IDENTIFICACION, CUANTIFICACION Y PURIFICACION DE PROTEINAS INSECTICIDAS A PARTIR DE BACILLUS THURINGIENSIS.

SE PRESENTA UN PROCESO PARA LA IDENTIFICACION DE PROTOXINAS PROTEINACEAS EXPRESADAS POR GENES DEL BACILLUS THURINGIENSIS.

SEGUN EL PROCESO, SE GENERAN PRIMERO TOXINAS HIJO SOMETIENDO UN MATERIAL QUE CONTIENE PROTOXINA, TAL COMO CRISTALES PARAESPORALES DEL BACILLUS THURINGIENSIS, A UNA PROTEOLISIS LIMITADA CON UNA ENZIMA PROTEOLITICA EN UNA SUSPENSION ACUOSA QUE TENGA UN PH SUPERIOR A 9,5. LAS TOXINAS HIJO SE SEPARAN ENTONCES MEDIANTE UNA CROMATOGRAFIA DE LIQUIDO DE INTERCAMBIO DE IONES DE ALTO RENDIMIENTO A UN PH CONSTANTE SUPERIOR A 10 EN UN GRADIENTE EN AUMENTO DE UNA SAL, PREFERENTEMENTE CLORURO SODICO. LAS CONDICIONES DE GRADIENTE, QUE SON ESPECIFICAS A LA COLUMNA UTILIZADA, SE CONSIGUEN UTILIZANDO UNA SERIE DE TAMPONES QUE TIENEN UNA CONCENTRACION EN AUMENTO DE LA SAL Y SE INTRODUCEN EN UN MOMENTO Y A UNA VELOCIDAD PREDETERMINADAS. CON EL PROCESO SE OBTIENE UN CROMATOGRAMA QUE MUESTRA PICOS CLARAMENTE IDENTIFICABLES DE TOXINAS Y PERMITE POR TANTO LA CARACTERIZACION CUALITATIVA Y CUANTITATIVA DE LA MEZCLA ORIGINAL Y EL AISLAMIENTO DE LAS TOXINAS INDIVIDUALES. SEGUN ESTO PROPORCIONA UN MEDIO PARA SELECCIONAR Y ENSAYAR NUEVOS TIPOS AISLADOS DEL BACILLUS THURINGIENSIS, TANTO DE UN SOLO COMO MULTIPLES GENES, Y CONTROLAR EL NIVEL DE EXPRESION DE LOS GENES CONOCIDOS DE UNA CEPA CONOCIDA. LAS CONDICIONES DE DIGESTION Y AISLAMIENTO PERMITEN LA PRODUCCION DE LAS TOXINAS EN UN ESTADO TOTALMENTE ACTIVO BIOLOGICAMENTE.

Tipo: Resumen de patente/invención.

Solicitante: NATIONAL RESEARCH COUNCIL OF CANADA.

Nacionalidad solicitante: Canadá.

Dirección: MONTREAL ROAD,OTTAWA, ONTARIO K1A OR6.

Inventor/es: PUSZTAI-CAREY, MARIANNE, CAREY, PAUL RICHARD, YAGUCHI, MAKOTO, LESSARD, TIMOTHY.

Fecha de Publicación: 1 de Mayo de 1999.

Fecha Solicitud PCT: 22 de Junio de 1994.

Fecha Concesión Europea: 3 de Marzo de 1999.

Clasificación Internacional de Patentes:

C07K14/325 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › Péptido cristalino de Bacillus thuringiensis (delta-endotoxina).
C12N1/20 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › Bacterias; Sus medios de cultivo.
C12P21/06 C12 […] › C12P PROCESOS DE FERMENTACION O PROCESOS QUE UTILIZAN ENZIMAS PARA LA SINTESIS DE UN COMPUESTO QUIMICO DADO O DE UNA COMPOSICION DADA, O PARA LA SEPARACION DE ISOMEROS OPTICOS A PARTIR DE UNA MEZCLA RACEMICA. › C12P 21/00 Preparación de péptidos o de proteínas (proteína monocelular C12N 1/00). › preparados por hidrólisis de un enlace peptídico, p. ej. hidrolizados.

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Mónaco, Irlanda, Oficina Europea de Patentes.

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