Phl p 1, Phl p 2, Phl p 4, Phl p 5, Phl p 6, Phl p 7, Phl p 11, Phl p 12 y Phl p 13.

3. Vacuna de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, caracterizada porque el alérgeno se selecciona del grupo constituido por AIn g 1, Alt a 1, Amb a 1, Api g 1, Ara h 2, Bet v 1, -caseína, Car b 1, Cas s 1, CIa h 8, Cor a 1, Cr y j 1, Cyp c 1, Dau c 1, Der p 2, Fag s 1, FeI d 1, Hev b 6, Jun a 1, MaI d 1, PhI p 1, PhI p 2, PhI p 5, PhI

p 6 y PhI p 7.

4. Vacuna de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, caracterizada porque la molécula de ARN codifica PhI p 1, PhI p 2, PhI p 5 and PhI p6, o AIn g 1, Cor a 1, Que a 1, Car b 1 y Bet v 1.

5. Vacuna de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque el derivado del alérgeno es hipoalergénico.

6. Vacuna de acuerdo con la reivindicación 5, caracterizada porque el derivado del alérgeno hipoalergénico exhibe una reactividad de IgE que es al menos un 10 %, preferentemente al menos un 20 %, más preferentemente al menos 30 %, en particular al menos 50 %, inferior a la reactividad de IgE del alérgeno natural.

7. Vacuna de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque la molécula de 45 ARN que codifica el alérgeno o derivado del mismo está condensada con al menos una molécula adicional que codifica un péptido, polipéptido o proteína.

8. Vacuna de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizada porque la molécula de ARN comprende al menos un elemento adicional seleccionado del grupo constituido por la replicasa, la secuencia líder de la ß-globina, cap0, cap1 y la cola de poli A.

9. Vacuna de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada porque la vacuna comprende además un adyuvante, seleccionado preferentemente del grupo constituido por CpG-ADN y citocinas, preferentemente IL-12 e IL-15.

10. Vacuna de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizada porque la vacuna está adaptada para administración intramuscular, intradérmica, intravenosa, transdérmica, tópica o biolística.

11. Uso de al menos una molécula de ARN como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para la fabricación de una vacuna para tratar o prevenir la alergia.

12. Uso de al menos una molécula de ARN como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para la fabricación de una vacuna protectora y terapéutica para hiposensibilizar a un individuo frente a un alérgeno.

13. Uso de acuerdo con la reivindicación 11 o 12, caracterizado porque la vacuna comprende además un adyuvante, seleccionado preferentemente del grupo constituido por CpG-ADN y citocinas, preferentemente IL12 e IL-15.

14. Uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porque la vacuna está adaptada para administración intramuscular, intradérmica, intravenosa, transdérmica, tópica o biolística.