ANTICUERPO PARA EL RECEPTOR DE TIROTROPINA Y USOS DEL MISMO.

Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano del receptor de TSH, o uno o más fragmentos del mismo

, caracterizado por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, de al menos aproximadamente 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/GB2003/005171.

Solicitante: RSR LIMITED.

Nacionalidad solicitante: Reino Unido.

Dirección: AVENUE PARK PENTWYN CARDIFF CF23 8HE REINO UNIDO.

Inventor/es: SANDERS, JANE, SMITH, BERNARD, REES, FURMANIAK, JADWIGA.

Fecha de Publicación: .

Fecha Solicitud PCT: 28 de Noviembre de 2003.

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C07K16/28K

Clasificación PCT:

  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/21 (Retroviridae, p. ej. virus de la anemia infecciosa equina)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/295 (Antígenos virales polivalentes (virus de la viruela o de la varicela A61K 39/285 ); Mezclas de antígenos virales y bacterianos)
  • SECCION A — NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA > CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE > PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO... > Preparaciones medicinales que contienen antígenos... > A61K39/09 (Streptococcus)

Clasificación antigua:

  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Técnicas de mutación o de ingeniería genética;... > C12N15/85 (para células animales)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE;... > MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS... > Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales,... > C12N5/10 (Células modificadas por introducción de material genético extraño, p. ej. células transformadas por virus)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales > C07K16/28 (contra receptores, antígenos celulares de superficie o determinantes celulares de superficie)
  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/577 (en los que interviene anticuerpos monoclonados)
  • SECCION C — QUIMICA; METALURGIA > QUIMICA ORGANICA > PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas... > C07K16/00 (Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales)
  • SECCION G — FISICA > METROLOGIA; ENSAYOS > INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION... > Investigación o análisis de materiales por métodos... > G01N33/564 (para complejos inmunológicos preexistentes o enfermedades autoinmunes)

Países PCT: Austria, Bélgica, Suiza, Alemania, Dinamarca, España, Francia, Reino Unido, Grecia, Italia, Liechtensein, Luxemburgo, Países Bajos, Suecia, Mónaco, Portugal, Irlanda, Eslovenia, Finlandia, Rumania, Chipre, Lituania, Letonia, Ex República Yugoslava de Macedonia, Albania.

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Descripción:

Anticuerpo para el receptor de tirotropina y usos del mismo La presente invención se refiere a copartícipes de unión (tales como anticuerpos monoclonales o recombinantes) para el receptor de tirotropina (receptor de TSH o TSHR) y a usos de las mismas. La tirotropina u hormona estimulante del tiroides (TSH) es una hormona pituitaria que desempeña un papel clave en la regulación de la función del tiroides. Su liberación está estimulada por la hormona TRH formada en el hipotálamo y la TSH controla la formación y liberación de las importantes hormonas tiroideas tiroxina (T4) y triyodotironina (T3). Basándose en un mecanismo de realimentación, el contenido de hormona tiroidea del suero controla la liberación de TSH. La formación de T3 y T4 por las células tiroideas se estimula por la TSH mediante un procedimiento en que la TSH liberada por la pituitaria se une al receptor de TSH de la membrana celular tiroidea. En la enfermedad de Graves (un trastorno autoinmunitario común), se forman anticuerpos de receptor de TSH (TRAb) y estos autoanticuerpos se unen al receptor de TSH de tal modo que imitan las acciones de la TSH, estimulando la glándula tiroidea a producir altos niveles de hormonas tiroideas. Se describe que estos autoanticuerpos tienen actividad estimulante. En algunos pacientes, los autoanticuerpos se unen al receptor de TSH pero no estimulan la producción de hormona tiroidea, y se describe que tienen actividad bloqueante (J Sanders, Y Oda, S-A Roberts, M Maruyama, J Furmaniak, B Rees Smith; "Understanding the thyrotrophin receptor functionstructure relationship" Balliere's Clinical Endocrinology and Metabolism; Ed TF Davies 1997; 11(3): 451-479; pub Balliere Tindall, Londres). Las medidas de anticuerpos de receptor de TSH son importantes en el diagnóstico y gestión de la enfermedad de Graves y otros trastornos tiroideos. Actualmente, se usan tres tipos de ensayo para medir los anticuerpos de receptor de TSH: (a) ensayos de unión competitiva que miden la capacidad de los anticuerpos de receptor de TSH de inhibir la unión de TSH a preparaciones de receptor de TSH; (b) bioensayos que miden la capacidad de los anticuerpos de receptor de TSH de estimular células que expresan el receptor de TSH en cultivo; y (c) inmunoprecipitación de preparaciones de receptor de TSH con anticuerpos de receptor de TSH. La medida de los anticuerpos de receptor de TSH usando dichos ensayos se describe en las referencias: J Sanders, Y Oda, S-A Roberts, M Maruyama, J Furmaniak, B Rees Smith; "Understanding the thyrotrophin receptor function-structure relationship" Balliere's Clinical Endocrinology and Metabolism; Ed. TF Davies 1997; 11(3): 451- 479; pub Balliere Tindall, Londres. J Sanders, Y Oda, S Roberts, A Kiddie, T Richards, J Bolton, V McGrath, S Walters, D Jaskoski, J Furmaniak, B Rees Smith; "The interaction of TSH receptor autoantibodies with 125 I-labelled TSH receptor"; Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 1999; 84(10): 3797-3802. Se ha reconocido durante muchos años que los anticuerpos monoclonales humanos del receptor de TSH derivados de linfocitos de pacientes serían reactivos valiosos para comprender la patogénesis de la enfermedad de Graves y para desarrollar nuevos métodos de medida de anticuerpos de receptor de TSH, por ejemplo, como sustitutos de TSH en ensayos de unión competitiva. También, como los anticuerpos de receptor de TSH de suero de paciente son habitualmente potentes estimulantes tiroideos (agonistas de TSH), estimular los anticuerpos monoclonales humanos de receptor de TSH sería valioso para aplicaciones in vivo cuando el tejido que contiene el receptor de TSH (por ejemplo, tejido tiroideo o tejido de cáncer de tiroides) requiera estimulación. Además, como algunos anticuerpos de receptor de TSH de suero de pacientes son potentes antagonistas de TSH (anticuerpos bloqueantes), los anticuerpos monoclonales humanos de receptor de TSH que son antagonistas de TSH serían valiosos para aplicaciones in vivo cuando la actividad del tejido que contiene el receptor de TSH (por ejemplo, tejido tiroideo o tejido de cáncer de tiroides) requiera inactivación o volverse insensible a TSH, anticuerpos de receptor de TSH u otros estimulantes. Se ha reconocido también que una de las ventajas principales de los anticuerpos monoclonales humanos de receptor de TSH frente a la TSH en dichas aplicaciones in vitro y/o in vivo sería la facilidad relativa con que pueden manipularse dichos anticuerpos. Por ejemplo, la manipulación de la región de unión a receptor de TSH de los anticuerpos monoclonales para cambiar sus características, tales como afinidad y características biológicas que incluyen su grado de actividades agonista o antagonista de TSH. También los anticuerpos monoclonales tendrán una semivida mucho más larga que la TSH in vivo, y esto puede tener ventajas considerables en ciertas aplicaciones in vivo. Además, la semivida de los anticuerpos puede manipularse fácilmente, por ejemplo, los fragmentos Fab de anticuerpo tienen una semivida mucho más corta que la IgG intacta. Estas propiedades generales de los anticuerpos de receptor de TSH se describen en publicaciones tales como B Rees Smith, S M McLachlan, J Furmaniak; Autoantibodies to the thyrotropin receptor; Endocrine Reviews 1988; 9: 106-121; B Rees Smith, K J Dorrington, D S 2   Munro; The thyroid stimulating properties of long-acting thyroid stimulator G-globulin subunits; Biochimica et Biophysica Acta 1969; 192: 277-285; K J Dorrington, D S Munro; The long acting thyroid stimulator; Clinical Pharmacology and Therapeutics 1966; 7: 788-806. Una ventaja adicional más de los anticuerpos monoclonales humanos de receptor de TSH podría ser su uso para identificar y proporcionar nuevos tipos de sitios de unión de anticuerpo de receptor de TSH. Por ejemplo, mediante la generación de anticuerpos de las regiones de los anticuerpos monoclonales humanos de receptor de TSH que se unen al receptor de TSH. Algunos de los anticuerpos antiidiotípicos producidos de este modo podrían tener potencial como nuevos ligandos para ensayos de anticuerpos de receptor de TSH, TSH y compuestos relacionados. También pueden ser agentes eficaces in vivo para regular la acción de los anticuerpos de receptor de TSH, TSH y compuestos relacionados. Son bien conocidos otros métodos de identificación y provisión de nuevos tipos de sitios de unión de anticuerpo usando anticuerpos monoclonales. Por ejemplo, mediante el cribado con anticuerpos de colecciones peptídicas aleatorias expuestas en fago como se describe en JC Scott y GP Smith; Searching for peptide ligands with an epitope library; Science 1990; 249(4967): 386-390 y MA Myers, JM Davies, JC Tong, J Whisstock, M Scealy, IR MacKay, MJ Rowley; Conformational epitopes on the diabetes autoantigen GAD65 identified by peptide phage display and molecular modelling; Journal of Immunology 2000; 165: 3830-3838. Puede llevarse también a cabo el cribado con anticuerpos de compuestos no peptídicos y colecciones de compuestos no peptídicos. Pueden ser también útiles nuevos tipos de sitios de unión de anticuerpo de receptor de TSH, identificados y proporcionados usando estos procedimientos, como nuevos ligandos en ensayos de anticuerpos de receptor de TSH, TSH y compuestos relacionados. Además, pueden ser agentes eficaces in vivo para regular la acción de los anticuerpos de receptor de TSH, TSH y compuestos relacionados. A la vista del valor potencial de los anticuerpos monoclonales humanos de receptor de TSH, se han realizado considerables esfuerzos durante muchos años por producir dichos anticuerpos (véanse, por ejemplo, B Rees Smith, SM McLachlan, J Furmaniak; Autoantibodies to the thyrotropin receptor; Endocrine Reviews 1988; 9: 106-121. Sin embargo, hasta la fecha estos esfuerzos han sido inútiles (véanse, por ejemplo, SM McLachlan, B Rapoport; Monoclonal, human autoantibodies to the TSH receptor--The Holy Grail and why are we looking for it; Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 1996; 81: 3152-3154 y JHW van der Heijden, TWA de Bruin, KAFM Gludemans, J de Kruif, JP Banga, T Logtenberg; Limitations of the semisynthetic library approach for obtaining human monoclonal autoantibodies to the thyrotropin receptor of Graves' disease; Clinical and Experimental Immunology 1999; 118: 205-212). Kohn et al. describen la caracterización de autoanticuerpos monoclonales estimulantes de tiroides e inhibidores de la unión a tirotropina a partir de un paciente con la enfermedad de Hashimoto cuyos hijos tenían enfermedad tiroidea intrauterina y neonatal en Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 1997, vol. 82, nº 12, páginas 3998-4009. Akamizu et al. describen la caracterización de anticuerpos monoclonales recombinantes anti-receptor de tirotropina (TSHRAb) derivados de linfocitos de pacientes con la enfermedad de Graves: Epitope and binding study of two stimulatory TSHRAb en Endocrinology 1999, vol. 140, nº 4, páginas 1594-1601. Los mismos autores describen también un análisis molecular anticuerpos anti-receptor de tirotropina (TSAb) estimulantes implicados en la enfermedad de Graves en Journal of Immunology, 1996, 157: 3148-3152. Yoshida et al. describen anticuerpos monoclonales del receptor de tirotropina que se unen a una subunidad de 56 kDa del receptor de tirotropina y muestran bioactividades heterogéneas en Journal of Biological Chemistry, 1998, vol. 263, nº 31, páginas 16341-16347. Valente et al. describen anticuerpos monoclonales del receptor de tirotropina derivados de linfocitos de pacientes con la enfermedad de Graves en Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, vol. 79, páginas 6680-6684. Ninguna de las referencias de la técnica anterior describe anticuerpos que tengan los altos niveles de actividad inhibidora y estimulante de los anticuerpos dados a conocer por la presente invención. Es un objeto de la presente invención proporcionar un copartícipe de unión para el receptor de TSH capaz de interaccionar con el receptor de TSH de manera comparable a la interacción de autoanticuerpos de receptor de TSH con el receptor de TSH, es en particular un objeto de la presente invención proporcionar anticuerpos monoclonales humanos de receptor de TSH que exhiban una interacción comparable con la misma como se observa con anticuerpos de receptor de TSH presentes en los sueros de pacientes con la enfermedad de Graves hipertiroidea, y también proporcionar preparaciones recombinantes de los mismos. Las considerables dificultades de producir anticuerpos monoclonales humanos de receptor de TSH se han superado en la invención descrita en la presente memoria. En particular, se describe la producción exitosa de un anticuerpo monoclonal humano de receptor de TSH con las características de los autoanticuerpos encontrados en los sueros de pacientes con la enfermedad de Graves hipertiroidea. El anticuerpo monoclonal humano de receptor de TSH que se ha producido (descrito en la presente memoria como hMAb TSHR1) se une al receptor de TSH con alta afinidad y de tal modo que pequeñas cantidades del anticuerpo inhiben la unión de TSH marcada al receptor de TSH y estas pequeñas cantidades actúan como potentes estimulantes del tiroides. Los fragmentos Fab del anticuerpo y las preparaciones Fab recombinantes son 3   estimulantes del tiroides e inhibidores de la unión de TSH marcada similarmente eficaces a la IgG intacta. El Fab monoclonal y/o IgG intacta pueden marcarse con 125 I o biotina y mostrarse que se unen al receptor de TSH. Dicha unión se inhibe por los autoanticuerpos de receptor de TSH en los sueros de pacientes. La presente invención se define en las reivindicaciones 1 a 32 adjuntas. Se proporciona un copartícipe de unión para el receptor de TSH, comprendiendo dicho copartícipe de unión, o derivando de, un anticuerpo monoclonal humano o recombinante, o uno o más fragmentos del mismo, reactivo con el receptor de TSH. Se proporciona un copartícipe de unión para el receptor de TSH, comprendiendo dicho copartícipe de unión, o derivando de, un anticuerpo monoclonal humano, o uno o más fragmentos del mismo, reactivo con el receptor de TSH. Se proporciona un copartícipe de unión para el receptor de TSH, comprendiendo dicho copartícipe de unión, o derivando de, un anticuerpo recombinante humano, o uno o más fragmentos del mismo, reactivo con el receptor de TSH. Se proporciona un anticuerpo monoclonal humano, o uno o más fragmentos del mismo, reactivo con el receptor de TSH. En particular, se proporciona un anticuerpo recombinante humano, o uno o más fragmentos del mismo, reactivo con el receptor de TSH. Particularmente, se proporciona uno o más fragmentos de un anticuerpo recombinante humano reactivo con el receptor de TSH. Un copartícipe de unión, y en particular un anticuerpo monoclonal humano o recombinante reactivo con el receptor de TSH, puede caracterizarse adicionalmente por su capacidad de inhibir la unión de TSH al receptor de TSH y/o por su capacidad de estimular el receptor de TSH, ambas de las cuales se ha observado que son comparables con las propiedades inhibidora y estimulante respectivas de autoanticuerpos de receptor de TSH presentes en sueros obtenidos de pacientes con la enfermedad de Graves. Más particularmente, un copartícipe de unión, y en particular un anticuerpo monoclonal humano o recombinante, puede caracterizarse por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH al receptor de TSH de al menos 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, o más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, o uno o más fragmentos de dicho anticuerpo monoclonal o recombinante. Más particularmente, un copartícipe de unión, y en particular un anticuerpo monoclonal o recombinante humano, puede caracterizarse adicionalmente por una actividad estimulante con respecto a la producción de AMPc por células que expresan el receptor de TSH de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 240 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, o uno o más fragmentos de dicho anticuerpo monoclonal o recombinante. En una divulgación preferida, un copartícipe de unión, y en particular un anticuerpo monoclonal o recombinante humano, puede caracterizarse por: (i) una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH al receptor de TSH de al menos aproximadamente 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg; y (ii) una actividad estimulante con respecto a la producción de AMPc por células que expresan el receptor de TSH de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg; más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 240 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg; o uno o más fragmentos de dicho anticuerpo monoclonal o recombinante. En el caso en que un copartícipe de unión comprenda o derive de uno o más fragmentos de un anticuerpo monoclonal o recombinante reactivo con el receptor de TSH, en particular por ejemplo uno o más fragmentos Fab de un anticuerpo monoclonal o recombinante reactivo con el receptor de TSH, puede preferirse que dicho copartícipe de unión pueda caracterizarse por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH al receptor de TSH de al 4   menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg. Puede preferirse también en el caso en que el copartícipe de unión comprenda o derive de uno o más fragmentos de un anticuerpo monoclonal o recombinante reactivo con el receptor de TSH, en particular por ejemplo uno o más fragmentos Fab de un anticuerpo monoclonal o recombinante reactivo con el receptor de TSH, que dicho copartícipe de unión pueda caracterizarse por una actividad estimulante con respecto a la producción de AMPc por células que expresan el receptor de TSH de al menos aproximadamente 50 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 100 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 200 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg. Puede preferirse adicionalmente en el caso en que el copartícipe de unión comprenda o derive de uno o más fragmentos de un anticuerpo monoclonal o recombinante reactivo con el receptor de TSH, en particular por ejemplo uno o más fragmentos Fab de un anticuerpo monoclonal o recombinante reactivo con el receptor de TSH, que dicho copartícipe de unión pueda caracterizarse por: (i) una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH al receptor de TSH de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg; y (ii) una actividad estimulante con respecto a la producción de AMPc por células que expresan el receptor de TSH de al menos aproximadamente 50 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 100 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 200 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg. En un caso preferido, se proporciona un copartícipe de unión para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal humano), siendo capaz dicho copartícipe de unión de unirse al receptor de TSH preferiblemente para estimular el receptor de TSH y que comprende un dominio VH de anticuerpo seleccionado del grupo consistente en un dominio VH como se muestra en la SEQ ID NO. 1 y un dominio VH que comprende una o más CDR de VH con una secuencia aminoacídica seleccionada de las SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4. En una primera divulgación, por lo tanto, se proporciona un copartícipe de unión para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal humano), siendo dicho copartícipe de unión capaz de unirse al receptor de TSH preferiblemente para estimular el receptor de TSH y que comprende un dominio VH de anticuerpo como se muestra en la SEQ ID NO. 1. En una segunda divulgación, por lo tanto, se proporciona un copartícipe de unión para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal humano), siendo dicho copartícipe de unión capaz de unirse al receptor de TSH preferiblemente para estimular el receptor de TSH y que comprende un dominio VH de anticuerpo que comprende una o más CDR de VH con una secuencia aminoacídica seleccionada de las SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4. Se apreciará que un copartícipe de unión puede comprender un dominio VH de anticuerpo sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria en ausencia de un dominio VL de anticuerpo. Es conocido que los dominios de inmunoglobulina individuales, especialmente los dominios VH, son capaces de unirse a antígenos diana de manera específica. Como alternativa, un copartícipe de unión puede comprender un dominio VH de anticuerpo emparejado con un dominio VL de anticuerpo, proporcionando un sitio de unión de anticuerpo que comprende ambos dominios VH y VL para un receptor de TSH, empleando técnicas bien conocidas en la materia (Biochim. Biophys. Acta, 192 (1969) 277-285; Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 89, pág.10026-10030, noviembre de 1992). En un caso preferido, sin embargo, la presente divulgación proporciona un copartícipe de unión para el receptor de TSH, siendo dicho copartícipe de unión capaz de unirse al receptor de TSH preferiblemente para estimular el receptor de TSH y que comprende: un dominio VH de anticuerpo seleccionado del grupo consistente en: un dominio VH como se muestra en la SEQ ID NO. 1 y un dominio VH que comprende una o más CDR de VH con una secuencia aminoacídica seleccionada de las SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; y/o un dominio VL de anticuerpo seleccionado del grupo consistente en: un dominio VL como se muestra en la SEQ ID NO. 6 y un dominio VL que comprende una o más CDR de VL con una secuencia aminoacídica seleccionada de las SEQ ID NO. 7, SEQ ID NO. 8 y SEQ ID NO. 9. Puede preferirse según la presente divulgación que el copartícipe de unión sustancialmente como se describe   anteriormente en la presente memoria comprenda un dominio VH de anticuerpo sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria emparejado con un dominio VL de anticuerpo sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria, proporcionando un sitio de unión de anticuerpo que comprende ambos dominios VH y VL para el receptor de TSH aunque, como se debate adicionalmente, pueden usarse independientemente un dominio VH de anticuerpo o un dominio VL de anticuerpo para unirse a un receptor de TSH. Por lo tanto, se apreciará que un copartícipe de unión sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria puede comprender un dominio VH de anticuerpo sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria en ausencia de un dominio VL de anticuerpo. Por lo tanto, se apreciará también que un copartícipe de unión sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria puede comprender un dominio VL de anticuerpo sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria en ausencia de un dominio VH de anticuerpo. Como alternativa, un copartícipe de unión sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria puede comprender un dominio VH de anticuerpo emparejado con un dominio VL de anticuerpo sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria, proporcionando un sitio de unión de anticuerpo que comprende ambos dominios VH y VL para el receptor de TSH. Las realizaciones preferidas según la presente divulgación pueden incluir por tanto un copartícipe de unión sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria que comprende un dominio VH de anticuerpo como se muestra en la SEQ ID NO. 1 emparejado con un dominio VL de anticuerpo como se muestra en la SEQ ID NO. 6, proporcionando un sitio de unión de anticuerpo que comprende ambos de estos dominios VH y VL para el receptor de TSH. Se prevé adicionalmente según la presente divulgación que los dominios VH sustancialmente como se describen anteriormente en la presente memoria puedan emparejarse con dominios VL distintos de los descritos específicamente en la presente memoria. Se prevé adicionalmente según la presente divulgación que los dominios VL sustancialmente como se describen anteriormente en la presente memoria puedan emparejarse con dominios VH distintos de los descritos específicamente en la presente memoria. Según un aspecto adicional de la presente divulgación, se proporciona un copartícipe de unión sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria para el receptor de TSH, siendo dicho copartícipe de unión capaz de unirse al receptor de TSH de modo para estimular el receptor de TSH y que puede comprender: un dominio VH de anticuerpo que comprende: un dominio VH que comprende una o más CDR de VH con una secuencia aminoacídica seleccionada de las SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3 y SEQ ID NO. 4; y/o un dominio VL de anticuerpo que comprende: un dominio VL que comprende una o más CDR de VL con una secuencia aminoacídica seleccionada de las SEQ ID NO. 7, SEQ ID NO. 8 y SEQ ID NO. 9. Pueden tomarse una o más CDR como se designan anteriormente de los dominios VH y VL descritos anteriormente en la presente memoria e incorporarse a una estructura adecuada. Por ejemplo, la secuencia aminoacídica de una o más CDR sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria puede incorporarse a regiones estructurales de anticuerpos diferentes del hMAb TSHR1 dado a conocer específicamente en la presente memoria, incorporando así dichos anticuerpos la una o más CDR y siendo capaces de unirse al receptor de TSH, preferiblemente para estimular el receptor de TSH sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria. Como alternativa, la presente divulgación puede proporcionar un polipéptido capaz de unirse al receptor de TSH para estimular el receptor de TSH sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria y que comprende la conformación estructural primaria de aminoácidos representada por una o más CDR como se describen específicamente en la presente memoria, opcionalmente junto con aminoácidos adicionales, pudiendo dichos aminoácidos adicionales potenciar la afinidad de unión de una o más CDR como se describen en la presente memoria por el receptor de TSH o pudiendo no tener sustancialmente un papel en la modificación de las propiedades de unión del polipéptido al receptor de TSH. La presente divulgación comprende también variantes, análogos, derivados y fragmentos del anticuerpo monoclonal humano específico dado a conocer en la presente memoria, dominios VH, CDR y polipéptidos dados a conocer en la presente memoria, reteniendo dichas variantes, análogos, derivados y fragmentos la capacidad de interaccionar con el receptor de TSH (tal como, por ejemplo, para estimular el receptor de TSH) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria. Los términos variantes, análogos, derivados y fragmentos como se usan en la presente memoria pueden caracterizarse como anticuerpos, fragmentos de anticuerpo o polipéptidos que retienen esencialmente la misma función o actividad biológica que un anticuerpo monoclonal humano que tiene un dominio VH como se muestra en la SEQ ID NO.1 y un dominio VL como se muestra en la SEQ ID NO.6, y en particular respecto a las propiedades de unión del mismo al receptor de TSH. Las variantes, análogos, derivados y fragmentos y las variantes, análogos y derivados de los fragmentos como se describen en la presente memoria tienen adecuadamente una conformación estructural primaria de aminoácidos en que se sustituyen, eliminan o añaden, en cualquier combinación, varios o 6   unos pocos (tales como 5 a 10, 1 a 5 o a 1 a 3) restos aminoacídicos de un anticuerpo monoclonal humano que tiene un dominio VH como se muestra en la SEQ ID NO.1 y un dominio VL como se muestra en la SEQ ID NO. 6. Se prefieren especialmente entre estas las sustituciones, adiciones y deleciones silenciosas que no alteran o no alteran sustancialmente la actividad o función biológica de un anticuerpo monoclonal humano que tiene un dominio VH como se muestra en la SEQ ID NO.1 y un dominio VL como se muestra en la SEQ ID NO.6. Pueden preferirse las sustituciones conservativas como se describen a continuación con más detalle en la presente memoria. Más particularmente, las variantes, análogos o derivados de un anticuerpo monoclonal humano que tiene un dominio VH como se muestra en la SEQ ID NO.1 y un dominio VL como se muestra en la SEQ ID NO.6 pueden ser aquellos en que uno o más de los restos aminoacídicos se sustituyen por un resto aminoacídico conservado o no conservado (preferiblemente un resto aminoacídico conservado), o aquellos en que uno o más de los restos aminoacídicos incluyen un grupo sustituyente o similar. Dichas variantes, derivados y análogos se considera que están dentro del alcance de los especialistas en la materia a partir de las enseñanzas de la misma. Lo más típicamente, las variantes, análogos o derivados son aquellos que varían de un anticuerpo monoclonal humano de referencia que tiene un dominio VH como se muestra en la SEQ ID NO.1 y un dominio VL como se muestra en la SEQ ID NO.6 mediante sustituciones aminoacídicas conservativas. Dichas sustituciones son aquellas que sustituyen un aminoácido dado por otro aminoácido de características similares. Se consideran típicamente como sustituciones conservativas los reemplazos, uno por otro, entre los aminoácidos alifáticos A, V, L e I; entre los restos hidroxílicos S y T; entre los restos ácidos D y E; entre los restos amídicos N y Q; entre los restos básicos K y R y entre los restos aromáticos F e Y. Se apreciará que el término fragmento como se usa en la presente memoria se refiere en particular a fragmentos de anticuerpos como se describen específicamente en la presente memoria y forma un aspecto importante de la presente divulgación. De este modo, un anticuerpo monoclonal o anticuerpo recombinante humano como se proporciona por la presente divulgación puede proporcionarse como cualquiera de los siguientes fragmentos: (i) el fragmento Fab consistente en los dominios VL, VH, CL y CH1; (ii) el fragmento Fd consistente en los dominios VH y CH1; (iii) el fragmento Fv consistente en los dominios VL y VH; (iv) el fragmento dAb que consiste en un dominio VH; (v) regiones CDR aisladas; (vi) fragmentos F(ab')2, un fragmento divalente que comprende dos fragmentos Fab ligados y (vii) moléculas de Fv monocatenarias (scFv), en las que un dominio VH y un dominio VL están ligados por un engarce peptídico que permite que los dos dominios se asocien formando un sitio de unión de antígeno. Como alternativa, un anticuerpo monoclonal o recombinante humano según la presente divulgación puede comprender un anticuerpo de IgG entero, con lo que el anticuerpo incluye las regiones variables y constantes. La presente divulgación proporciona también un copartícipe de unión adicional capaz de unirse al receptor de TSH, que puede competir por la unión al receptor de TSH con un copartícipe de unión del receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria, no comprendiendo dicho copartícipe de unión adicional la TSH. Preferiblemente, este copartícipe de unión adicional puede comprender un anticuerpo adicional que tiene un sitio de unión para una región epitópica del receptor de TSH, y que puede competir por la unión al receptor de TSH con un copartícipe de unión del receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria. Uno de dichos copartícipes de unión adicionales adecuados puede comprender un anticuerpo monoclonal de ratón, que puede producirse preferiblemente según técnicas sustancialmente como se describen en los ejemplos, empleando la inmunización de ratones con receptor de TSH mediante técnicas conocidas en la materia. La presente divulgación puede proporcionar también un copartícipe de unión adicional capaz de unirse al receptor de TSH que puede comprender, o deriva de, un anticuerpo monoclonal o recombinante humano o uno o más fragmentos del mismo, reactivo con el receptor de TSH. En particular, este copartícipe de unión adicional puede comprender un anticuerpo adicional que tiene un sitio de unión para una región epitópica del receptor de TSH, siendo capaz dicho anticuerpo adicional de unirse al receptor de TSH y pudiendo competir por la unión al receptor de TSH con un copartícipe de unión del receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria. Dicho copartícipe de unión adicional puede derivar adecuadamente de un copartícipe de unión específica como se describe en la presente memoria, hMAb TSHR 1, mediante técnicas de mutagénesis adecuadas tales como mutaciones puntuales o similares, para obtener un copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH que pueda competir con un copartícipe de unión sustancialmente como se describe en la presente memoria (tal como hMAb TSHR1) por la interacción con el receptor de TSH. Preferiblemente, un copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH puede comprender un anticuerpo monoclonal o recombinante y puede caracterizarse por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH al receptor de TSH de al menos aproximadamente 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, o uno o más fragmentos del anticuerpo. Puede preferirse también que dicho copartícipe de unión adicional según la presente invención pueda caracterizarse por una actividad estimulante con respecto a la producción de AMPc por 7   células que expresan el receptor de TSH de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 240 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, o uno o más fragmentos del anticuerpo. Puede preferirse aún más que dicho copartícipe de unión adicional de la presente divulgación pueda caracterizarse por: (i) una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH al receptor de TSH de al menos aproximadamente 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg; y (ii) una actividad estimulante con respecto a la producción de AMPc por células que expresan el receptor de TSH de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 240 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg; o uno o más fragmentos del mismo. Un anticuerpo monoclonal de ratón preferido que proporciona un copartícipe de unión adicional según la presente divulgación comprende 9D33 preparado adicionalmente en los ejemplos y que tiene secuencias aminoacídicas y polinucleotídicas como se ilustran por las Figuras 9 a 12 y las listas de secuencias 19 a 38. Según la presente divulgación, por lo tanto, se proporciona un copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal de ratón) que comprende un dominio VH de anticuerpo como se muestra en la SEQ ID NO. 19. Un copartícipe de unión adicional proporcionado por la presente divulgación puede caracterizarse también por comprender un dominio de anticuerpo VH que comprende una o más CDR de VH con una secuencia aminocídica seleccionada de las SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21 y SEQ ID NO. 22. Se apreciará que un copartícipe de unión adicional según la presente divulgación puede comprender un dominio VH de anticuerpo sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria en ausencia de un dominio VL de anticuerpo. Es conocido que los dominios de inmunoglobulina individuales, especialmente los dominios VH, son capaces de unirse a antígenos diana de manera específica. Como alternativa, un copartícipe de unión adicional según la presente divulgación puede comprender un dominio VH de anticuerpo emparejado con un dominio VL de anticuerpo, proporcionando un sitio de unión de anticuerpo que comprende ambos dominios VH y VL para un receptor de TSH, empleando técnicas bien conocidas en la materia (Biochim. Biophys. Acta, 192 (1969) 277-285; Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 89, pág. 10026-10030, noviembre de 1992). En un caso preferido, sin embargo, la presente divulgación proporciona un copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH, comprendiendo dicho copartícipe de unión adicional: un dominio VH de anticuerpo seleccionado del grupo consistente en: un dominio VH como se muestra en la SEQ ID NO. 19 y un dominio VH que comprende una o más CDR de VH con una secuencia aminoacídica seleccionada de las SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21 y SEQ ID NO. 22; y/o un dominio VL de anticuerpo seleccionado del grupo consistente en: un dominio VL como se muestra en la SEQ ID NO. 24 y un dominio VL que comprende una o más CDR de VL con una secuencia aminoacídica seleccionada de las SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26 y SEQ ID NO. 27. Puede preferirse según la presente divulgación que un copartícipe de unión adicional sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria comprenda un dominio VH de anticuerpo como se describe anteriormente en la presente memoria emparejado con un dominio VL de anticuerpo sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria, proporcionando un sitio de unión de anticuerpo que comprende ambos dominios VH y VL para el receptor de TSH aunque, como se debate adicionalmente, pueden usarse independientemente un dominio VH de anticuerpo o un dominio VL de anticuerpo para unirse a un receptor de TSH. Por lo tanto, se apreciará que un copartícipe de unión adicional sustancialmente como se describe en la presente memoria puede comprender un dominio VH de anticuerpo sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria en ausencia de un dominio VL de anticuerpo. Por lo tanto, se apreciará también que un copartícipe de unión adicional sustancialmente como se describe en la presente memoria puede comprender un dominio VL de anticuerpo sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria en ausencia de un dominio VH de anticuerpo. Como alternativa, un copartícipe de unión adicional sustancialmente como se describe 8   anteriormente en la presente memoria puede comprender un dominio VH de anticuerpo emparejado con un dominio VL de anticuerpo sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria, proporcionando un sitio de unión de anticuerpo que comprende ambos dominios VH y VL para el receptor de TSH. Las realizaciones preferidas según la presente divulgación pueden incluir por tanto un copartícipe de unión adicional sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria que comprende un dominio VH de anticuerpo como se muestra en la SEQ ID NO. 19 emparejado con un dominio VL de anticuerpo como se muestra en la SEQ ID NO. 24, proporcionando un sitio de unión de anticuerpo que comprende ambos de estos dominios VH y VL para el receptor de TSH. Se prevé adicionalmente según la presente divulgación que el dominio VH sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria pueda emparejarse con dominios VL distintos de los descritos específicamente en la presente memoria. Se prevé adicionalmente también según la presente divulgación que los dominios VL sustancialmente como se describen anteriormente en la presente memoria puedan emparejarse con dominios VH distintos de los descritos específicamente en la presente memoria. Según una realización adicional de la presente divulgación, se proporciona un copartícipe de unión adicional sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria para el receptor de TSH, siendo capaz dicho copartícipe de unión de unirse al receptor de TSH para inhibir la estimulación del receptor de TSH, y que puede comprender: un dominio VH de anticuerpo que comprende: un dominio VH que comprende una o más CDR de VH con una secuencia aminoacídica seleccionada de las SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21 y SEQ ID NO. 22; y/o un dominio VL de anticuerpo que comprende: un dominio VL que comprende una o más CDR de VL con una secuencia aminoacídica seleccionada de las SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26 y SEQ ID NO. 27. Una o más CDR como se designan anteriormente pueden tomarse de los dominios VH y VL descritos anteriormente en la presente memoria e incorporarse a una estructura adecuada. Por ejemplo, la secuencia aminoacídica de las una o más CDR sustancialmente como se describen anteriormente en la presente memoria puede incorporarse a regiones estructurales de anticuerpos que difieren del 9D33 dado a conocer específicamente en la presente memoria, incorporando así dichos anticuerpos la una o más CDR y siendo capaces de unirse al receptor de TSH. Como alternativa, la presente divulgación puede proporcionar un polipéptido capaz de unirse al receptor de TSH que comprende la conformación estructural primaria de aminoácidos como se representa por una o más CDR como se describen específicamente en la presente memoria, opcionalmente junto con aminoácidos adicionales, pudiendo potenciar dichos aminoácidos adicionales la afinidad de unión de las una o más CDR como se describen en la presente memoria por el receptor de TSH, o pudiendo no tener sustancialmente un papel en la modificación de las propiedades de unión del polipéptido al receptor de TSH. Se apreciará que el término fragmento, como se usa en la presente memoria, se refiere en particular a fragmentos de anticuerpos como se describen específicamente en la presente memoria y forma un aspecto importante de la presente divulgación. De este modo, un copartícipe de unión adicional según la presente divulgación puede proporcionarse como cualquiera de los siguientes fragmentos: (i) el fragmento Fab consistente en los dominios VL, VH, CL y CH1; (ii) el fragmento Fd consistente en los dominios VH y CH1; (iii) el fragmento Fv consistente en los dominios VL y VH; (iv) el fragmento dAb que consiste en un dominio VH; (v) regiones CDR aisladas; (vi) fragmentos F(ab')2, un fragmento divalente que comprende dos fragmentos Fab ligados y (vii) moléculas de Fv monocatenarias (scFv) en las que un dominio VH y un dominio VL están ligados por un engarce peptídico que permite que los dos dominios se asocien formando un sitio de unión de antígeno. Como alternativa, un anticuerpo monoclonal o recombinante de ratón según la presente divulgación, tal como 9D33, puede comprender un anticuerpo de IgG entero, con lo que el anticuerpo incluye las regiones variables y constantes. Se proporciona también por la presente divulgación un polinucleótido que comprende: (i) una secuencia nucleotídica como se muestra en las SEQ ID NO. 10, SEQ ID NO. 11, SEQ ID NO. 12, SEQ ID NO. 13, SEQ ID NO. 15, SEQ ID NO. 16, SEQ ID NO. 17 o SEQ ID NO. 18, que codifica una secuencia aminoacídica de un dominio VH, un dominio VL o CDR de anticuerpo como se muestra en las SEQ ID NO. 1, SEQ ID NO. 2, SEQ ID NO. 3, SEQ ID NO. 4, SEQ ID NO. 6, SEQ ID NO. 7, SEQ ID NO. 8 o SEQ ID NO. 9; (ii) una secuencia nucleotídica que codifica un copartícipe de unión para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria, o que codifica una secuencia aminoacídica de un dominio VH, dominio VL o CDR de anticuerpo de un copartícipe de unión del receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria; 9   (iii) una secuencia nucleotídica que difiere de cualquier secuencia de (i) en la secuencia de codón debido a la degeneración del código genético; (iv) una secuencia nucleotídica que comprende una variación alélica de cualquier secuencia de (i); (v) una secuencia nucleotídica que comprende un fragmento de cualquiera de las secuencias (i), (ii), (iii) o (iv), y en particular una secuencia nucleotídica que comprende un fragmento de cualquiera de las secuencias (i), (ii), (iii), (iv) o (v) y que codifica un fragmento Fab, un fragmento Fd, un fragmento Fv, un fragmento dAb, una región CDR aislada, fragmentos F(ab')2 o un fragmento scFv, de un anticuerpo monoclonal humano sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria; (vi) una secuencia nucleotídica que difiere de cualquier secuencia (i) debido a la mutación, deleción o sustitución de una base nucleotídica y que codifica un copartícipe de unión para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria, o que codifica una secuencia aminoacídica de un dominio VH, dominio VL o CDR de anticuerpo, de un copartícipe de unión para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria. Se proporciona también por la presente divulgación un polinucleótido que comprende: (i) una secuencia nucleotídica como se muestra en las SEQ ID NO. 29, SEQ ID NO. 30, SEQ ID NO. 31, SEQ ID NO. 32, SEQ ID NO. 34, SEQ ID NO. 35, SEQ ID NO. 36 o SEQ ID NO. 37, que codifica una secuencia aminoacídica de un dominio VH, dominio VL o CDR de anticuerpo, como se muestra en las SEQ ID NO. 19, SEQ ID NO. 20, SEQ ID NO. 21, SEQ ID NO. 22, SEQ ID NO. 24, SEQ ID NO. 25, SEQ ID NO. 26 o SEQ ID NO. 27; (ii) una secuencia nucleotídica que codifica un copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal de ratón) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria, o que codifica una secuencia aminoacídica de un dominio VH, dominio VL o CDR de anticuerpo, de un copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal de ratón) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria; (iii) una secuencia nucleotídica que difiere de cualquier secuencia de (i) en la secuencia de codón debido a la degeneración del código genético; (iv) una secuencia nucleotídica que comprende una variación alélica de cualquier secuencia (i); (v) una secuencia nucleotídica que comprende un fragmento de cualquiera de las secuencias (i), (ii), (iii) o (iv), y en particular una secuencia nucleotídica que comprende un fragmento de cualquiera de las secuencias (i), (ii), (iii), (iv) o (v) y que codifica un fragmento Fab, un fragmento Fd, un fragmento dAb, una región CDR aislada, fragmentos F(ab')2 o un fragmento scFv, de un anticuerpo monoclonal de ratón sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria; (vi) una secuencia nucleotídica que difiere de cualquier secuencia (i) debido a la mutación, deleción o sustitución de una base nucleotídica y que codifica un copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal de ratón) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria, o que codifica una secuencia aminoacídica de un dominio VH, dominio VL o CDR de anticuerpo de un copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal de ratón) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria. Los polinucleótidos variantes según la presente divulgación son adecuadamente al menos un 70% idénticos en toda su longitud a cualquier secuencia polinucleotídica (i), los más altamente preferidos son polinucleótidos que comprenden una región que es al menos un 80% idéntica en toda su longitud a cualquier secuencia polinucleotídica (i), se prefieren particularmente los polinucleótidos al menos un 90% idénticos en toda su longitud a cualquier secuencia polinucleotídica (i), y entre estos polinucleótidos particularmente preferidos, se prefieren especialmente aquellos con al menos un 95% de identidad. La presente divulgación proporciona adicionalmente un sistema de vector biológicamente funcional que porta un polinucleótido sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria y que es capaz de introducir el polinucleótido en el genoma de un organismo hospedador. La presente divulgación se refiere también a células hospedadoras que se transforman con polinucleótidos de la invención y a la producción de copartícipes de unión para el receptor de TSH de la invención por técnicas recombinantes. Las células hospedadoras pueden modificarse por ingeniería genética para incorporar polinucleótidos y expresar copartícipes de unión para el receptor de TSH de la presente divulgación. Las secuencias aminoacídicas de hMAb TSHR 1, un anticuerpo monoclonal humano según la presente invención, y las secuencias nucleotídicas que lo codifican, las secuencias aminoacídicas de 9D33, un anticuerpo monoclonal de ratón que representa un copartícipe de unión adicional según la presente divulgación, y las secuencias nucleotídicas   que lo codifican, se muestran en las listas de secuencias como se describen a continuación en la presente memoria y pueden asignarse como sigue. Para hMAb TSHR1: Secuencias aminoacídicas SEQ ID NO. 1 VH SEQ ID NO. 2 CDRI de VH SEQ ID NO. 3 CDRII de VH SEQ ID NO. 4 CDRIII de VH SEQ ID NO. 5 región variable y constante adyacente de cadena pesada SEQ ID NO. 6 VL SEQ ID NO. 7 CDRI de VL SEQ ID NO. 8 CDRII de VL SEQ ID NO. 9 CDRIII de VL Secuencias nucleotídicas SEQ ID NO. 10 VH SEQ ID NO. 11 CDRI de VH SEQ ID NO. 12 CDRII de VH SEQ ID NO. 13 CDRIII de VH SEQ ID NO. 14 región variable y constante adyacente de cadena pesada SEQ ID NO. 15 VL SEQ ID NO. 16 CDRI de VL SEQ ID NO. 17 CDRII de VL SEQ ID NO. 18 CDRIII de VL Para 9D33: Secuencias aminoacídicas SEQ ID NO. 19 VH SEQ ID NO. 20 CDRI de VH SEQ ID NO. 21 CDRII de VH SEQ ID NO. 22 CDRIII de VH SEQ ID NO. 23 región variable y constante adyacente de cadena pesada SEQ ID NO. 24 VL SEQ ID NO. 25 CDRI de VL SEQ ID NO. 26 CDRII de VL SEQ ID NO. 27 CDRIII de VL SEQ ID NO. 28 región variable y constante adyacente de cadena ligera Secuencias nucleotídicas SEQ ID NO. 29 VH 11   SEQ ID NO. 30 CDRI de VH SEQ ID NO. 31 CDRII de VH SEQ ID NO. 32 CDRIII de VH SEQ ID NO. 33 región variable y constante adyacente de cadena pesada SEQ ID NO. 34 VL SEQ ID NO. 35 CDRI de VL SEQ ID NO. 36 CDRII de VL SEQ ID NO. 37 CDRIII de VL SEQ ID NO. 38 región variable y constante adyacente de cadena ligera. Las secuencias anteriores para el hMAb TSHR1 pueden observarse también con referencia a las Figuras. 4, 5, 6 y 7, en las que: la Figura 4 muestra la secuencia nucleotídica de la cadena pesada de hMAb TSHR1, junto con la región constante adyacente, dando la Figura. 4a la secuencia nucleotídica per se; dando la Figura 4b la secuencia nucleotídica anotada con el cebador de PCR, las regiones CDRI, CDRII, CDRIII y constantes; la Figura 5 muestra la secuencia aminoacídica de la cadena pesada de hMAb TSHR1, junto con la región constante adyacente, dando la Figura 5a la secuencia aminoacídica per se; dando la Figura. 5b la secuencia aminoacídica anotada con las regiones CDRI, CDRII, CDRIII y constante; la Figura 6 muestra la secuencia nucleotídica de cadena ligera de hMAb TSHR1, dando la Figura 6a la secuencia nucleotídica per se; dando la Figura 6b la secuencia nucleotídica anotada con el cebador de PCR, las regiones CDRI, CDRII y CDRIII; la Figura. 7 muestra la secuencia aminoacídica de la cadena ligera de hMAb TSHR1, dando la Figura 7a la secuencia aminoacídica per se; dando la Figura 7b la secuencia aminoacídica anotada con las regiones CDRI, CDRII y CDRIII. Se apreciará a partir de lo anterior que, para la cadena VH de hMAb TSHR1, las secuencias nucleotídicas de las regiones CDRI, CDRII y CDRIII como se muestran en la Figura 4b corresponden a las secuencias VHCDRI, VHCDRII y VHCDRIII mostradas en las SEQ ID NO. 11, 12 y 13 respectivamente, y que las secuencias aminoacídicas de las regiones CDRI, CDRII y CDRIII como se muestran en la Figura 5b corresponden a las secuencias VHCDRI, VHCDRII y VHCDRIII mostradas en las SEQ ID NO. 2, 3 y 4 respectivamente. Se apreciará también a partir de lo anterior que, para la cadena VL de hMAb TSHR1, las secuencias nucleotídicas de las regiones CDRI, CDRII y CDRIII como se muestran en la Figura 6b corresponden a las secuencias VLCDRI, VLCDRII y VLCDRIII mostradas en las SEQ ID NO. 16, 17 y 18 respectivamente, y que las secuencias aminoacídicas de las regiones CDRI, CDRII y CDRIII como se muestran en la Figura 7b corresponden a las secuencias VLCDRI, VLCDRII y VLCDRIII mostradas en las SEQ ID NO. 7, 8 y 9 respectivamente. El análisis de la estructura cristalina del Fab de hMAb TSHR1 (determinada mediante técnicas conocidas en la materia) posibilitó el refinamiento de las secuencias nucleotídicas de HC y LC determinadas usando cebadores de PCR que son degenerados. En particular, se identificó un artefacto de secuenciación de HC para los nucleótidos 115-120. La secuenciación indicaba cacgtg (transcrito a los aminoácidos His Val), mientras que la estructura cristalina indicaba más fiablemente los aminoácidos Gln Leu (siendo las bases correspondientes cagctg), mostrándose las secuencias refinadas en las figuras y listas de secuencias acompañantes. El análisis de estructura cristalina posibilitó también el refinamiento de las secuencias aminoacídicas derivadas de HC y LC, particularmente en la región del cebador de PCR degenerado. En el caso de LC, se encontró que el aa2 era Pro por PCR-TI, pero que era Thr a partir de la estructura cristalina. En el caso de HC, se encontró que el aa2 era Met por PCR-TI, pero que era Val a partir de la estructura cristalina. De nuevo, se muestran estas secuencias refinadas en las figuras y listas de secuencias acompañantes. 12   Las secuencias anteriores para 9D33 pueden observarse también por referencia a las Figuras 9, 10, 11 y 12, en las que: la Figura 9 muestra la secuencia nucleotídica de la cadena pesada de 9D33, junto con la región constante adyacente, dando la Figura 9a la secuencia nucleotídica per se; dando la Figura 9b la secuencia nucleotídica anotada con el cebador de PCR, las regiones CDRI, CDRII, CDRIII y constante; la Figura 10 muestra la secuencia aminoacídica de la cadena pesada de 9D33, junto con la región constante adyacente, dando la Figura 10a la secuencia aminoacídica per se; dando la Figura 10b la secuencia aminoacídica anotada con el cebador de PCR, las regiones CDRI, CDRII, CDRIII y constante; la Figura 11 muestra la secuencia nucleotídica de la cadena ligera de 9D33, dando la Figura 11a la secuencia nucleotídica per se; dando la Figura 11b la secuencia nucleotídica anotada con el cebador de PCR, las regiones CDRI, CDRI, CDRIII y constante; la Figura 12 muestra la secuencia aminoacídica de la cadena ligera de 9D33, dando la Figura 12a la secuencia aminoacídica per se; dando la Figura 12b la secuencia aminoacídica anotada con el cebador de PCR, las regiones CDRI, CDRII, CDRIII y constante. Se apreciará a partir de lo anterior que, para la cadena VH de 9D33, las secuencias nucleotídicas de las regiones CDRI, CDRII y CDRIII como se muestran en la Figura 9b corresponden a las secuencias VHCDRI, VHCDRII y VHCDRIII mostradas en las SEQ ID NO. 30, 31 y 32 respectivamente, y que las secuencias aminoacídicas de las regiones CDRI, CDRII y CDRIII como se muestran en la Figura 10b corresponden a las secuencias VHCDRI, VHCDRII y VHCDRIII mostradas en las SEQ ID NO. 20, 21 y 22 respectivamente. Se apreciará también a partir de lo anterior que, para la cadena VL de 9D33, las secuencias nucleotídicas de las regiones CDRI, CDRII y CDRIII como se muestran en la Figura 11b corresponden a las secuencias VLCDRI, VLCDRII y VLCDRIII mostradas en las SEQ ID NO. 35, 36 y 37 respectivamente, y que las secuencias aminoacídicas de las regiones CDRI, CDRII y CDRIII como se muestran en la Figura 12b corresponden a las secuencias VLCDRI, VLCDRII y VLCDRIII mostradas en las SEQ ID NO. 25, 26 y 27 respectivamente. La presente divulgación proporciona también un proceso de provisión de un anticuerpo monoclonal humano de receptor de TSH sustancialmente como se describe en la presente memoria, comprendiendo dicho proceso: (i) proporcionar una fuente de linfocitos de un sujeto, teniendo dicho sujeto una actividad de anticuerpo de receptor de TSH mayor de aproximadamente 0,04 unidades de NIBSC 90/672 por ml de suero con respecto a la inhibición de la unión de TSH al receptor de TSH; (ii) aislar linfocitos de dicha fuente de linfocitos (i); (iii) inmortalizar los linfocitos aislados; y (iv) clonar los linfocitos inmortalizados para producir una colonia inmortalizada que secrete un anticuerpo monoclonal humano del receptor de TSH sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria. Como alternativa, un proceso de provisión de un anticuerpo monoclonal humano del receptor de TSH sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria puede definirse como un proceso que comprende: (i) proporcionar una fuente de linfocitos de un sujeto, teniendo dicho sujeto una actividad de anticuerpo de receptor de TSH mayor de aproximadamente 0,1 unidades de NIBSC 90/672 por mol de suero con respecto a la actividad estimulante de la producción de AMPc por células que expresan el receptor de TSH; (ii) aislar linfocitos de dicha fuente de linfocitos (i); (iii) inmortalizar los linfocitos aislados; y 13   (iv) clonar los linfocitos inmortalizados para producir una colonia inmortalizada que secrete un anticuerpo monoclonal humano del receptor de TSH sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria. Preferiblemente, un proceso según la presente divulgación comprende aislar linfocitos de sangre periférica, tejido tiroideo, tejido de bazo, nódulos linfáticos o médula ósea, lo más típicamente de sangre periférica. Típicamente, la fuente de linfocitos para uso en un método según la presente invención puede caracterizarse adicionalmente por obtenerse a partir de un sujeto que tiene niveles de anticuerpo de receptor de TSH en suero mayores de aproximadamente 0,1 unidades de NIBSC 90/672 por ml con respecto a la inhibición de la unión de TSH al receptor de TSH, o más típicamente, mayores de aproximadamente 0,2 unidades de NIBSC 90/672 por ml con respecto a la inhibición de la unión de TSH al receptor de TSH, o más típicamente, mayores de aproximadamente 0,3 unidades de NIBSC 90/672 por ml con respecto a la inhibición de la unión de TSH al receptor de TSH, y estando preferiblemente en el intervalo de aproximadamente 0,3 a 0,5 unidades de NIBSC 90/672 por ml o más con respecto a la inhibición de la unión de TSH al receptor de TSH. Como alternativa, o adicionalmente, la fuente de linfocitos para uso en un método según la presente invención típicamente puede caracterizarse adicionalmente por obtenerse a partir de un sujeto que tiene niveles de anticuerpo de receptor de TSH en suero mayores de aproximadamente 0,2 unidades de NIBSC 90/672 por ml con respecto a la actividad estimulante de producción de AMPc por células que expresan el receptor de TSH, o más típicamente mayores de aproximadamente 0,5 unidades de NIBSC 90/672 por ml con respecto a la actividad estimulante de producción de AMPc por células que expresan el receptor de TSH, y estando preferiblemente en el intervalo de aproximadamente 0,5 a 1,0 unidades de NIBSC 90/672 por ml o más con respecto a la actividad estimulante de la producción de AMPc por células que expresan el receptor de TSH. Se apreciará a partir de lo anterior que la respuesta inmunitaria al receptor de TSH de un sujeto del que se aíslan linfocitos debería estar preferiblemente en fase altamente activa. Preferiblemente, un proceso según la presente divulgación comprende infectar los linfocitos aislados con virus de Epstein Barr y fusionar adecuadamente los linfocitos así inmortalizados con una estirpe celular de ratón/humana. Adecuadamente, un proceso según la presente divulgación comprende adicionalmente cribar en los clones resultantes los anticuerpos de receptor de TSH, por ejemplo, mediante la inhibición de la unión de 125 I-TSH al receptor de TSH en un sistema de ensayo que tiene una sensibilidad de al menos aproximadamente 1 unidad/l de NIBSC 90/672. La presente divulgación proporciona adicionalmente un proceso de preparación de un anticuerpo recombinante humano, o de uno o más fragmentos del mismo, del receptor de TSH, comprendiendo dicho proceso la clonación y expresión de un anticuerpo monoclonal humano del receptor de TSH como se proporciona por la presente invención mediante un proceso sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria, o uno o más fragmentos derivados del mismo. La presente divulgación proporciona adicionalmente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano del receptor de TSH obtenido mediante un proceso sustancialmente como se describe anteriormente. Preferiblemente, dicho anticuerpo monoclonal o recombinante humano obtenido del receptor de TSH según la presente invención puede caracterizarse por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH al receptor de TSH de al menos aproximadamente 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, o uno o más fragmentos de dicho anticuerpo monoclonal o recombinante humano. Más particularmente, puede preferirse que dicho anticuerpo monoclonal o recombinante humano según la presente divulgación pueda caracterizarse adicionalmente por una actividad estimulante con respecto a la producción de AMPc por células que expresan el receptor de TSH de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 240 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, o uno o más fragmentos de dicho anticuerpo monoclonal o recombinante humano. En una realización preferida de la presente invención, dicho anticuerpo monoclonal o recombinante humano según la presente invención puede caracterizarse por: (i) una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH al receptor de TSH de al menos aproximadamente 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg; y (ii) una actividad estimulante con respecto a la producción de AMPc por células que expresan el receptor de TSH de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más 14   preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 240 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg; o uno o más fragmentos de dicho anticuerpo monoclonal o recombinante humano. Puede preferirse también que uno o más fragmentos de un anticuerpo monoclonal o recombinante humano así obtenido según la presente invención, en particular por ejemplo uno o más fragmentos Fab del mismo, puedan caracterizarse por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH al receptor de TSH de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg. Puede preferirse también que dichos uno o más fragmentos puedan caracterizarse por una actividad estimulante con respecto a la producción de AMPc por células que expresan el receptor de TSH de al menos aproximadamente 50 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, o más preferiblemente de al menos aproximadamente 100 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 200 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg. Más preferiblemente, dichos uno o más fragmentos Fab pueden caracterizarse por: (i) una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH al receptor de TSH de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg; y (ii) una actividad estimulante, con respecto a la producción de AMPc por células que expresan el receptor de TSH, de al menos aproximadamente 50 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, o más preferiblemente de al menos aproximadamente 100 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 200 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg. Un proceso sustancialmente como se describe anteriormente puede comprender adicionalmente una etapa de proceso adicional mediante la cual se somete el anticuerpo monoclonal o recombinante humano obtenido a técnicas de procesamiento adicionales adecuadas (tales como técnicas de mutagénesis adecuadas, tales como mutaciones puntuales o similares) para obtener un copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH que pueda competir con un copartícipe de unión sustancialmente como se describe en la presente memoria (tal como hMAb TSHR1) por la interacción con el receptor de TSH. Dichas técnicas de procesamiento adicionales son bien conocidas por un especialista en la materia. La presente divulgación proporciona adicionalmente un copartícipe de unión adicional al receptor de TSH obtenido mediante dichas técnicas de procesamiento adicionales. Preferiblemente, dicho copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH puede comprender un anticuerpo monoclonal o recombinante y puede caracterizarse por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH al receptor de TSH de al menos aproximadamente 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, o uno o más fragmentos del mismo. Puede preferirse también que dicho copartícipe de unión adicional según la presente divulgación pueda caracterizarse por una actividad estimulante con respecto a la producción de AMPc por células que expresan el receptor de TSH de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 240 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, o uno o más fragmentos del mismo. Puede preferirse aún más también que dicho copartícipe de unión adicional según la presente invención pueda caracterizarse por: (i) una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH al receptor de TSH de al menos aproximadamente 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg; y (ii) una actividad estimulante con respecto a la producción de AMPc por células que expresan el receptor de TSH de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 60 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, más preferiblemente de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg o más preferiblemente de al menos aproximadamente 240 unidades del estándar internacional NIBSC 90/672 por mg, o uno o más fragmentos del mismo.   Un copartícipe de unión para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente divulgación puede tener aplicaciones de diagnóstico y terapéuticas. En consecuencia, puede emplearse un copartícipe de unión para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente divulgación en métodos de cribado para detectar autoanticuerpos del receptor TSH en sueros de paciente y también en métodos de diagnóstico. De este modo, puede emplearse un copartícipe de unión para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente divulgación en lugar de, o además de, competidores del mismo descritos para uso en métodos de cribado para detectar autoanticuerpos del receptor de TSH y también en métodos de diagnóstico. De forma similar, puede emplearse un copartícipe de unión del receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente divulgación en lugar de, o además de, competidores del mismo descritos para uso en kits para uso en la detección de autoanticuerpos del receptor de TSH. La presente invención proporciona por lo tanto también un método de cribado de autoanticuerpos del receptor de TSH en una muestra de fluido corporal obtenida de un sujeto sospechoso de padecer, o susceptible de tener o de estar recuperándose de, una enfermedad autoinmunitaria asociada a una reacción inmunitaria a un receptor de TSH, comprendiendo dicho método: (a) proporcionar dicha muestra de fluido corporal de dicho sujeto; (b) proporcionar uno o más pares de moléculas de unión, en las que una primera molécula de dicho par de unión comprende un copartícipe de unión o un copartícipe de unión adicional del receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente invención y una segunda molécula de dicho par de unión comprende una región de unión con la que interacciona dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional; (c) poner en contacto dicha muestra con dichos uno o más pares de moléculas de unión para permitir a dicha segunda molécula de dicho par de unión interaccionar con (i) autoanticuerpos del receptor de TSH presentes en dicha muestra, o (ii) dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano); y (d) monitorizar la interacción de dicha segunda molécula de dicho par de unión con dichos autoanticuerpos presentes en dicha muestra, proporcionando así una indicación de la presencia de dichos autoanticuerpos del receptor de TSH en dicha muestra. Un método según la presente divulgación para la detección de autoanticuerpos como se describe anteriormente es particularmente ventajoso en términos del nivel de sensibilidad que puede conseguirse mediante el uso del mismo. Esto puede ilustrarse adicionalmente con referencia a los ejemplos y figuras, en que la Figura 3a muestra una representación gráfica de una comparación entre un ensayo de autoanticuerpos de TSHR basado en hMAb TSHR1biotina y ensayos anteriores. La sensibilidad del ensayo basado en hMAb TSHR1-biotina es claramente superior según la concentración del estándar internacional NIBSC 90/672 detectable. Esto se confirmó en un estudio de sueros de 72 pacientes con enfermedad de Graves mostrado en la Figura 3b. Por lo tanto, se proporciona adicionalmente por la presente divulgación un método de cribado de autoanticuerpos de receptor de TSH en una muestra de fluido obtenida de un sujeto sospechoso de padecer, o susceptible de tener o de estar recuperándose de, una enfermedad autoinmunitaria asociada a una reacción inmunitaria al receptor de TSH, comprendiendo dicho método: (a) proporcionar dicha muestra de fluido corporal de dicho sujeto; (b) proporcionar uno o más pares de moléculas de unión, en las que una primera molécula de dicho par de unión comprende un copartícipe de unión o un copartícipe de unión adicional del receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente invención y una segunda molécula de dicho par de unión comprende una región de unión con la que interacciona dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional, en el que la interacción de dichas moléculas de unión es tal que es detectable una valoración de autoanticuerpo en dicha muestra esencialmente correspondiente a 0,4 U/l del estándar internacional NIBSC 90/672; (c) poner en contacto dicha muestra con dichos uno o más pares de moléculas de unión para permitir a dicha segunda molécula de dicho par de unión interaccionar con (i) autoanticuerpos del receptor de TSH presentes en dicha muestra, o (ii) dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente invención; y (d) monitorizar la interacción de dicha segunda molécula de dicho par de unión con dichos autoanticuerpos presentes en dicha muestra, proporcionando así una indicación de la presencia de dichos autoanticuerpos del receptor de TSH en dicha muestra. La sensibilidad anterior puede conseguirse también en un método o kit de ensayo según la presente divulgación mediante el uso de un anticuerpo policlonal humano o no humano del receptor de TSH, TSH o una o más variantes, 16   análogos, derivados o fragmentos de la misma, o un copartícipe de unión del receptor de TSH que tiene una afinidad por el receptor de TSH de 10 10 M -1 o mayor, que exhibe generalmente una afinidad suficiente por el receptor de TSH para proporcionar un método o kit de sensibilidad definida. La preparación de dichos anticuerpos policlonales, TSH o una o más variantes, análogos, derivados o fragmentos de la misma es bien conocida en la materia. Por ejemplo, se describen análogos superactivos de TSH en Nature, Biotechnology, volumen 14, octubre de 1995, páginas 1257- 1263, aunque este artículo no da a conocer el uso de dicha TSH superactiva en un método o kit como se proporciona ahora por la presente divulgación. Por lo tanto, se proporciona adicionalmente por la presente divulgación un método de cribado de autoanticuerpos del receptor de TSH en una muestra de fluido corporal obtenida de un sujeto sospechoso de padecer, o susceptible de tener o de estar recuperándose de, una enfermedad autoinmunitaria asociada a una reacción inmunitaria al receptor de TSH, comprendiendo dicho método: (a) proporcionar dicha muestra de fluido corporal de dicho sujeto; (b) proporcionar uno o más pares de moléculas de unión, en las que una primera molécula de dicho par de unión comprende un anticuerpo policlonal humano o no humano del receptor de TSH y una segunda molécula de dicho par de unión comprende una región de unión con la que interacciona dicho anticuerpo policlonal, en las que la interacción de dichas moléculas de unión es tal que es detectable una valoración de autoanticuerpo en dicha muestra esencialmente correspondiente a 0,4 U/l del estándar internacional NIBSC 90/672; (c) poner en contacto dicha muestra con dichos uno o más pares de moléculas de unión para permitir a dicha segunda molécula de dicho par de unión interaccionar con (i) autoanticuerpos del receptor de TSH presentes en dicha muestra, o (ii) dicho anticuerpo policlonal; y (d) monitorizar la interacción de dicha segunda molécula de dicho par de unión con dichos autoanticuerpos presentes en dicha muestra, proporcionando así una indicación de la presencia de dichos autoanticuerpos del receptor de TSH en dicha muestra. Se proporciona también por la presente divulgación un método de cribado de autoanticuerpos del receptor de TSH en una muestra de fluido corporal obtenida de un sujeto sospechoso de padecer, o susceptible de tener o de estar recuperándose de, una enfermedad autoinmunitaria asociada a una reacción inmunitaria del receptor de TSH, comprendiendo dicho método: (a) proporcionar dicha muestra de fluido corporal de dicho sujeto; (b) proporcionar uno o más pares de moléculas de unión, en las que una primera molécula de dicho par de unión comprende TSH o una o más variantes, análogos, derivados o fragmentos de la misma y una segunda molécula de dicho par de unión comprende una región de unión con la que interacciona dicha TSH o variante, análogo, derivado o fragmento de la misma, en las que la interacción de dichas moléculas de unión es tal que es detectable una valoración de autoanticuerpo en dicha muestra esencialmente correspondiente a 0,4 U/l del estándar internacional NIBSC 90/672; (c) poner en contacto dicha muestra con dichos uno o más pares de moléculas de unión para permitir a dicha segunda molécula de dicho par de unión interaccionar con (i) autoanticuerpos del receptor de TSH presentes en dicha muestra, o (ii) dicha TSH o una o más variantes, análogos, derivados o fragmentos de la misma; y (d) monitorizar la interacción de dicha segunda molécula de dicho par de unión con dichos autoanticuerpos presentes en dicha muestra, proporcionando así una indicación de la presencia de dichos autoanticuerpos del receptor de TSH en dicha muestra. Se da a conocer más adicionalmente también un método de cribado de autoanticuerpos del receptor de TSH en una muestra de fluido corporal obtenida de un sujeto sospechoso o de padecer, o susceptible de tener o de estar recuperándose de, una enfermedad autoinmunitaria asociada a una reacción inmunitaria al receptor de TSH, comprendiendo dicho método: (a) proporcionar dicha muestra de fluido corporal de dicho sujeto; (b) proporcionar uno o más pares de moléculas de unión, en las que una primera molécula de dicho par de unión comprende un copartícipe de unión para el receptor de TSH que tiene una afinidad por el receptor de TSH de 10 10 M -1 o mayor y una segunda molécula de dicho par de unión comprende una región de unión con la que interacciona dicho anticuerpo policlonal, en las que la interacción de dichas moléculas de unión es tal que es detectable una valoración de autoanticuerpo en dicha muestra esencialmente correspondiente a 0,4 U/l del estándar internacional NIBSC 90/672; (c) poner en contacto dicha muestra con dichos uno o más pares de moléculas de unión para permitir a dicha segunda molécula de dicho par de unión interaccionar con (i) autoanticuerpos de receptor de TSH presentes en dicha muestra, o (ii) dicho copartícipe de unión para TSH; y 17   (d) monitorizar la interacción de dicha segunda molécula de dicho par de unión con dichos autoanticuerpos presentes en dicha muestra, proporcionando así una indicación de la presencia de dichos autoanticuerpos de receptor de TSH en dicha muestra. Se proporciona también por la presente divulgación el uso de un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente divulgación para detectar autoanticuerpos del receptor de TSH en una muestra de fluido corporal obtenida de un sujeto sospechoso de padecer, o susceptible de tener o de estar recuperándose de, una enfermedad autoinmunitaria asociada a una reacción inmunitaria al receptor de TSH, en el que la interacción de dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional con el receptor de TSH es tal que es detectable una valoración de autoanticuerpo en dicha muestra esencialmente correspondiente a 0,4 U/l del estándar internacional NIBSC 90/672. Se da a conocer también el uso de un anticuerpo policlonal humano o no humano del receptor de TSH para detectar autoanticuerpos del receptor de TSH en una muestra de fluido corporal obtenida de un sujeto sospechoso de padecer, o susceptible de tener o de estar recuperándose de, una enfermedad autoinmunitaria asociada a una reacción inmunitaria al receptor de TSH, en el que la interacción de dicho anticuerpo policlonal con el receptor de TSH es tal que es detectable una valoración de autoanticuerpo en dicha muestra esencialmente correspondiente a 0,4 U/l del estándar internacional NIBSC 90/672. Se da a conocer también el uso de TSH o una o más variantes, análogos, derivados o fragmentos de la misma para detectar autoanticuerpos del receptor de TSH en una muestra de fluido corporal obtenida de un sujeto sospechoso de padecer, o susceptible de tener o de estar recuperándose de, una enfermedad autoinmunitaria asociada a una reacción inmunitaria al receptor de TSH, en el que la interacción de dicha TSH o una o más variantes, análogos, derivados o fragmentos de la misma con el receptor de TSH es tal que es detectable una valoración de autoanticuerpos en dicha muestra esencialmente correspondiente a 0,4 U/l del estándar internacional NIBSC 90/672. Se da a conocer aún más adicionalmente el uso de un copartícipe de unión del receptor de TSH que tiene una afinidad por el receptor de TSH de 10 10 M -1 o mayor para detectar autoanticuerpos del receptor de TSH en una muestra de fluido corporal obtenida de un sujeto sospechoso de padecer, o susceptible de tener o de estar recuperándose de, una enfermedad autoinmunitaria asociada a una reacción inmunitaria al receptor de TSH, en el que la interacción de dicho copartícipe de unión con el receptor de TSH es tal que es detectable una valoración de autoanticuerpo en dicha muestra esencialmente correspondiente a 0,4 U/l del estándar internacional NIBSC 90/672. Se apreciará que las moléculas de unión del uno o más pares de unión pueden ser antígeno-anticuerpo (por ejemplo, [receptor o epítopo de TSH]-[anticuerpo monoclonal o recombinante de receptor de TSH]), anticuerpo antiidiotípico-anticuerpo monoclonal o recombinante de receptor de TSH o miembro de unión al anticuerpo de receptor de TSH-anticuerpo monoclonal o recombinante de receptor de TSH novedoso. Preferiblemente, las moléculas de unión de los pares de unión son de antígeno-anticuerpo, a saber, [receptor de TSH o uno o más epítopos del mismo]-[anticuerpo monoclonal recombinante de receptor de TSH], en que los epítopos pueden ser independientes o estar presentes en un polipéptido estructural mayor o similar. Preferiblemente, la presente divulgación proporciona un método de cribado de autoanticuerpos del receptor de TSH en una muestra de fluido corporal obtenida de un sujeto sospechoso de padecer de, o susceptible de tener o de estar recuperándose de, una enfermedad autoinmunitaria asociada a una reacción inmunitaria a un receptor de TSH, comprendiendo dicho método: (a) proporcionar dicha muestra de fluido corporal de dicho sujeto; (b) poner en contacto dicha muestra con (i) un receptor de TSH completo, o uno o más epítopos del mismo o un polipéptido que comprende uno o más epítopos de un receptor de TSH, y (ii) un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional del receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente invención, en condiciones que permitan la interacción del receptor de TSH con autoanticuerpos producidos en respuesta al receptor de TSH, para permitir a dicho receptor de TSH, o dichos uno o más epítopos del mismo o dicho polipéptido, interaccionar con autoanticuerpos del receptor de TSH presentes en dicha muestra o dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente, un anticuerpo monoclonal o recombinante humano); y (c) monitorizar la interacción de dicho receptor de TSH, o dichos uno o más epítopos del mismo o dicho polipéptido, con dichos autoanticuerpos presentes en dicha muestra, proporcionando así una indicación de la presencia de dichos autoanticuerpos del receptor de TSH en dicha muestra. En ciertas realizaciones, un método según la presente divulgación puede emplear también uno o más competidores que compiten en la interacción de un anticuerpo policlonal, TSH o una o más variantes, análogos, derivados o fragmentos de la misma, o un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional del receptor de TSH sustancialmente como se describe anteriormente en las realizaciones específicas de los métodos proporcionadas por la presente divulgación y la segunda molécula del par de unión, o receptor de TSH, o uno o más epítopos de la misma o el polipéptido. Dichos competidores pueden comprender TSH o uno o más anticuerpos monoclonales reactivos con el receptor de TSH, tales como anticuerpos monoclonales de ratón reactivos con el receptor de TSH. 18   Preferiblemente, un método según la presente divulgación como se designa anteriormente comprende adicionalmente un medio de marcaje para un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente divulgación y en que el medio de marcaje adecuado de los uno o más competidores apropiados como se describen anteriormente incluyen marcajes enzimáticos, marcajes isotópicos, marcajes quimioluminiscentes, marcajes fluorescentes, tintes y similares. La presente divulgación proporciona también un kit para cribar autoanticuerpos del receptor de TSH en una muestra de fluido corporal obtenida de un sujeto sospechoso de padecer, o susceptible de tener o de estar recuperándose de, una enfermedad autoinmunitaria asociada a una reacción inmunitaria a un receptor de TSH, comprendiendo dicho kit: (a) uno o más pares de moléculas de unión, en el que una primera molécula de dicho par de unión comprende un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente invención y una segunda molécula de dicho par de unión comprende una región de unión con la que interacciona dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional; (b) un medio para poner en contacto dicha muestra de fluido corporal de dicho sujeto con dichos uno o más pares de moléculas de unión para permitir a dicha segunda molécula de dicho par de unión interaccionar con (i) autoanticuerpos del receptor de TSH presentes en dicha muestra, o (ii) dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional de receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano); y (c) un medio para monitorizar la interacción de dicha segunda molécula de dicho par de unión con dichos autoanticuerpos presentes en dicha muestra, proporcionando así una indicación de la presencia de dichos autoanticuerpos del receptor de TSH en dicha muestra. La presente invención proporciona también un kit para cribar autoanticuerpos del receptor de TSH en una muestra de fluido corporal obtenida de un sujeto sospechoso de padecer, o susceptible de tener o de estar recuperándose de, una enfermedad autoinmunitaria asociada a una reacción inmunitaria a un receptor de TSH, comprendiendo dicho kit: (a) uno o más pares de moléculas de unión, en el que una primera molécula de dicho par de unión comprende un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente invención y una segunda molécula de dicho par de unión comprende una región de unión con la que interacciona dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional, en el que la interacción de dichas moléculas de unión es tal que es detectable una valoración de autoanticuerpo en dicha muestra esencialmente correspondiente a 0,4 U/l del estándar internacional NIBSC 90/672; (b) un medio para poner en contacto dicha muestra de fluido corporal de dicho sujeto con dichos uno o más pares de moléculas de unión para permitir a dicha segunda molécula de dicho par de unión interaccionar con (i) autoanticuerpos de receptor de TSH presentes en dicha muestra, o (ii) dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional de receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente invención; y (c) un medio para monitorizar la interacción de dicha segunda molécula de dicho par de unión con dichos autoanticuerpos presentes en dicha muestra, proporcionando así una indicación de la presencia de dichos autoanticuerpos del receptor de TSH en dicha muestra. Se da a conocer también un kit para el cribado de autoanticuerpos del receptor de TSH en una muestra de fluido corporal obtenida de un sujeto sospechoso de padecer, o susceptible de tener o de estar recuperándose de, una enfermedad autoinmunitaria asociada a una reacción inmunitaria al receptor de TSH, comprendiendo dicho kit: (a) uno o más pares de moléculas de unión, en el que una primera molécula de dicho par de unión comprende un anticuerpo policlonal humano o no humano del receptor de TSH y una segunda molécula de dicho par de unión comprende una región de unión con la que interacciona dicho anticuerpo policlonal, en el que la interacción de dichas moléculas de unión es tal que es detectable una valoración de autoanticuerpo en dicha muestra esencialmente correspondiente a 0,4 U/l del estándar internacional NIBSC 90/672; (b) un medio para poner en contacto dicha muestra de fluido corporal de dicho sujeto con dichos uno o más pares de moléculas de unión para permitir a dicha segunda molécula de dicho par de unión interaccionar con (i) autoanticuerpos del receptor de TSH presentes en dicha muestra, o (ii) dicho anticuerpo policlonal; y (c) un medio para monitorizar la interacción de dicha segunda molécula de dicho par de unión con dichos autoanticuerpos presentes en dicha muestra, proporcionando así una indicación de la presencia de dichos autoanticuerpos del receptor TSH en dicha muestra. Se da a conocer también un kit para el cribado de autoanticuerpos del receptor de TSH en una muestra de fluido corporal obtenida de un sujeto sospechoso de padecer, o susceptible de tener o de estar recuperándose de, una enfermedad autoinmunitaria asociada a una reacción inmunitaria el receptor de TSH, comprendiendo dicho kit: 19   (a) uno o más pares de moléculas de unión, en el que una primera molécula de dicho par de unión comprende TSH o una o más variantes, análogos, derivados o fragmentos de la misma, y una segunda molécula de dicho par de unión comprende una región de unión con la que interacciona dicha TSH o una o más variantes, análogos, derivados o fragmentos de la misma, en el que la interacción de dichas moléculas de unión es tal que es detectable una valoración de autoanticuerpo en dicha muestra esencialmente correspondiente a 0,4 U/l del estándar internacional NIBSC 90/672; (b) un medio para poner en contacto dicha muestra de fluido corporal de dicho sujeto con dichos uno o más pares de moléculas de unión para permitir a dicha segunda molécula de dicho par de unión interaccionar con (i) autoanticuerpos del receptor de TSH presentes en dicha muestra, o (ii) TSH o una o más variantes, análogos, derivados o fragmentos de la misma; y (c) un medio para monitorizar la interacción de dicha segunda molécula de dicho par de unión con dichos autoanticuerpos presentes en dicha muestra, proporcionando así una indicación de la presencia de dichos autoanticuerpos del receptor de TSH en dicha muestra. Se da a conocer también un kit para el cribado de autoanticuerpos del receptor de TSH en una muestra de fluido corporal obtenida de un sujeto sospechoso de padecer, o susceptible de tener o de estar recuperándose de, una enfermedad autoinmunitaria asociada a una reacción inmunitaria al receptor de TSH, comprendiendo dicho kit: (a) uno o más pares de moléculas de unión, en el que una primera molécula de dicho par de unión comprende un copartícipe de unión para el receptor de TSH que tiene una afinidad por el receptor de TSH de 10 10 M -1 o mayor y una segunda molécula de dicho par de unión que comprende una región de unión con la que interacciona dicho copartícipe de unión, en el que la interacción de dichas moléculas de unión es tal que es detectable una valoración de autoanticuerpo en dicha muestra esencialmente correspondiente a 0,4 U/l del estándar internacional NIBSC 90/672; (b) un medio para poner en contacto dicha muestra de fluido corporal de dicho sujeto con dichos uno o más pares de moléculas de unión para permitir a dicha segunda molécula de dicho par de unión interaccionar con (i) autoanticuerpos del receptor de TSH presentes en dicha muestra, o (ii) dicho copartícipe de unión del receptor de TSH; y (c) un medio para monitorizar la interacción de dicha segunda molécula de dicho par de unión con dichos autoanticuerpos presentes en dicha muestra, proporcionando así una indicación de la presencia de dichos autoanticuerpos del receptor de TSH en dicha muestra. Se apreciará que las moléculas de unión del uno o más pares de unión pueden ser antígeno-anticuerpo (por ejemplo, [receptor o epítopo de TSH]-[anticuerpo de receptor de TSH monoclonal o recombinante]), anticuerpo antiidiotípico-anticuerpo monoclonal o recombinante de receptor de TSH o elemento de unión al anticuerpo de receptor de TSH-anticuerpo monoclonal o recombinante de receptor de TSH novedoso. Preferiblemente, las moléculas de unión de los pares de unión son de antígeno-anticuerpo, a saber, [receptor de TSH o uno o más epítopos del mismo]-[anticuerpo monoclonal o recombinante de receptor de TSH], en que los epítopos pueden ser independientes o estar presentes en un polipéptido estructural mayor o similar. La presente invención da a conocer preferiblemente un kit para el cribado de autoanticuerpos del receptor de TSH en una muestra de fluido corporal obtenida de un sujeto sospechoso de, o susceptible de tener o de estar recuperándose de, una enfermedad autoinmunitaria asociada a una reacción inmunitaria al receptor de TSH, comprendiendo dicho kit: (a) un receptor de TSH completo o uno o más epítopos del mismo o un polipéptido que comprende uno o más epítopos del receptor de TSH; (b) un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente invención; (c) un medio para poner en contacto dicha muestra de fluido corporal de dicho sujeto, dicho receptor de TSH, o dichos uno o más epítopos del mismo o dicho polipéptido, y dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano), en condiciones que permitan la interacción del receptor de TSH con autoanticuerpos producidos en respuesta al receptor de TSH para permitir a dicho receptor de TSH, o dichos uno o más epítopos de mismo o dicho polipéptido, interaccionar con autoanticuerpos de un receptor de TSH presentes en dicha muestra o dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano); y (d) un medio para monitorizar la interacción de dicho receptor de TSH, o dichos uno o más epítopos del mismo o dicho polipéptido, con dichos autoanticuerpos presentes en dicha muestra, proporcionando así una indicación de la presencia de dichos autoanticuerpos del receptor de TSH en dicha muestra. En ciertas realizaciones, un kit según la presente divulgación puede comprender adicionalmente uno o más   competidores que compiten en la interacción de un anticuerpo policlonal, TSH o una o más variantes, análogos, derivados o fragmentos de la misma, o un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional del receptor de TSH, como se definen respectivamente anteriormente, y la segunda molécula del par de unión, o el receptor de TSH, o el uno o más epítopos del mismo o el polipéptido. Dichos competidores pueden comprender TSH o uno o más anticuerpos monoclonales reactivos con el receptor de TSH, tales como anticuerpos monoclonales de ratón reactivos con el receptor de TSH. Un kit como se designa anteriormente comprende adicionalmente de forma adecuada un medio de marcaje para un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente divulgación y, cuando sea apropiado, uno o más competidores como se describen anteriormente, siendo el medio de marcaje adecuado sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria. En presencia de autoanticuerpos del receptor de TSH, se reducirá la unión del receptor de TSH a un copartícipe de unión del receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) en un método o kit como se describe anteriormente. Un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional del receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente invención puede emplearse también en métodos y kits de ensayo sustancialmenet como se describe anteriormente para TSH y ligandos relacionados. Por lo tanto, la presente divulgación proporciona también un método de ensayo de TSH y ligandos relacionados, comprendiendo dicho método: (a) proporcionar una muestra sospechosa de contener o que contiene TSH o ligandos relacionados: (b) proporcionar uno o más pares de moléculas de unión, en el que una primera molécula de dicho par de unión comprende un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente invención y una segunda molécula de dicho par de unión comprende una región de unión con que interacciona dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional; (c) poner en contacto dicha muestra con dichos uno o más pares de moléculas de unión para permitir a dicha segunda molécula de dicho par de unión interaccionar con (i) TSH o ligandos relacionados presentes en dicha muestra o (ii) dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional del receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano); y (d) monitorizar la interacción de dicha segunda molécula de dicho par de unión con TSH o ligandos relacionados presentes en dicha muestra, proporcionando así una indicación de la presencia de TSH o ligandos relacionados en dicha muestra. La presente divulgación proporciona también un kit para ensayar TSH o ligandos relacionados, comprendiendo dicho kit: (a) uno o más pares de moléculas de unión, en el que una primera molécula de dicho par de unión comprende un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente invención y una segunda molécula de dicho par de unión comprende una región de unión con la que interacciona dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional; (b) un medio para poner en contacto una muestra sospechosa de contener o que contiene TSH o ligandos relacionados con dichos uno o más pares de moléculas de unión para permitir a dicha segunda molécula de dicho par de unión interaccionar con (i) TSH o ligandos relacionados presentes en dicha muestra, o (ii) dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano); y (c) un medio para monitorizar la interacción de dicha segunda molécula de dicho par de unión con TSH o ligandos relacionados presentes en dicha muestra, proporcionando así una indicación de la presencia de TSH o ligandos relacionados en dicha muestra. La presente divulgación proporciona adicionalmente también un método de identificación de un copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH, siendo dicho copartícipe de unión adicional capaz de unirse al receptor de TSH y que compite por la unión al receptor de TSH con un copartícipe de unión del receptor de TSH sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria, no comprendiendo dicho copartícipe de unión adicional TSH y comprendiendo dicho método: (a) proporcionar uno o más pares de moléculas de unión, en el que una primera molécula de dicho par de unión comprende un copartícipe de unión de receptor de TSH sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria y una segunda molécula de dicho par de unión comprende una región de unión con la que 21   interacciona dicho copartícipe de unión; (b) proporcionar una molécula de unión adicional para ensayar como copartícipe de unión adicional potencial para el receptor de TSH, que compite por la unión al receptor de TSH con dicha primera molécula de dicho par de unión de (a); (c) poner en contacto dicha molécula de unión adicional de (b) con dichos uno o más pares de moléculas de unión de (a) para permitir a dicha segunda molécula de dicho par de unión de (a) interaccionar con (i) dicha molécula de unión adicional de (b) o (ii) dicha primera molécula de dicho par de unión de (a); y (d) monitorizar la interacción de dicha segunda molécula de dicho par de unión de (a) con dicha molécula de unión adicional de (b), y evaluar así si dicha molécula de unión adicional de (b) compite por la unión al receptor de TSH con dicha primera molécula de dicho par de unión de (a). La presente divulgación proporciona también un kit para identificar un copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH, siendo capaz dicho copartícipe de unión adicional de unirse al receptor de TSH y que compite por la unión al receptor de TSH con un copartícipe de unión del receptor de TSH sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria, no comprendiendo dicho copartícipe de unión adicional TSH, comprendiendo dicho kit: (a) uno o más pares de moléculas de unión, en el que una primera molécula de dicho par de unión comprende un copartícipe de unión para el receptor de TSH sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria y una segunda molécula de dicho par de unión comprende una región de unión con la que interacciona dicho copartícipe de unión; (b) un medio para poner en contacto dichos uno o más pares de moléculas de unión de (a) con una molécula de unión adicional para ensayar como copartícipe de unión adicional potencial para el receptor de TSH, que compite por la unión al receptor de TSH con dicha primera molécula de dicho par de unión de (a), para permitir a dicha segunda molécula de dicho par de unión de (a) interaccionar con (i) dicha molécula de unión adicional o (ii) dicha primera molécula de dicho par de unión de (a); y (c) un medio para monitorizar la interacción de dicha segunda molécula de dicho par de unión de (a) con dicha molécula de unión adicional, y evaluar así si dicha molécula de unión adicional compite por la unión al receptor de TSH con dicha primera molécula de dicho par de unión de (a). Una aplicación adicional de un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente divulgación es su uso para identificar y proporcionar nuevos tipos de sitios de unión de anticuerpo de receptor de TSH. Por lo tanto, se proporciona adicionalmente por la presente divulgación un proceso de identificación de una o más regiones epitópicas del receptor de TSH, comprendiendo dicho proceso poner en contacto un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria con un receptor de TSH completo, o uno o más fragmentos del mismo, para permitir la interacción de dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH con dicho receptor de TSH completo, o dichos uno o más fragmentos del mismo, e identificar los aminoácidos de dicho receptor de TSH completo, o dichos uno o más fragmentos del mismo, con que interacciona dicho copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional. Se analiza adecuadamente la interacción de el copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional con fragmentos seleccionados del receptor de TSH y el receptor de TSH completo, para identificar los aminoácidos del receptor de TSH con que interacciona el copartícipe de unión. Además, la presente divulgación permite la generación de anticuerpos de las regiones de un anticuerpo monoclonal de receptor de TSH según la presente divulgación que se unen con el receptor de TSH. Dichos anticuerpos antiidiotípicos producidos de este modo podrían tener potencial como nuevos ligandos para ensayos de autoanticuerpos de receptor de TSH, TSH y compuestos relacionados. También pueden ser agentes eficaces in vivo para la regulación de la acción de los autoanticuerpos de receptor de TSH, TSH y compuestos relacionados. Por lo tanto, la presente divulgación proporciona adicionalmente uno o más anticuerpos antiidiotípicos generados para unirse a regiones de unión de un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria, y la preparación de los mismos se describe adicionalmente por los ejemplos. Son bien conocidos otros métodos de identificación y provisión de nuevos tipos de sitios de unión de anticuerpo usando anticuerpos monoclonales. Por ejemplo, mediante cribado de anticuerpos de colecciones peptídicas aleatorias exhibidas en fago como se describe por JC Scott y GP Smith; Searching for peptide ligands with an epitope library; Science 1990; 249(4967): 386-390 y MA Myers, JM Davies, JC Tong, J Whisstock, M Scealy, IR MacKay, MJ Rowley; Conformational epitopes on the diabetes autoantigen GAD65 identified by peptide phage display and molecular modelling; Journal of Immunology 2000; 165: 3830-3838. Puede llevarse a cabo también el cribado de compuestos no peptídicos y colecciones de compuestos no peptídicos. 22   Los nuevos tipos de sitios de unión de anticuerpo de receptor de TSH identificados y proporcionados usando estos procedimientos pueden ser también útiles como nuevos ligandos en ensayos de autoanticuerpos de receptor de TSH, TSH y compuestos relacionados. Además, pueden ser agentes eficaces in vivo para regular la acción de los autoanticuerpos de receptor de TSH, TSH y compuestos relacionados. Un copartícipe de unión del receptor de TSH o copartícipe de unión adicional (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente divulgación sustancialmente como se describe anteriormente en la presente divulgación puede emplearse también útilmente en terapia. Por lo tanto, se proporcionan adicionalmente por la presente divulgación métodos de tratamiento que comprenden la administración de un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional del receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria, composiciones farmacéuticas que comprenden un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional del receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria (junto con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables para ellos), y el uso de un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria en la fabricación de un medicamento o composición. Un copartícipe de unión del receptor de TSH, en particular un anticuerpo monoclonal humano del receptor de TSH derivado de linfocitos de pacientes según la presente divulgación, es un reactivo valioso para comprender la patogénesis de la enfermedad de Graves y para desarrollar nuevos métodos de medida de autoanticuerpos de receptor de TSH, por ejemplo, como sustitutos de TSH en ensayos de unión competitiva sustancialmente como se describen anteriormente en la presente memoria. También un copartícipe de unión estimulante según la presente invención tiene aplicaciones in vivo cuando el tejido que contiene el receptor de TSH (por ejemplo, tejido tiroideo o tejido de cáncer de tiroides) requiere estimulación. Por lo tanto, la presente divulgación proporciona un medicamento o composición para uso en la estimulación del tejido tiroideo y/o tejido que contiene el receptor de TSH. En particular, un copartícipe de unión estimulante para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente invención puede emplearse en oncología, y en particular para uso en el diagnóstico, gestión y tratamiento del cáncer de tiroides. Como alternativa, un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional del receptor de TSH según la presente divulgación puede ser un potente antagonista de TSH o autoanticuerpo (anticuerpo bloqueante) y dicho anticuerpo de receptor de TSH bloqueante según la presente invención es valioso para aplicaciones in vivo cuando la actividad del tejido que contiene el receptor de TSH (por ejemplo, tejido tiroideo o tejido de cáncer de tiroides) requiere inactivación o volverse insensible a TSH, autoanticuerpos de receptor de TSH u otros estimulantes. Se dan a conocer también en combinación un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria, junto con uno o más agentes adicionales capaces de inactivar o volver insensible a tejido que contiene un receptor de TSH, autoanticuerpos de receptor de TSH u otros estimulantes. Típicamente, el uno o más agentes adicionales actúan independientemente del receptor de TSH. Una aplicación terapéutica particular en que la unión del autoanticuerpo de receptor de TSH requiere inactivación o inhibición es en el tratamiento de enfermedad de los tejidos retroorbitales del ojo asociada a autoinmunidad al receptor de TSH, y el uso de un anticuerpo bloqueante que interacciona con el receptor de TSH, tal como 9D33, para inhibir la unión de autoanticuerpo de receptor de TSH tiene por tanto una utilidad terapéutica importante en el tratamiento de dicha enfermedad. El tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria que requiere la inhibición de la unión de autoanticuerpo de TSH, tal como la enfermedad debatida anteriormente de tejidos retroorbitales del ojo asociada a autoinmunidad al receptor de TSH, puede emplear como alternativa un anticuerpo antiidiotípico de un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional como se proporciona por la presente invención, y dichos anticuerpos antiidiotípicos forman un aspecto adicional de la presente divulgación como se describe en la presente memoria y se proporcionan detalles preparatorios adicionales de los mismos en los ejemplos. Por lo tanto, más específicamente, la presente divulgación proporciona el uso en el tratamiento de enfermedad de los tejidos retroorbitales del ojo asociada a autoinmunidad al receptor de TSH de un copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH, inhibiendo dicho copartícipe de unión adicional sustancialmente la unión al receptor de TSH de un copartícipe de unión para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria. La presente divulgación proporciona adicionalmente el uso en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad de los tejidos retroorbitales del ojo asociada a la activación y/o estimulación del receptor de TSH de un copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH, inhibiendo dicho copartícipe de unión adicional sustancialmente la unión al receptor de TSH de un copartícipe de unión para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria. Se proporciona también un método de tratamiento de enfermedad de los tejidos retroorbitales del ojo asociada a autoinmunidad al receptor de TSH, comprendiendo dicho método la administración a un paciente que padece o es susceptible de dicha enfermedad de una cantidad terapéuticamente eficaz de un copartícipe de unión adicional del receptor de TSH, inhibiendo dicho copartícipe de unión adicional sustancialmente la unión al receptor de TSH de un copartícipe 23   de unión para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria. Un copartícipe de unión adicional para uso en estas realizaciones de la presente divulgación comprende preferiblemente un anticuerpo bloqueante que puede inhibir sustancialmente la unión de un copartícipe de unión como se proporciona por la presente invención, y como tal la unión de anticuerpo de receptor de TSH al receptor de TSH, y uno de dichos anticuerpos preferidos puede comprender 9D33 como se describe en la presente memoria. La presente divulgación proporciona también el uso de un anticuerpo antiidiotípico generado en una región de unión de un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional según la presente invención en el tratamiento de la enfermedad de los tejidos retroorbitales del ojo asociada a autoinmunidad al receptor de TSH. La presente divulgación proporciona adicionalmente el uso de un anticuerpo antiidiotípico generado en una región de unión de un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional según la presente divulgación en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de enfermedad de los tejidos retroorbitales del ojo asociada a la activación y/o estimulación del receptor de TSH. Se proporciona también un método de tratamiento de enfermedad de los tejidos retroorbitales del ojo asociada a autoinmunidad al receptor de TSH, comprendiendo dicho método la administración a un paciente que padece o es susceptible de dicha enfermedad de una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo antiidiotípico generado en una región de unión de un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional según la presente invención. Una de las ventajas principales de un anticuerpo monoclonal como se proporciona por la presente divulgación frente a la TSH en dichas aplicaciones in vitro y/o in vivo es la facilidad relativa con que dichos anticuerpos pueden manipularse. Por ejemplo, la manipulación de la región de unión del receptor de TSH de un anticuerpo monoclonal según la presente divulgación para cambiar las características del mismo, tales como afinidad y características biológicas, incluyendo el grado de actividades agonista o antagonista de TSH. También los anticuerpos monoclonales según la presente invención tienen una semivida mucho más larga que la TSH in vivo, y esto puede tener considerables ventajas en aplicaciones in vivo. Además, la semivida de los anticuerpos puede manipularse, por ejemplo, los fragmentos Fab de anticuerpo tienen una semivida mucho más corta que la IgG intacta. Las composiciones farmacéuticas según la presente divulgación incluyen aquellas adecuadas para administración oral, parenteral y tópica, aunque la vía más adecuada dependerá generalmente de la afección del paciente y de la enfermedad específica que se esté tratando. La cantidad precisa de un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria a administrar a un paciente será responsabilidad del médico a cargo, aunque la dosis empleada dependerá de una serie de factores, incluyendo la edad y sexo del paciente, la enfermedad específica que se esté tratando y la vía de administración, sustancialmente como se describe anteriormente. Se proporciona adicionalmente por la presente divulgación un método de estimulación de tejido tiroideo y/o tejido que contiene un receptor de TSH, comprendiendo dicho método administrar a un paciente necesitado de dicha estimulación una cantidad eficaz en diagnóstico o terapia de un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria. La presente divulgación proporciona también en combinación un copartícipe de unión para el receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) sustancialmente como se describe anteriormente en la presente memoria, junto con uno o más agentes adicionales capaces de estimular el tejido tiroideo y/o tejido que contiene un receptor de TSH, para uso simultáneo, separado o secuencial en la estimulación de tejido tiroideo y/o tejido que contiene un receptor de TSH. Preferiblemente, el uno o más agentes adicionales comprenden TSH humana recombinante y/o una o más variantes, análogos, derivados o fragmentos de la misma, o variantes, análogos o derivados de dichos fragmentos. Como alternativa, el uno o más agentes adicionales pueden actuar independientemente de la unión al receptor de TSH. Un copartícipe de unión para el receptor de TSH o copartícipe de unión adicional (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) según la presente divulgación puede emplearse también como fuente de reemplazo para suero de paciente que se requiere que contenga anticuerpo o anticuerpos de receptor de TSH para uso en kits comerciales. Además, un copartícipe de unión o copartícipe de unión adicional del receptor de TSH (típicamente un anticuerpo monoclonal o recombinante humano) puede proporcionarse según la presente divulgación en una preparación que se requiera que comprenda una concentración definida de anticuerpo o anticuerpos de receptor de TSH, y de este modo puede proporcionarse una preparación con una actividad definida, tal como actividad estimulante, con respecto al receptor de TSH. Opcionalmente, dicha preparación puede comprender uno o más anticuerpos monoclonales humanos adicionales tales como anticuerpos monoclonales de GAD, TPO o similares. Las siguientes explicaciones ilustrativas se proporcionan para facilitar la comprensión de ciertos términos usados en la presente memoria. Las explicaciones se proporcionan por conveniencia y no son limitantes de la invención. COPARTÍCIPE DE UNIÓN DE UN RECEPTOR DE TSH describe una molécula que tiene especificidad de unión por 24   el receptor de TSH. Un copartícipe de unión como se describe en la presente memoria puede ser un derivado natural o producirse sintéticamente total o parcialmente. Dicho copartícipe de unión tiene un dominio o región que se une específicamente con, y por lo tanto es complementario de, una o más regiones epitópicas del receptor de TSH. En particular, un copartícipe de unión como se describe en la presente memoria puede ser un anticuerpo monoclonal o recombinante del receptor de TSH, y más particularmente puede ser un anticuerpo monoclonal o recombinante humano del receptor de TSH. DOMINIO C denota una región de secuencia aminoacídica relativamente constante en moléculas de anticuerpo. CDR denota regiones determinantes de la complementariedad que están presentes tanto en la cadena pesada como ligera de moléculas de anticuerpo y representan regiones de gran variabilidad de secuencia. Las CDR representan aproximadamente un 15 a 20% de los dominios variables y representan los sitios de unión de antígeno de un anticuerpo. FR denota regiones estructurales y representan el resto de los dominios ligeros variables y dominios pesados variables no presentes en las CDR. HC denota parte de una cadena pesada de una molécula de anticuerpo que comprende el dominio variable de cadena pesada y el primer dominio de una región constante de IgG. CÉLULA HOSPEDADORA es una célula que se ha transformado o transfectado o que es capaz de transformación o transfección por una secuencia polinucleotídica exógena. IDENTIDAD, como es conocido en la materia, es la relación entre dos o más secuencias polipeptídicas, o dos o más secuencias polinucleotídicas, como se determina comparando las secuencias. LC denota una cadena ligera de una molécula de anticuerpo. NIBSC 90/672 es un estándar internacional para anticuerpo estimulante del tiroides. El estándar internacional para actividad estimulante del tiroides consiste en un lote de ampollas que contienen proteínas plasmáticas liofilizadas de un único paciente humano con altos niveles de autoanticuerpos de receptor de TSH. La preparación se ha evaluado en un estudio colaborativo internacional y se ha mostrado que posee tanto actividad estimulante del tiroides como de unión al receptor de tiroides. En la 46ª reunión de 1995, el Comité de expertos sobre estandarización biológica de la OMS estableció la preparación codificada como 90/672 como el estándar internacional para anticuerpo estimulante del tiroides. Cada ampolla contiene el residuo liofilizado de 1,0 ml de una disolución que contiene tampón fosfato 0,02 M, proteínas plasmáticas humanas dializadas y 0,1 unidades internacionales (100 miliunidades internacionales) por ampolla por definición. ESTIMULACIÓN DE UN RECEPTOR DE TSH por un anticuerpo monoclonal humano como se describe en la presente memoria denota la capacidad del mismo para unirse a un receptor de TSH y modificar así, por ejemplo, la producción de AMP cíclico como resultado de dicha unión al receptor de TSH. Dicha estimulación es análoga a las respuestas observadas en la unión de TSH, o autoanticuerpos de receptor de TSH, al receptor de TSH, y de este modo un anticuerpo monoclonal humano como se describe en la presente memoria proporciona esencialmente las mismas o similares respuestas de unión que las observadas con la unión de TSH o autoanticuerpo de receptor de TSH a un receptor de TSH. DOMINIO V denota una región de secuencia aminoacídica altamente variable en moléculas de anticuerpo. DOMINIO VH denota regiones o dominios variables en cadenas pesadas de moléculas de anticuerpo. DOMINIO VL denota regiones o dominios variables en cadenas ligeras de moléculas de anticuerpo. La presente invención se ilustrará ahora mediante las siguientes figuras y ejemplos, que no limitan el alcance de la invención en modo alguno. EJEMPLOS Materiales y métodos Aislamiento de linfocitos y clonación de autoanticuerpos monoclonales humanos de receptor de TSH Se obtuvo sangre de un paciente con enfermedad de Graves y diabetes sacarina de tipo I que tenía altos niveles de autoanticuerpos séricos de receptor de TSH (TRAb).Se obtuvo la aprobación del Comité de ética para los estudios. Se aislaron linfocitos de sangre periférica en Ficoll-Paque (Amersham Biosciences; Chalfont St Giles, HP8 4SP, RU) a partir de una muestra de sangre de 20 ml y se infectaron entonces con virus de Epstein Barr (EBV) (European Collection of Cell Cultures--ECACC; Porton Down, SP4 OJG, RU) y se cultivaron en capas de alimentación de macrófagos de ratón como se describe anteriormente (N Hayakawa, LDKE Premawardhana, M Powell, M Masuda, C Arnold, J Sanders, M Evans, S Chen, J C Jaume, S Baekkeskov, B Rees Smith, J Furnaniak; Isolation and characterization of human monoclonal autoantibodies to glutamic acid decarboxylase; Autoimmunity 2002; 35: 343-   355). Se fusionaron entonces linfocitos B inmortalizados con EBV con la estirpe celular híbrida de ratón/humano K6H6/B5 (WL Carroll, K Thilemans, J Dilley, R Levy; Mouse×human heterohybridomas as fusion partners with human B cell tumors; Journal of Immunological Methods 1986; 89: 61-72) y se clonaron dos veces mediante dilución limitante a 5 células/pocillo y en el momento final a célula/pocillo, obteniéndose una sola colonia (BJ Bolton, NK Spurr. B-lymphocytes en: RI Freshney, MG Freshney (eds). Culture of immortalized cells. Wiley-Liss, Nueva York 1996; 283-297). Se cribaron en los pocillos originales y clones posteriores los autoanticuerpos de receptor de TSH mediante la inhibición de la unión de 125 I-TSH a receptor de TSH solubilizado (véase a continuación). Los clones individuales productores de autoanticuerpos de receptor de TSH se cultivaron en matraces de cultivo de tejido. Producción, purificación y marcaje de preparaciones de anticuerpo monoclonal de receptor de TSH Se produjeron MAb de receptor de TSH como se describe anteriormente (Y Oda, J Sanders, M Evans, A Kiddie, A Munkley, C James, T Richards, J Wills, J Furmaniak, B Rees Smith; Epitope analysis of the human thyrotropin (TSH) receptor using monoclonal antibodies; Thyroid 2000; 10: 1051-1059) y se prepararon también a partir de ratones inmunizados con ADNc de TSHR completo clonado en pcDNA3.1 (UA Hasan, AM Abai, DR Harper, BW Wren, WJW Morrow; Nucleic acid immunization: Concepts and techniques associated with third generation vaccines; Journal of Immunological Methods 1999; 229: 1-22). Se purificaron las IgG de los sobrenadantes de cultivo de tejido usando cromatografía de afinidad en Prosep A (Millipore UK Ltd.; Watford, WD18 8YH, RU) según las instrucciones del fabricante y se valoró la pureza por electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS (PAGE). Se determinó el isotipo de la cadena pesada humana usando un ensayo de difusión radial (The Binding Site; Birmingham, B29 6AT, RU). Se determinó el isotipo de la cadena ligera humana usando transferencia Western con anticuerpos monoclonales de ratón específicos anti-cadena kappa humana y anti-cadena lambda humana (Sigma- Aldrich Company Ltd; Gillingham, SP8 4XT, RU). Se trataron las preparaciones de IgG purificadas con mercuripapaína (Sigma-Aldrich) a una relación de enzima/proteína de entre 1:10 y 1:100 (dependiendo del anticuerpo monoclonal particular) y se pasaron a través de una columna Prosep A para eliminar cualquier IgG intacta o fragmento Fc de la preparación de Fab (Y Oda, J Sanders, S Roberts, M Maruyama, R Kato, M Perez, V B Petersen, N Wedlock, J Furmaniak, B Rees Smith; Binding characteristics of antibodies to the TSH receptor; Journal of Molecular Endocrinology 1998; 20: 233-244). La IgG intacta era indetectable por PAGE-SDS en las preparaciones de Fab. Se marcaron las preparaciones de IgG y Fab de los anticuerpos monoclonales con 125 I como se describe anteriormente (Y Oda, J Sanders, S Roberts, M Maruyama, R Kato, M Perez, V B Petersen, N Wedlock, J Furmaniak, B Rees Smith; Binding characteristics of antibodies to the TSH receptor; Journal of Molecular Endocrinology; 1998; 20: 233-244). Se marcaron las preparaciones de IgG con hidrazida de biotina (Pierce Rockford Ill. 61105 EE.UU.) según las instrucciones del fabricante. Se obtuvieron cristales de fragmentos Fab del autoanticuerpo monoclonal humano de receptor de TSH y se determinó su estructura cristalina usando técnicas estándar. Pacientes Se estudiaron los sueros de pacientes con enfermedad de Graves de diferente duración de la enfermedad. Los sueros de pacientes estudiados mostraron inhibición de la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH (véase a continuación). Además, se estudiaron sueros de 2 pacientes con enfermedad de Addison (A1 y A2) y altos niveles de autoanticuerpos de 21-OH (113 y 1970 unidades por mL, kit RSR) y sueros de 2 pacientes con diabetes sacarina de tipo 1 (D1 y D2) con altos niveles de GAD65 (3700 y 37,5 unidades por ml; kit RSR). Se obtuvo el consentimiento informado para el estudio de los pacientes. Se estudiaron también los sueros de donantes de sangre sanos (adquiridos en Golden West Biologicals, Vista, Calif. 92083, EE.UU.). Se obtuvo la primera preparación estándar internacional de TRAb (90/672) del National Institute for Biological Standards and Control (NIBSC; Potters Bar, EN6 3QH, RU). Inhibición de la unión de 125 I-TSH y 125 I-MAb TSHR de ratón al receptor de TSH Se llevaron a cabo ensayos de inhibición de la unión usando tubos recubiertos con receptor de TSH como se describe anteriormente (J Sanders, Y Oda, S Roberts, A Kiddie, T Richards, J Bolton, V McGrath, S Walters, D Jaskolski, J Furmaniak, B Rees Smith; The interaction of TSH receptor autoantibodies with 125 I-labeled TSH receptor; Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 1999; 84: 3797-3802) (reactivos de RSR Ltd). Brevemente, se incubaron 100 l de muestra (sobrenadante de cultivo de tejido, IgG o fragmento Fab purificado, suero de paciente o estándares NIBSC 90/672) en tubos recubiertos con receptor de TSH a temperatura ambiente durante 2 horas con agitación suave. Después de la aspiración, se lavaron los tubos dos veces con 1 ml de tampón de ensayo (NaCl 50 mmol/l, Tris-HCl 10 mmol/l pH 7,8, 0,1% de Triton X-100) antes de la adición de 100 l de 125 I- TSH o 125 I-MAb (5×10 4 cpm) e incubación a temperatura ambiente durante 1 hora con agitación. Se lavaron entonces los tubos dos veces con 1 ml de tampón de ensayo, se sometieron a aspiración y a recuento en un contador gamma. Se calculó la inhibición de la unión como: 26   100 × 1 - cpm unidos en presencia de material de ensayo cpm unidos en presencia de material de control Los materiales de control usados fueron medio de cultivo, un conjunto de sueros de donantes de sangre sanos o como se indica de otro modo. Análisis de las actividades estimulantes del tiroides Se llevaron a cabo estudios de la capacidad de las preparaciones de autoanticuerpo monoclonal y sueros de paciente de estimular la producción de AMP cíclico (o AMPc) en células CHO que expresaban el receptor hTSH (aproximadamente 50.000 receptores por célula) (Y Oda, J Sanders, S Roberts, M Maruyama, R Kato, M Perez, VB Petersen, N Wedlock, J Furnaniak, B Rees Smith; Binding characteristics of antibodies to the TSH receptor; Journal of Molecular Endocrinology 1998; 20: 233-244) según el método de R Latif, P Graves, TF Davies; Oligomerization of the human thyrotropin receptor; Journal of Biological Chemistry 2001; 276: 45217-45224. Brevemente, se sembraron células CHO en placas de 96 pocillos (30.000 células por pocillo) y se incubaron durante 24 horas en DMEM (Invitrogen Ltd; Paisley PA4 9RF, RU) que contenía un 10% de suero fetal de ternero. Se continuó entonces el cultivo en DMEM sin suero fetal de ternero durante 24 horas adicionales. Se retiró entonces el DMEM y se añadieron TSH, IgG, Fab y suero de ensayo (100 l diluidos en disolución salina tamponada de Hanks exenta de NaCl que contenía glucosa 1 g/l, Hepes 20 mmol/l, sacarosa 222 mmol/l, seroalbúmina bovina (BSA) 15 g/l y 3isobutil-1-metilxantina 0,5 mmol/l, pH 7,4) y se incubaron durante 1 hora a 37ºC. Después de la retirada de las disoluciones de ensayo, se lisaron las células y se ensayó el AMP cíclico usando un sistema de inmunoensayo enzimático Biotrak de Amersham Biosciences; Chalfont St Giles, HPS 4SP, RU. En algunos experimentos, se valoró la capacidad de los sueros de paciente y anticuerpos monoclonales de ratón de TSHR de inhibir la actividad estimulante de TSH o hMAb TSHR1. Se llevó a cabo esto comparando (a) los efectos estimulantes de TSH o hMAb TSHR1 solos con (b) los efectos estimulantes de TSH o hMAb TSHR1 en presencia de sueros de paciente o anticuerpo monoclonal de ratón. Análisis génico de la región variable Se preparó el ARN total a partir de 1×10 7 células de un clon productor de autoanticuerpo de receptor de TSH usando el método de fenol-guanidina ácida (P Chomczynski, N Sacchi; Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction; Analytical Biochemistry 1987; 162: 156-159) y ARNm preparado usando perlas magnéticas de oligo-dT (Dynal Biotech Ltd; Wirral, CH62 3QL, RU). Se efectuaron reacciones de PCR-TI usando reactivos de Invitrogen Ltd; Paisley PA4 9RF, RU. Se diseñaron cebadores oligonucleotídicos codificantes usando las secuencias recomendadas por la base de datos V-base del Medical Research Council (www.mrc-cpe.cam.ac.uk). Los cebadores anticodificantes específicos de la cadena pesada y la cadena ligera lambda de IgG1 humana se basaron en secuencias de ADN que codifican la región constante. Tanto los cebadores codificantes como anticodificantes incluían secuencias de sitio de endonucleasa de restricción 5 adicionales para facilitar la clonación de los productos de PCR. Se efectuaron reacciones de PCR-TI de cadena pesada y cadena ligera lambda de IgG1 usando el panel completo de cebadores apropiados. Se sintetizaron todos los cebadores por Invitrogen Ltd. La reacción de TI tuvo lugar a 50ºC durante 10 minutos, seguida inmediatamente de 40 ciclos de PCR (15 s a 94ºC, 30 s a 55ºC, 30 s a 72ºC). Se clonaron los productos de PCR-TI en pUC18 y se preparó ADN usando el kit Wizard de Promega UK Ltd; Southampton SO16 7NS, RU y secuenciado por el método de Sanger-Coulson (F Sanger, S Nicklen, A R Coulson; DNA sequencing with chain terminating inhibitors; Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA 1977; 74: 5463- 5467). Se compararon las secuencias de la región V con secuencias disponibles de genes de Ig humanos usando Igblast (ww.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/igblast.cgi). Ensayo de inmunoprecipitación (IPA) Se dispuso el ADNc que codifica el receptor de TSH completo en dirección 3 del promotor T7 en pYES2 (Invitrogen) y se usó en un sistema TnT in vitro (Promega UK Ltd), produciendo receptor de TSH marcado con 35 S-metionina como se describe anteriormente (L Prentice, J Sanders, M Perez, R Kato, J Sawicka, Y Oda, D Jaskolski, J Furmaniak, B Rees Smith; Thyrotropin (TSH) receptor autoantibodies do not appear to bind to the TSH receptor produced in an in vitro transcription/translation system; Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 1997; 82: 1288-1292). Brevemente, se añadieron 50 l de receptor de TSH marcado con 35 S (25.000-30.000 cpm) diluidos en HSB (Tris-HCl 150 mmol/l, pH 8,3, NaCl 200 mmol/l y seroalbúmina bovina 10 mg/ml que contiene 1% de Tween 20) a alícuotas de 50 µl por duplicado de muestra de ensayo diluida y se incubaron durante 2 horas a temperatura ambiente. Se precipitaron entonces los complejos inmunitarios mediante la adición de proteína-A-Sepharose (Sigma- Aldrich) y se sometieron a recuento en un contador de centelleo. Preparaciones de receptor de TSH y transferencia Western Se expresó receptor de TSH humano completo en células CHO-K1, se extrajo con 1% de Triton X-100 y se purificó mediante cromatografía de afinidad de anticuerpo monoclonal de receptor de TSH como se describe anteriormente (Y Oda, J Sanders, M Evans, A Kiddie. A Munkley, C James, T Richards, J Wills, J Furmaniak, B Rees Smith; 27   Epitope analysis of the human thyrotropin (TSH) receptor using monoclonal antibodies; Thyroid 2000; 10: 1051- 1059). Se procesó el receptor de TSH producido por células CHO purificado en geles de PAGE-SDS al 9%, se transfirió a nitrocelulosa y se hizo reaccionar con anticuerpos de ensayo como se describe anteriormente (Y Oda, J Sanders, M Evans, A Kiddie, A Munkley, C James, T Richards, J Wills, J Furmaniak, B Rees Smith; Epitope analysis of the human thyrotropin (TSH) receptor using monoclonal antibodies; Thyroid 2000; 10: 1051-1059). Análisis epitópico usando péptidos de receptor de TSH Se proporcionaron amablemente por el Dr. J Morris (JC Morris, ER Bergert, DJ McCormick; Structure-function studies of the human thyrotropin receptor. Inhibition of binding of labeled thyrotropin (TSH) by synthetic human TSH receptor peptides; Journal of Biological Chemistry 1993; 268: 10900-10905) 26 péptidos de 25 aa de longitud cada uno que cubrían todo el dominio extracelular del receptor de TSH humano. Se usó un péptido 21-OH humano (C1, SSSRVPYKDRARLPL) que se une a un MAb M21-OH5 (S Chen, J Sawicka, L Prentice, J F Sanders, H Tanaka, V Petersen, C Betterle, M Volpato, S Roberts, M Powell, B Rees Smith, J Furmaniak; Analysis of autoantibody epitopes on steroid 21-hydroxylase using a panel of monoclonal antibodies; Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 1998; 83: 2977-2986) como control positivo y se usó un anticuerpo monoclonal humano de GAD65 (N Hayakawa, LDKE Premawardhana, M Powell, M Masuda, C Arnold, J Sanders, M Evans, S Chen, J C Jaume, S Baekkeskov. B Rees Smith, J Furmaniak; Isolation and characterization of human monoclonal autoantibodies to glutamic acid decarboxylase; Autoimmunity 2002; 35: 343-355) como control negativo. Se llevó a cabo el ELISA peptídico como se describe anteriormente (Y Oda, J Sanders, M Evans, A Kiddie, A Munkley, C James, T Richards, J Wills, J Furmaniak, B Rees Smith; Epitope analysis of the human thyrotropin (TSH) receptor using monoclonal antibodies; Thyroid 2000; 10: 1051-1059). Interacción de preparaciones de autoanticuerpo monoclonal de TSHR con el receptor de TSH recubierto sobre tubos de plástico o pocillos de placa ELISA (a) Autoanticuerpo marcado con 125 I Se incubaron muestras de ensayo que incluían sueros de paciente (100 µl) en tubos recubiertos con receptor de TSH (RSR Ltd.) a temperatura ambiente durante 2 horas con agitación suave. Después de la aspiración, se lavaron los tubos dos veces con 1 ml de tampón de ensayo antes de la adición de 100 µl de preparación de autoanticuerpo marcado (30.000 cpm) y la incubación a temperatura ambiente durante 1 hora con agitación. Se lavaron entonces los tubos dos veces con 1 ml de tampón de ensayo, se sometieron a aspiración y a recuento en un contador gamma. Se calculó la inhibición de la unión de autoanticuerpo marcado con 125 I usando la fórmula de la inhibición de la unión de TSH (véase anteriormente). (b) Autoanticuerpo monoclonal marcado con biotina y TSH marcada con biotina Se uso el procedimiento descrito anteriormente (J Bolton, J Sanders, Y Oda, C Chapman, R Konno, J Furnaniak y B Rees Smith; Measurement of thyroid-stimulating hormone receptor autoantibodies by ELISA; Clinical Chemistry, 1999; 45: 2285-2287). Brevemente, se incubaron muestras de ensayo que incluían sueros de paciente (75 µl) en pocillos de placa ELISA recubiertos con receptor de TSH (RSR Ltd) durante 2 horas con agitación (200 rpm) en un agitador de placa ELISA. Se retiraron entonces las muestras de ensayo y se lavaron los pocillos una vez con tampón de ensayo. Se añadieron entonces autoanticuerpo monoclonal de receptor de TSH marcado con biotina (1 ng en 100 µl) o TSH porcina marcada con biotina (RSR Ltd; 5 ng en 100 l) y se continuó la incubación durante 25 minutos a temperatura ambiente sin agitación. Se lavaron los pocillos una vez, se añadieron 100 µl de estreptavidina- peroxidasa (RSR Ltd; 10 ng en 100 l) y se continuó la incubación durante 20 minutos a tem peratura ambiente sin agitación. Se lavaron entonces los pocillos 3 veces, y se añadió el sustrato de peroxidasa tetrametilbencidina (RSR Ltd; 100 l). Después de incubación durante 30 minutos a temperatura ambiente sin agitación, se añadieron 50 l de H2SO4 0,5 M para detener la reacción del sustrato y se leyó la absorbancia de cada pocillo a 450 nm en un lector de placas ELISA. Se expresó la inhibición de la unión de MAb biotinilado o TSH como un índice calculado como: 100 × 1 absorbancia de la muestra de ensayo a 450 nm absorbancia del control sérico negativo a 450 nm Análisis de Scatchard de la unión de autoanticuerpo monoclonal a tubos recubiertos con receptor de TSH Se incubaron IgG o Fab no marcados en 50 µl de tampón de ensayo y 50 µl de IgG o Fab de hMAb marcado con 125 I (30.000 cpm en tampón de ensayo) durante 2 horas a temperatura ambiente con agitación suave, se lavaron dos veces con 1 ml de tampón de ensayo y se sometieron a recuento en un contador gamma. Se representó la concentración de IgG o Fab unido frente a unido/libre (G Scatchard; The attraction of proteins for small molecules and ions; Annals of the New York Academy of Sciences 1949; 51: 660-672) para derivar las constantes de asociación. 28   Unión del receptor de TSH a tubos recubiertos con autoanticuerpos monoclonales de receptor de TSH Se incubaron muestras de ensayo que incluían sueros de paciente (100 µl) y receptor de TSH solubilizado con detergente (20 µl) durante 1 hora a temperatura ambiente. Se añadieron entonces alícuotas de 50 µl por duplicado de la mezcla de incubación a tubos de plástico (Nunc Maxisorp) que se habían recubierto con Fab de autoanticuerpo monoclonal de receptor de TSH (200 l de 10 g/ml durante una noche a ºC, 4 seguido de lavado y recubrimiento posterior). Después de incubación durante 1 hora a temperatura ambiente con agitación suave, se lavaron los tubos, se añadieron 100 l (40.000 cpm) de anticuerpo monoclonal 4E31 C-terminal de receptor de TSH marcado con 125 I (J Sanders, Y Oda, A Kiddie, T Richards, J Bolton, V McGrath, S Walters, D Jaskolski, J Furmaniak, B Rees Smith; The interaction of TSH receptor autoantibodies with 125 I-labelled TSH receptor; Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 1999; 84: 3797-3802) y se continuó la incubación durante 1 hora adicional con agitación suave. Se lavaron entonces los tubos y se sometieron a recuento de 125 I. Clonación y expresión de Fab de hMAb TSHR1 recombinante en E. coli Se cortó el producto de PCR-TI de cadena pesada de hMAb TSHR1 (véase la sección de análisis génico de la región variable) con las endonucleasas de restricción XhoI y SpeI y se cortó el producto de PCR de la cadena ligera de hMAb TSHR1 con las endonucleasas de restricción SacI y XbaI, y se clonaron ambos ADNc de cadena pesada y ligera en el vector Immunozap H/L (Stratagene Europe; Amsterdam, Holanda) (I Matthews, G Sims, S Ledwidge, D Stott, D Beeson, N Willcox, A Vincent; Antibodies to acetylcholine receptor in parous women with myasthenia: evidence for immunization by fetal antigen; Laboratory Investigation 2002; 82: 1-11) bajo el control del promotor lacZ. Se preparó ADN de plásmido usando el kit de purificación de plásmido Qiagen midi (Qiagen Ltd; Crawley, RH10 9AX, RU) y se confirmó la presencia de ADNc de cadena pesada y ligera de hMAb TSHR1 mediante secuenciación usando el método de Sanger-Coulson (F Sanger, S Nicklen, A R Coulsen; DNA sequencing with chain terminating inhibitors; Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA 1977; 74: 5463-5467). Se transformó ADN de plásmido en dos cepas de E. coli diferentes (a) XL1-Blue MRF' (Stratagene) y (b) HB2151 (Amersham Biosciences) y se cultivó durante una noche a 37ºC en placas de agar LB-ampicilina (triptona 10 g/l, extracto de levadura 5 g/l, NaCl 10 g/l, ampicilina a una concentración final 100 g/ml) (15 g/l de agar). Se cultivaron los precultivos (una colonia en 3 ml de LB-ampicilina con 1% de glucosa) a 37ºC durante una noche con agitación. La producción del Fab recombinante se inhibe en presencia de glucosa. Se diluyeron los precultivos 1/100 después de incubación de una noche (0,5 ml en 50 ml de LB-ampicilina) y se cultivaron a 37ºC hasta que la DO600 estuvo entre 0,4-0,6. Se dispusieron estos cultivos a 30ºC con agitación durante 20 minutos. Después de ello, se añadió ß - D-tiogalactósido de isopropilo (IPTG) a una concentración final de 1 mmol/l y se continuaron incubando los cultivos durante una noche (16 horas) a 30ºC con agitación. Se centrifugaron entonces los cultivos a 3000 rpm durante 30 minutos a 4ºC y se recuperaron los sobrenadantes de cultivo y sedimentos. Se resuspendieron los sedimentos en 1 ml de tampón TES enfriado con hielo (Tris-HCl 0,2 mol/l, pH 8,0, EDTA 0,5 mol/l y sacarosa 0,5 mol/l) mediante vórtice. Se añadieron 1,5 ml adicionales de tampón TES enfriado con hielo diluido 5 veces en H2O, se agitó con vórtice de nuevo la mezcla, se incubó en hielo durante 30 minutos y se recentrifugó entonces, dando un segundo sobrenadante o fracción periplasmática (FP). Se filtraron el sobrenadante de cultivo y la FP a través de un filtro de 0,45 µm y se dializaron durante una noche con Tris 10 mmol/l, pH 7,5, NaCl 50 mmol/l. Se prepararon también sobrenadante de cultivo o FP de células XL1-Blue MRF' y HB2151 no transformadas y XL1-Blue MRF' transformadas con plásmido de hMAb TSHR1 (XL1-Blue MRF'/hMAb TSHR1) y HB2151 transformadas con plásmido de hMAb TSHR1 (HB2151/hMAb TSHR1) con glucosa sin IPTG, concretamente no inducidas. Se ensayaron en los sobrenadantes de cultivo y FP (a) su capacidad de inhibir la unión de TSH a TSHR, (b) su capacidad de estimular la producción de AMP cíclico en células CHO que expresan TSHR y (c) la concentración de Fab recombinante total mediante radioinmunoensayo. En este ensayo, se incubaron los patrones y materiales de ensayo, incluyendo sobrenadantes de cultivo y FP (100 l por duplicado) en tamp ón de ensayo (NaCl 50 mmol/l, Tris-HCl 10 mmol/l, pH 7,8, 0,1% de Triton X-100) durante 1 hora a temperatura ambiente en tubos de plástico recubiertos con IgG de cabra anti-humana específica de Fab (de Sigma Aldrich, Poole, BH12 4QH, RU). Se lavaron entonces los tubos con tampón de ensayo (2x1 ml) y se añadieron 100 l de Fab de hMAb TSHR1 marcado con 125 I (30.000 cpm), seguido de incubación a temperatura ambiente. Después de 1 hora, se lavaron los tubos de nuevo (2×1 ml) y se sometieron a recuento de 125 I. Se representaron las cuentas unidas frente a la concentración de Fab (Fab de hMAb TSHR1 producido por hibridoma) en los patrones (5-500 ng/ml) y se leyó la concentración de Fab recombinante en los diversos materiales de ensayo a partir de esta curva de calibración. El límite de detección para este ensayo era de 5-10 ng/ml de Fab. Clonación y expresión de 4B4 recombinante (un MAb humano de ácido glutámico descarboxilasa o GAD) y Fab híbridos recombinantes (HC y LC mixtos de hMAb TSHR1 y 4B4) Se produjeron Fab de 4B4 recombinante (4B4 se describe con detalle por N Hayakawa, LDKE Premawardhana, M Powell, M Masuda, C Arnold, J Sanders, M Evans, S Chen, J C Jaume, S Baekkeskov, B Rees Smith, J Furmaniak. Isolation and characterization of human monoclonal antibodies to glutamic acid decarboxylase. Autoimmunity 2002 volumen 35, pág. 343-355) y Fab híbridos recombinantes mediante clonación de los HC y LC respectivos en el vector Immunozap H/L y se expresaron en células HB2151 como se describe para Fab de hMAb TSHR1 recombinante. Se ensayó en los sobrenadantes de cultivo y fracción periplasmática (a) su capacidad de inhibir la unión de TSH al TSHR, (b) su capacidad estimular la producción de AMP cíclico en células CHO que expresan TSHR y (c) la concentración de Fab recombinante total como se describe anteriormente. Además, se valoró la 29   actividad del Ab de GAD como se describe a continuación. Medida de la actividad de Fab de Ab de GAD recombinante en sobrenadantes de cultivo y fracciones periplasmáticas Se usó un ensayo basado en la capacidad de la preparación de Fab de Ab de GAD de inhibir la unión de GAD marcada con 125 I (de RSR Ltd, Cardiff, CF23 SHE, RU) al anticuerpo monoclonal humano de GAD (4B4). En el ensayo, se incubaron muestras de ensayo diluidas en tampón de ensayo de Ab de GAD (NaCl 150 mmol/l, Tris-HCl 50 mmol/l, pH 8,0, 1% en v/v de Tween 20, seroalbúmina bovina 1 g/l y NaN3 0,5 g/l) (50 l por duplicado con GAD marcada con 125 I (30.000 cpm en 50 l de tamp ón de ensayo de Ab de GAD) durante 1 hora a temperatura ambiente. Se añadieron entonces 50 µl de IgG de 4B4 (0,1 µg/ml en tampón de ensayo de Ab de GAD) y se continuó la incubación durante 24 horas a temperatura ambiente. Se añadió entonces proteína A en fase sólida (50 µl en tampón de ensayo de Ab de GAD, de RSR Ltd.) para precipitar complejos de IgG de 4B4-GAD marcada con 125 125 I (la proteína A no reacciona con complejos de Fab y GAD marcada con I). Después de dejar proceder la reacción con proteína A durante 1 hora a temperatura ambiente, se sedimentaron los precipitados mediante centrifugación (1500 g durante 30 minutos a 4ºC), se lavaron con 1 ml de tampón de ensayo de Ab de GAD y se sometieron a recuento de 125 I. La unión de GAD marcada con 125 I en ausencia de IgG de 4B4 era un 4-5% de las cpm totales añadidas. Producción de anticuerpos antiidiotípicos de hMAb TSHR1 Se inmunizaron por vía intraperitoneal ratones BALB/c de 6-8 semanas de edad con 50 µg de Fab de hMAb TSHR1 en coadyuvante completo de Freund seguido de una segunda inyección con 50 µg de Fab de hMAb TSHR1 en coadyuvante incompleto de Freund después de 25 días, y una inyección adicional de 50 g de Fab de hMAb TSHR1 4 días antes de la extracción del bazo. Se fusionaron las células de bazo de ratones positivos de anticuerpo (véase a continuación) con una estirpe celular de mieloma de ratón y se aislaron los anticuerpos monoclonales como anteriormente para MAb TSHR. Se midieron los niveles de anticuerpo antiidiotípico en sueros de ratón y pocillos de cultivo celular mediante la inhibición de la unión de Fab de 125 I-hMAb TSHR1 a tubos recubiertos con TSHR. En particular, se incubaron alícuotas de 60 l de muestra de ensayo por duplicado (diluida en tampón de ensayo: NaCl 50 mmol/l, Tris-HCl 10 mmol/l, pH 7,8, 0,1% de Triton X-100) con 60 l de Fab de 125 I-hMAb TSHR1 (30.000 cpm diluido en tampón de ensayo) durante 1 hora a temperatura ambiente. Se transfirieron 100 µl de la mezcla a tubos recubiertos con TSHR por duplicado (RSR Ltd) con 20 l de tampón de inicio (véase anteriormente) y se continuó la incubación durante dos horas adicionales a temperatura ambiente con agitación. Se lavaron entonces los tubos con 2 x 1 ml de tampón de ensayo y se sometieron a recuento de 125 I. La presencia de anticuerpos antiidiotípicos reactivos con hMAb TSHR1 era evidente por la capacidad de las muestras de ensayo de inhibir la unión de Fab de hMAb TSHR1 marcado con los tubos recubiertos con TSHR. Resultados Se sembraron linfocitos (30×10 6 ) obtenidos a partir de 20 ml de sangre de paciente a 1×10 6 por pocillo en una placa de 48 pocillos con 200 µl de sobrenadante de EBV sobre capas de alimentación de macrófagos de ratón. El día 11 después de la infección con EBV, se monitorizó en los sobrenadantes la inhibición de la unión de 125 I-TSH. Se encontró que un pocillo era positivo de inhibición de la unión, aumentando los niveles de inhibición a más de un 90% de inhibición el día 16 y permaneciendo a ese nivel hasta el día 24, después de dicho tiempo se redujeron. Se multiplicaron los cultivos y se fusionaron con células K6H6/B5 los días 21, 23, 26 y 27 después de la infección con EBV; en total se llevaron a cabo 7 experimentos de fusión. Se sembró cada fusión por 3 placas de 96 pocillos (concretamente, 21 placas en total) y se obtuvo un pocillo que producía establemente anticuerpos con actividad inhibidora de la unión de 125 I-TSH. Esto fue seguido por 3 rondas de reclonación para dar un solo clon productor de un anticuerpo monoclonal humano que inhibía la unión de TSH marcada al receptor de TSH. Este autoanticuerpo monoclonal humano de receptor de TSH se designó hMAb TSHR1 y era de la subclase IgG1, con una cadena ligera lambda. Se muestra en la Figura 1 la capacidad de diferentes concentraciones de IgG y Fab de hMAb TSHR1 de inhibir la unión de TSH marcada al receptor de TSH. Como puede observarse en la Figura 1, con tan solo 1 ng/ml de estas preparaciones se inhibía la unión de TSH, obteniéndose más de un 90% de inhibición con 1000 ng/mL. IgG y Fab de hMAb TSHR1 estimulaban también la producción de AMP cíclico en células CHO transfectadas con el receptor de TSH como se muestra en la Figura 2. Con tan solo 1 ng/ml de IgG o Fab de hMAb TSHR1, se causaba una fuerte estimulación del AMP cíclico. Se observaron niveles de estimulación similares con TSH porcina 0,1 ng/ml y con TSH humana 10 ng/ml. Se muestra en la Figura 3 la comparación de la capacidad del suero de donante de linfocitos original (tomado en el mismo momento que la muestra de sangre para el aislamiento de linfocitos) para inhibir la unión de TSH marcada al receptor de TSH y para estimular la producción de AMP cíclico en células CHO transfectadas con receptor de TSH. La inhibición de la unión de TSH pudo detectarse con suero diluido 500 veces, mientras que la estimulación del AMP cíclico pudo detectarse con suero diluido 5000 veces. Los análisis de IgG de hMAb TSHR1 marcada con 125 I unida a tubos recubiertos con receptor de TSH y de Scatchard indicaban una constante de asociación de 5×10 10 M -1 . Esta unión se inhibía por los sueros de pacientes con enfermedad de Graves que tenían autoanticuerpos de receptor de TSH (detectables mediante la inhibición de la   unión de TSH marcada) (Tabla 1). El Fab de hMAb TSHR1 marcado con 125 I se unía también a tubos recubiertos con receptor de TSH (constante de asociación por análisis de Scatchard= 4,5×10 10 M -1 ) y esta unión se inhibía por sueros de Graves positivos de autoanticuerpo de receptor de TSH (Tabla 2). Además, las preparaciones solubilizadas con detergente pudieron unirse a tubos de plástico recubiertos con hMAb TSHR1, y esta unión pudo inhibirse por sueros que contenían autoanticuerpos de receptor de TSH (Tabla 3). Como se muestra en la Tabla 4, el hMAb TSHR1-biotina se unía a placas ELISA recubiertas con receptor de TSH y la unión se inhibía por la preparación de referencia internacional NIBSC 90/672 y el suero de pacientes con enfermedad de Graves. No se observó inhibición de la unión por sueros de donantes de sangre sanos. La Figura 3a muestra una representación gráfica de una comparación entre un ensayo de autoanticuerpos de TSHR basado en hMAb TSHR1-biotina y ensayos anteriores. La sensibilidad del ensayo basado en hMAb TSHR1-biotina es claramente superior según la concentración del estándar internacional NIBSC 90/672 detectable. Esto se confirmó en un estudio de sueros de 72 pacientes con enfermedad de Graves mostrado en la Figura 3b. Los sueros de donantes de sangre sanos (n= 100) y los sueros de sujetos con enfermedades no tiroideas (n= 43) dieron respectivamente valores de hasta un 10% de inhibición de la unión de hMAb TSHR1 y de hasta un 11% de inhibición de la unión de TSH en este estudio. La IgG de hMAb TSHR1 no reaccionaba con preparaciones de receptor de TSH completo en análisis de transferencia Western ni reaccionaba bien con receptor de TSH completo marcado con 35 S en el ensayo de inmunoprecipitación ni en el ELISA peptídico de receptor de TSH. Esta falta de reactividad indica que el hMAb TSHR1 reacciona con epítopos conformaciones en lugar de lineales en el receptor de TSH. El análisis de secuencia de los genes que codifican el hMAb TSHR1 indicaba que los genes de la región V de la cadena pesada eran de la familia VH5, el gen D de la familia D6-13 y el gen J de la familia JH5, y para la cadena ligera, la región V es de la estirpe germinal VL1-11 y la región J es de la estirpe germinal JL3b. Se muestran en las Figuras 4 y 5 las secuencias nucleotídica y aminoacídica de la cadena pesada, respectivamente, y se muestran en las Figuras 6 y 7 las secuencias nucleotídica y aminoacídica de la cadena ligera, respectivamente. Estas secuencias son un refinamiento de las secuencias nucleotídicas de HC y LC determinadas usando cebadores de PCR que son degenerados. En particular, se identificó un artefacto de secuenciación de HC para los nucleótidos 115-120. La secuenciación indicaba cacgtg (transcrito a los aminoácidos His Val), mientras que la estructura cristalina indicaba más fiablemente los aminoácidos Gln Leu (siendo las bases correspondientes cagctg). El análisis de la estructura cristalina posibilitó también el refinamiento de las secuencias aminoacídicas derivadas de HC y LC, particularmente en la región cebadora de PCR degenerada. En el caso de LC, se encontró que el aminoácido 2 era Pro por PCR-TI, pero que era Thr por la estructura cristalina. En el caso de HC, se encontró que el aminoácido 2 era Met por PCR-TI, pero que era Val por la estructura cristalina. Se muestra en la Tabla 5 la comparación de las actividades de preparaciones de IgG de hMAb TSHR1 y el estándar internacional para autoanticuerpos de receptor de TSH en términos de inhibición de la unión de TSH marcada. Esto posibilitó estimar la actividad específica de la IgG de hMAb TSHR1 como 138 unidades de NIBSC 90/672 por mg de proteína cuando los ensayos se llevaron a cabo en suero y de 163 unidades por mg cuando los ensayos se llevaron a cabo en tampón de ensayo (media de los dos valores= 150 unidades/mg). Las preparaciones de Fab de hMAb TSHR1 eran de 288 y 309 unidades por mg en suero y tampón de ensayo, respectivamente (media de los dos valores= 300 unidades/mg). La Tabla 6 muestra un análisis similar del suero de donante de linfocitos y de IgG de suero de donante. Como puede observarse, el suero de donante contiene una media de 0,38 unidades/ml de NIBSC 90/672 (0,36 y 0,4 en suero y tampón de ensayo, respectivamente) y la IgG de suero de donante tiene una actividad específica media de 0,059 unidades por mg de proteína. Estos resultados se resumen en la Tabla 7, y la comparación con la actividad específica de IgG de hMAb TSHR1 (150 unidades/mg) indica que la IgG de autoanticuerpo monoclonal es 2500 veces más activa que la IgG de suero de donante de linfocitos en términos de inhibición de la unión de TSH. Se muestra también en la Tabla 7 la valoración inicial de las actividades de diversas IgG y preparaciones séricas en términos de estimulación del AMP cíclico en células CHO transfectadas con el receptor de TSH. La estimulación del ensayo de AMP cíclico se caracteriza por una considerable variabilidad intra- e interensayos. Esto se relaciona con varios factores, incluyendo la variación en el número y calidad de células sembradas inicialmente en las placas de 96 pocillos y la variación en la tasa de crecimiento de las células sembradas durante las siguientes 48 horas. En consecuencia, se llevaron a cabo los ensayos de IgG y Fab de hMAb TSHR1, suero de donante de linfocitos e IgG de suero y NIBSC 90/672 repetidamente, y se resumen los resultados en la Tabla 8. La actividad específica de la IgG de hMAb TSHR1 era de 318 unidades por mg en el ensayo de estimulación, comparado con 0,1 unidades por mg para la IgG de suero de donante de linfocitos, concretamente, la IgG de autoanticuerpo monoclonal era aproximadamente 3000 veces más activa que la IgG de suero de donante en términos de estimulación de la producción de AMP cíclico. Este valor está razonablemente de acuerdo con el valor de 2500 veces observado para la inhibición de las medidas de unión de TSH (véase anteriormente y las Tablas 5 y 6). La Tabla 9 muestra un análisis adicional de los efectos estimulantes sobre el receptor de TSH de IgG y Fab de hMAb TSHR1 e IgG de suero de donante de linfocitos. Los efectos de TSH porcina e IgG de hMAb TSHR1 sobre la estimulación de la producción de AMP cíclico en células CHO que expresan el receptor de TSH eran aditivos, como puede observarse en los resultados mostrados en la 31   Tabla 10. Se muestran en la Tabla 11 los resultados típicos observados en el ensayo de estimulación de AMP cíclico con la preparación de referencia NIBSC 90/672. Las Tablas 12 y 13 muestran los efectos de diversos sobrenadantes de cultivo de E. coli en términos de inhibición de la unión de TSH marcada y estimulación de la producción de AMP cíclico, respectivamente. Los cultivos transformados (con plásmido de hMAb THSR1) e inducidos con IPTG de ambas cepas de E. coli producían suficientes cantidades de Fab de hMAb TSHR recombinante para actuar como potentes inhibidores de la unión de TSH (Tabla 12) y potentes estimulantes de la producción de AMP cíclico (Tabla 13). Los sobrenadantes de cultivo de control (de células no trasformadas y células transformadas pero no inducidas) no producían niveles detectables de las actividades de inhibición de la unión (Tabla 12) ni la estimulación (Tabla 13). En experimentos de control adicionales, se analizó un Fab de anticuerpo humano recombinante producido mediante clonación y expresión de HC y LC de un anticuerpo monoclonal humano de GAD (4B4). Los ensayos de sobrenadantes de cultivo y fracciones periplasmáticas indicaron que el Fab de 4B4 recombinante no tenía una inhibición detectable de la actividad de unión de TSH (Tablas 14 y 15) o de la actividad estimulante de TSHR (Tablas 16 y 17). Además, los Fab híbridos consistentes en (a) HC de hMAb TSHR1 y LC de 4B4, (b) LC de hMAb TSHR1 y HC de 4B4 no mostraron interacción con TSHR en ningún ensayo (Tablas 14-17). Los ensayos de actividad de Ab de GAD en estas diversas preparaciones de Fab recombinante fueron capaces de detectar la expresión de Ab de GAD solo en células transformadas con HC de 4B4 y LC de 4B4 (Tablas 18 y 19). El Fab de hMAb TSHR1 recombinante no mostraba actividad de Ab de GAD detectable y tampoco los híbridos de Fab consistentes en mezclas de HC y LC de 4B4 y hMAb TSHR1 (Tablas 18 y 19). Se inhibió la capacidad de hMAb TSHR1 de estimular la producción de AMP cíclico en células CHO transfectadas con TSHR por sueros de pacientes que contenían autoanticuerpos de TSHR que actuaban como antagonistas de TSH (Figura 8). Además, un anticuerpo monoclonal de ratón de TSHR (9D33) era capaz de bloquear las actividades de estimulación de hMAb TSHR1 (Tabla 20), mientras que otro MAb de ratón de TSHR (2B4) era ineficaz (Tabla 20). Sin embargo, el 2B4 era capaz de bloquear las actividades estimulantes de TSH al igual que 9D33 (Tabla 21). La Tabla 22 muestra la capacidad de 2B4 y 9D33 de inhibir la unión de TSH marcada con 125 I y hMAb TSHR1 marcado con 125 I a tubos de plástico de TSHR. El 9D33 era capaz de inhibir la unión de TSH marcada y la unión de hMAb TSHR1 marcado bastante eficazmente (más de un 50% de inhibición a 10 g/ml). El 2B4 era un inhibidor eficaz de la unión de TSH marcada a TSHR (más de un 80% de inhibición a 1 g/ml), pero tenía solo un efecto minoritario sobre la unión de hMAb TSHR1 (11% de inhibición a 1 g/ml) o sobre la unión de 9D33 (22% de inhibición a 1 g/ml). Se inhibía la unión de 9D33 marcado a tubos recubiertos con TSHR por sueros de pacientes con enfermedad de Graves que contenían autoanticuerpos de TSHR (medidos mediante la inhibición de la unión de TSH marcada a TSHR), mientras que los sueros de donantes de sangre sanos y los sueros de pacientes con otras enfermedades autoinmunitarias tenían poco o ningún efecto (Tabla 23). Se inhibió la unión de 9D33 marcado a TSHR por autoanticuerpos de TSHR con propiedades agonista o antagonista de TSH (Tabla 24) y por el estándar internacional NIBSC 90/672 (Tabla 25). El análisis de Scatchard indicó que 9D33 y 2B4 tenían afinidades de 2×10 10 M -1 y de 1×10 10 M -1 , respectivamente, por los receptores de TSH recubiertos sobre tubos de plástico. La inmunización de ratones con Fab de hMAb TSHR1 dio como resultado la producción de anticuerpos en los sueros de ratón (anticuerpos policlonales) que eran capaces de unirse a Fab de hMAb TSHR1 de tal modo que se inhibía la capacidad del Fab de unirse al TSHR (Tabla 26). Además, un anticuerpo monoclonal producido a partir de células de bazo de un ratón inmunizado con Fab de hMAb TSHR1 era también capaz de inhibir la unión de Fab al TSHR (Tabla 27). Globalmente, el análisis indica que el anticuerpo monoclonal hMAb TSHR1 tiene las características de unión a receptor de TSH y estimulación de tiroides de los autoanticuerpos de receptor de TSH en el suero de donante de linfocitos. Como se detalla anteriormente, el anticuerpo monoclonal se produjo también como una preparación de Fab recombinante. CONCLUSIONES (a) Se ha producido un anticuerpo monoclonal humano del receptor de TSH que tiene propiedades similares al autoanticuerpo de receptor de TSH en el suero de pacientes donantes. El anticuerpo monoclonal se produjo también como una preparación de Fab recombinante. (b) La IgG y Fab del anticuerpo monoclonal y las preparaciones de Fab recombinante son potentes estimulantes del tiroides y eficaces inhibidores de la unión de TSH marcada al receptor de TSH. (c) La unión de preparaciones de IgG y Fab de MAb marcados al receptor de TSH está inhibida por sueros positivos de autoanticuerpo de receptor de TSH de pacientes con enfermedad de Graves, pero no por sueros de donantes de sangre sanos o sueros de pacientes con otras enfermedades autoinmunitarias. Los sistemas de ensayo de autoanticuerpos de TSHR basados en la inhibición de la unión de hMAb TSHR1 marcado al receptor de TSH son más sensibles que los demás ensayos descritos hasta ahora. 32   (d) Los autoanticuerpos de receptor de TSH que actúan como antagonistas de TSH, así como los autoanticuerpos de receptor de TSH que actúan como agonistas de TSH, inhiben la unión de hMAb TSHR1 marcado al receptor de TSH. (e) Las preparaciones de hMAb TSHR1 recubiertas sobre tubos de plástico se unen a receptor de TSH, y esta unión se inhibe por autoanticuerpos de receptor de TSH en diferentes sueros de pacientes. (f) Se encontró que un anticuerpo monoclonal de ratón (9D33) que inhibe la unión de hMAb TSHR1 a TSHR bloqueaba también la actividad estimulante de hMAb TSHR1 y TSH. (g) Se han producido anticuerpos policlonales y monoclonales de ratón de hMAb TSHR1 que se unen a hMAb TSHR1 de tal modo que evitan su unión al receptor de TSH. Estos anticuerpos antiidiotípicos compiten por lo tanto con el TSHR por el hMAb TSHR1 y como tales pueden ser alternativas útiles al TSHR en aplicaciones en que se requiera un copartícipe de unión para autoanticuerpos de TSHR. (h) Estos resultados indican que el hMAb TSHR1 y/o sus derivados y/o sus competidores pueden usarse como reemplazo de TSH en TSH. (i) ensayos de autoanticuerpos de receptor de TSH, TSH y ligandos relacionados, (ii) diversas aplicaciones in vivo que implican la provisión de actividades agonista de TSH o antagonista de TSH, (iii) la identificación y provisión de nuevos tipos de sitios de unión de autoanticuerpo de receptor de Tabla 1. Efecto de los sueros de paciente sobre la unión de IgG de hMAb TSHR1 marcada con 125 I al receptor de TSH y comparación con el efecto sobre la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH Material de ensayo Inhibición de la unión de hMAb TSHR1 marcado Inhibición de la unión de TSH 33 Material de ensayo Inhibición de la unión de hMAb TSHR1 marcado G1 62 N1 3,1 7,7 G2 91 93 N2 2,4 2,6 G3 91 76 N3 -1,0 4,5 G4 94 92 N4 -11 6,5 G5 93 94 N5 1,7 5,0 G6 76 N6 2,8 1,7 G7 87 N7 5,2 -0,8 G8 N8 3,5 0,2 G9 88 N9 2,8 -0,6 G10/10 83 59 N10 4,5 2,2 G10/20 69 43 D1 -4,8 2,2 G10/40 56 29 A1 -3,1 1,3 G10/80 42 19 A2 -3,5 -3,0 G11/10 73 G11/20 59 54 G11/40 39 33 G11/80 22 18 G1-G11 son sueros de pacientes con un historial de enfermedad de Graves. El suero G9 tiene altos niveles de bloqueo de TSH (concretamente, actividad antagonista de TSH). G10 y G11 tienen altos niveles de actividad estimulante del tiroides. G10 es el suero de donante de linfocitos. /10, /20 etc. indican el factor de dilución en un conjunto de sueros de donantes de sangre sanos. Inhibición de la unión de TSH   N1-N10 son sueros de donantes de sangre sanos. D1 es de un paciente con diabetes sacarina de tipo 1 (positivo de autoanticuerpos de ácido glutámico descarboxilasa). A1 y A2 son de pacientes con la enfermedad de Addison (positivos de autoanticuerpos de esteroide 21-hidroxilasa). En presencia del conjunto de sueros de donantes de sangre sanos, aproximadamente un 25% de la IgG de MAb marcada con 125 I se unió a los tubos recubiertos con TSHR. Tabla 2. Efecto de los sueros de paciente sobre la unión de Fab de hMAb TSHR1 marcado con 125 I al receptor de TSH y comparación con el efecto sobre la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH Material de ensayo Inhibición de la unión de Fab marcado NIBSC 90/672 diluido en un conjunto de sueros de donantes de sangre sanos a 1 U/l 17 13 a 2 U/l 27 24 a 4 U/l 47 44 a 8 U/l 61 Suero de donante de sangre sano A -3 <10 Suero de donante de sangre sano B 3 <10 Suero de donante de sangre sano C 4 <10 Suero de donante de sangre sano D -4 <10 Suero de donante de sangre sano E <10 Suero de Graves F 64 78 Suero de Graves G 42 54 Suero de Graves H 49 69 Suero de Graves I 24 36 Suero de Graves J 76 88 34 Inhibición de la unión de TSH Tabla 3. Unión de TSHR a tubos de plástico recubiertos con Fab de hMAb TSHR1 e inhibición de la unión de TSHR por sueros que contienen autoanticuerpos de TSHR Material de ensayo cpm unidas 1 Suero de donante de sangre sano A 8406 Suero de donante de sangre sano B Suero positivo de autoanticuerpo de TSHR 1 1527 Suero positivo de autoanticuerpo de TSHR 2 1131 Suero positivo de autoanticuerpo de TSHR 3 1199 1 Se detectó la unión de TSHR usando un anticuerpo monoclonal de ratón marcado con 125 I del extremo C de TSHR; cpm totales: 39.000 por tubo. Tabla 4. Efecto de las muestras de suero de paciente sobre la unión de hMAb TSHR1 marcado con biotina y TSH marcada con biotina a pocillos de placa ELISA recubiertos con TSHR hMAb TSHR1-biotina TSH-biotina DO450 % de inhibición DO450 % de inhibición Conjunto de HBD 1,852 1,778 Conjunto de HBD más 1 U/ml 1,46 21 1,489 16 Conjunto de HBD más 2 U/ml 1,168 37 1,304 27   Conjunto de HBD más 4 U/ml 0,792 57 0,947 47 Conjunto de HBD más 8 U/ml 0,539 71 0,492 72 Conjunto de HBD más 40 U/ml 0,118 94 0,233 87 Suero P1 1,415 24 1,397 21 Suero P2 1,264 32 1,256 29 Suero P3 0,558 70 0,408 77 Suero P4 0,763 59 0,907 49 Suero P5 1,047 43 - Suero P6 0,843 55 - Suero P7 1,429 23 - HBD 1 1,745 6 1,713 4 HBD 2 1,807 2 - HBD 3 1,779 4 1,626 9 HBD 4 1,821 2 - HBD 5 1,841 1 1,660 7 HBD 6 1,762 5 1,777 0 HBD 7 1,799 3 1,767 1 HBD 8 1,783 4 1,703 4 HBD 9 1,792 3 1,669 3 HBD= suero de donante de sangre sano U/ml son unidades de NIBSC 90/672 Los sueros P1-P7 son de pacientes con enfermedad de Graves Tabla 5. Inhibición de la unión de TSH por la preparación de referencia de la OMS NIBSC 90/672 y por preparaciones de IgG y Fab de hMAb TSHR1 Muestra Muestras diluidas en suero 1 Muestras diluidas en tampón de ensayo % de inhibición NIBS 90/672 0,125 unidades/l 0,25 unidades/l 0,5 unidades/l 1,0 unidades/l 2,0 unidades/l 4,0 unidades/l 8,0 unidades/l 40,0 unidades/l Unidades/l Unidades/mg Media de unidades/mg 15 19 28 38 48 64 69 83 95 94 IgG de hMAb TSHR1 0 ng/ml 1 0,3 ng/ml 1 2 % de inhibición 2 4 11 Unidades/l Unidades/mg Media de unidades/mg   1 ng/ml 3 3 3 ng/ml 7 10 0,46 10 ng/ml 21 1,48 148 33 1,73 173 30 ng/ml 46 3,9 130 138 70 4,8 160 163 100 ng/ml 81 13,5 135 92 15,6 156 300 ng/ml 92 95 >40 Fab de hMAb TSHR1 0,3 ng/ml 5 -2 1 ng/ml 5 1 3 ng/ml 16 1,05 351 16 0,8 265 10 ng/ml 36 2,77 277 52 2,9 291 309 30 ng/ml 69 8,0 267 288 86 9,6 372 100 ng/ml 89 23,7 237 92 16,9 300 ng/ml 93 94 IgG de 2G4 2 0,3 ng/ml 2 -3 3 ng/ml 1 -6 30 ng/ml 0 -5 300 ng/ml 3 -4 Fab 2 de 2G4 0,3 ng/ml 4 -5 3 ng/ml 4 -6 30 ng/ml 1 -5 300 ng/ml 2 -6 1 Conjunto de sueros de donantes de sangre sanos, solo un 14,9% de las cpm totales se unieron al TSHR en presencia de este conjunto de sueros. Solo un 14,7% de las cpm totales se unieron al TSHR en presencia de tampón. 2 2G4 es un autoanticuerpo monoclonal humano de peroxidasa tiroidea. Tabla 6. Inhibición de la unión de TSH por suero de donante de linfocitos e IgG de suero de donante Muestra Muestras diluidas en suero 1 Muestras diluidas en tampón de ensayo % de inhibición Unidades/l 2 Unidades/mg (o unidades/ml en suero no diluido) Media de unidades/mg o (unidades/ml) 36 % de inhibición Unidades/l 2 Unidades/mg (o unidades/ml en suero no diluido) Suero de donante diluido 1000x 6 diluido 300x 18 1,2 (0,36) 28 1,3 (0,39) diluido 100x 42 13,2 (0,32) (0,36) 62 3,9 (0,39) (0,40) diluido 30x 78 11,3 (0,39) 91 13,5 (0,41) diluido 10x 93 34 >40 IgG de suero de donante Media de unidades/mg o (unidades/ml)   0 mg/ml 0,01 mg/l 7 19 0,87 0,03 mg/ml 23 1,6 0,053 37 1,9 0,063 0,1 mg/ml 57 5,1 0,051 0,054 78 6,4 0,064 0,063 0,3 mg/ml 17 0,057 93 19 0,063 1 mg/ml 96 43 96 >40 Suero del conjunto de donantes de sangre sanos diluido 1000x 3 diluido 100x 1 4 diluido 10x 1 11 IgG del conjunto de donantes de sangre sanos 0,01 mg/ml 2 2 0,1 mg/ml 1 1 mg/ml 3 7 1 Conjunto de sueros de donantes de sangre sanos. Solo un 14,7% de las cpm totales se unieron al TSHR en presencia de este conjunto de sueros. Solo un 16,3% de las cpm totales se unieron al TSHR en presencia de tampón. 2 Las unidades mostradas son preparación de referencia de autoanticuerpo de TSHR internacional NIBSC 90/672. Tabla 7. Actividades específicas de hMAb TSHR1 y preparaciones de suero e IgG de donante de linfocitos Ensayo de inhibición de la unión de TSH 37 Ensayo de estimulación de AMP cíclico Preparación Unidades/mg 1,2 Unidades/mmol 1,2 Unidades/mg 1 Unidades/mmol 1 IgG de hMAb TSHR1 22 26 Fab de hMAb TSHR1 IgG de suero de donante 0,059 0,009 0,33 0,048 Unidades/ml donante de suero de 0,38 1,8 1 Las unidades mostradas son de NIBSC 90/672. 2 Los valores son una media de resultados obtenidos en suero y tampón de ensayo (véanse las Tablas 5 y 6). Tabla 8. Sumario de actividades específicas de hMAb TSHR1 y suero e IgG de donante de linfocitos determinadas en varios ensayos de estimulación de AMP cíclico Preparación Unidades medias por mg Número de determinaciones Desviación estándar IgG de hMAb TSHR1 318 16 189 Fab de hMAb TSHR1 492 10 184 IgG de suero de donante 0,10 10 0,08 Unidades/ml de suero de donante 0,9 4 0,6   Tabla 9. Análisis adicional de los efectos de IgG y Fab de hMAb TSHR1 y de IgG de suero de donante de linfocitos en el ensayo de estimulación de AMP cíclico Muestra AMP cíclico medio por pocillo (pmol) IgG de hMAb TSHR1 38 Número de determinaciones Desviación estándar 0 ng/ml 0,96 6 0,048 0,3 ng/ml 1,25 6 0,12 1 ng/ml 1,84 6 0,16 3 ng/ml 3,4 0,37 10 ng/ml Fab de hMAb TSHR1 6,6 0,62 0 ng/ml 0,60 6 0,068 0,3 ng/ml 1,11 6 0,11 1 ng/ml 1,99 6 0,39 3 ng/ml 4,9 6 0,44 10 ng/ml MAb humano de control (2G4) 10,6 6 0,86 1 IgG 0 ng/ml 0,72 11 0,19 IgG 10 ng/ml 0,61 11 0,16 Fab 10 ng/ml IgG de suero de donante de linfocitos 0,61 4 0,044 3 µg/ml 1,67 6 0,38 10 µg/ml 4,20 6 0,93 30 µg/ml IgG de suero del conjunto de donantes de sangre sanos 6,22 6 0,73 30 µg/ml 0,38 6 0,10 1 2G4 es un autoanticuerpo monoclonal humano de peroxidasa tiroidea Tabla 10. Efecto aditivo de TSH e IgG de hMAb TSHR1 en ensayos de estimulación de AMP cíclico Experimento 1 Experimento 2 Muestra AMP cíclico 1 (pmol por pocillo) Muestra AMP cíclico 1 (pmol por pocillo) A tampón solo 0,57 A tampón solo 0,42 B TSH porcina 0,1 ng/ml C hMAb TSHR1 1 ng/ml 1,07 B TSH porcina 0,05 ng/ml 1,07 1,41 C hMAb TSHR1 0,5 ng7ml B más C 2,08 B más C 1,92 1 Los valores mostrados son medias de determinaciones por duplicado estrechamente coincidentes. 0,92   Tabla 11. Efectos de NIBSC 90/672 en el ensayo de estimulación de AMP cíclico Muestra AMP cíclico medio por pocillo (pmol) Número de determinaciones Desviación estándar Tampón solo 0,60 6 0,068 0,1 unidades/l 1,09 6 0,085 0,3 unidades/l 1,49 5 0,11 1,0 unidades/l 3,52 5 0,46 3,0 unidades/l 8,16 6 1,39 Tabla 12. Inhibición de la unión de 125 I-TSH a tubos recubiertos con TSHR mediante Fab de hMAb TSHR1 recombinante expresado en dos cepas de E. coli diferentes (células XL1-Blue MRF' y HB2151) Muestra Dilución del sobrenadante de cultivo 2 39 % de unión Tampón de unión solo 1 12,1 Sobrenadante de cultivo de células XL1-Blue MRF no 4x 11,6 3,9 transformadas 8x 11,5 4,5 16x 11,9 1,5 32x 11,9 1,5 64x 11,9 1,0 128x 12,1 -0,5 Sobrenadante de cultivo de células XL1-Blue MRF 4x 11,5 5,0 transformadas pero no inducidas 8x 11,6 4,2 16x 11,8 2,2 32x 11,1 8,4 64x 11,7 3,4 128x 11,1 8,0 Sobrenadante de cultivo de células XL1-Blue MRF 4x 1,5 87,4 transformadas e inducidas 8x 2,3 81,3 16x 4,7 60,9 32x 7,2 40,2 64x 8,9 26,4 128x 10,3 14,8 Sobrenadante de cultivo de células HB2151 no 4x 11,2 7,3 transformadas 8x 11,1 8,1 16x 10,9 9,7 32x 10,8 10,2 64x 10,8 10,2 128x 10,6 12,3 Sobrenadante de cultivo de células HB2151 4x 10,7 11,6 transformadas pero no inducidas 8x 10,5 13,3 16x 10,6 11,8 32x 10,7 11,4 64x 10,9 9,6 128x 10,6 11,8 Sobrenadante de cultivo de células HB2151 4x 1,0 92,0 transformadas e inducidas 8x 1,0 91,4 % de inhibición 3   1 Tampón de ensayo = NaCl 50 mmol/l, Tris-HCl 10 mmol/l, pH 7,8 2 Todas las diluciones eran en tampón de ensayo 3 Se calculó la inhibición de la unión usando la fórmula: % de inhibición = 100 (A/B x 100) 16x 1,3 89,0 32x 2,2 82,0 64x 4,3 64,1 128x 6,7 44,8 en que A= unión en presencia de muestra de ensayo y B= unión en presencia de tampón de ensayo. Tabla 13. Estimulación de la producción de AMPc en células CHO transfectadas con TSHR por Fab de hMAb TSHR1 recombinante expresado en dos cepas de E. coli diferentes (células XL1-Blue MRF' y HB2151) Muestra Dilución del sobrenadante de cultivo 2 pmol/pocillo de célula Tampón de ensayo solo 1 0,54 0,49 1 Sobrenadante de cultivo de células XL1-Blue MRF no transformadas Sobrenadante de cultivo de células XL1-Blue MRF transformadas pero no inducidas Sobrenadante de cultivo de células XL1-Blue MRF transformadas e inducidas Sobrenadante de cultivo de células HB2151 no transformadas Sobrenadante de cultivo de células HB2151 transformadas pero no inducidas Sobrenadante de cultivo de células HB2151 transformadas e inducidas 0,44 Media Veces el nivel basal 3 10x 0,32 0,33 0,68 10x 0,35 0,52 0,73 0,62 1,3 50x 0,50 0,48 0,49 0,99 10x >6,4 >6,4 >6,4 >13,1 50x 3,5 3,6 3,6 7,3 10x 0,39 0,35 0,37 0,76 10x 0,29 0,45 0,37 0,76 50x 0,37 0,37 0,37 0,76 10x >6,4 >6,4 >6,4 >13,1 50x >6,4 >6,4 >6,4 >13,1 1 Tampón de ensayo= disolución salina tamponada de Hanks (exenta de NaCl) que contiene glucosa 1 g/l, HEPES 20 mmol/l, sacarosa 222 mmol/l, seroalbúmina bovina (SAB) 15 g/l y 2-isobutil-1-metilxantina 0,5 mmol/l, pH 7,4 2 Diluciones en tampón de ensayo 3 Basal= AMPc producido en presencia de tampón de ensayo solo   Tabla 14. Inhibición de la unión de 1 25 I-TSH a tubos recubiertos con TSHR por Fab de hMAb TSHR1 recombinante, Fab de 4B4 recombinante (un MAb humano de GAD) y Fab híbridos recombinantes (HC y LC mixtos de los dos Fab). Expresión en células HB2151 de E. coli ENSAYOS DE FRACCIONES PERIPLASMÁTICAS Muestra de ensayo Dilución de la fracción periplasmática (FP) y (concentración de Fab total en la FP no diluida) 41 % de unión de 125 I-TSH Tampón de ensayo solo 11,5 0 Células no transformadas 4x 8x (id) 16x Células positivas de HC/LC de hMAb TSHR1 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC/LC de hMAb TSHR1 transformadas e inducidas Células positivas de HC de hMAb TSHR1/LC de 4B4 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC de hMAb TSHR1/LC de 4B4 transformadas e inducidas Células positivas de HC de 4B4/LC de hMAb TSHR1 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC de 4B4/LC de hMAb TSHR1 transformadas e inducidas Células positivas de HC/LC de 4B4 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC/LC de 4B4 transformadas e inducidas 1 Se calculó la inhibición usando la fórmula: % de inhibición= 100 (A/B x 100) 4x 8x (177 ng/ml) 16x 4x 8x (364 ng/ml) 16x 4x 8x (id) 16x 4x 8x (83 ng/ml) 16x 4x 8x (id) 16x 4x 8x (850 ng/ml) 16x 4x 8x (id) 16x 4x 8x (265 ng/ml) 16x 11,8 11,8 12,2 1,6 3,6 6,4 0,95 1,4 2,7 12,0 12,1 12,4 11,4 11,8 11,7 11,9 12,2 12,4 11,8 11,2 11,9 12,1 12,0 12,1 11,7 11,7 12,0 % de inhibición 1 -2,7 -2,7 -5,9 86ª 68 92 88 77 -3,9 -4,8 -7,8 0,9 -2,1 -1,8 -3,5 -6,1 -7,8 -2,8 3,1 -3,2 -5,4 -4,0 -4,8 -1,2 -1,4 -4,2 en que A= % de unión de 125 I-TSH en presencia de la muestra de ensayo, B= % de unión de 125 I-TSH en presencia de tampón de ensayo a La detección de la actividad del Ab de TSHR en las células no inducidas era debida a la actividad constitutiva del promotor, que da un bajo nivel de expresión de Fab en ausencia de IPTG. Id= indetectable   Tabla 15. Inhibición de la unión de 125 I-TSH a tubos recubiertos con TSHR por Fab de hMAb TSHR1 recombinante, Fab de 4B4 recombinante (un MAb humano de GAD) y Fab híbridos recombinantes (HC y LC mixtos de los dos Fab). Expresión en células HB2151 de E. coli ENSAYOS DE SOBRENADANTES DE CULTIVO Muestra de ensayo Dilución del sobrenadante de cultivo y (concentración de Fab total en el sobrenadante no diluido) 42 % de unión de 125 I-TSH Tampón de ensayo solo 11,1 0 Células no transformadas 4x 8x (id) 16x Células positivas de HC/LC de hMAb TSHR1 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC/LC de hMAb TSHR1 transformadas e inducidas Células positivas de HC de hMAb TSHR1/LC de 4B4 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC de hMAb TSHR1/LC de 4B4 transformadas e inducidas Células positivas de HC de 4B4/LC de hMAb TSHR1 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC de 4B4/LC de hMAb TSHR1 transformadas e inducidas Células positivas de HC/LC de 4B4 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC/LC de 4B4 transformadas e inducidas 1 Véase la nota al pie de la Tabla 14 Id= indetectable 4x 8x (id) 16x 4x 8x (421 ng/ml) 16x 4x 8x (id) 16x 4x 8x (262 ng/ml) 16x 4x 8x (id) 16x 4x 8x (84 ng/ml) 16x 4x 8x (id) 16x 4x 8x (522 ng/ml) 16x 11,8 13,1 11,1 10,8 12,1 11,9 1,1 1,2 1,1 11,8 12,5 12,0 10,8 11,1 11,3 11,9 12,7 11,8 10,5 10,8 11,2 11,9 12,6 12,0 10,5 11,0 11,0 % de inhibición 1 -6,5 -18 -0,3 2,1 -9,8 -8,1 91 -7,0 -13,0 -1,3 2,7 -0,4 -2,6 -7,4 -7,0 4,8 2,4 -0,9 -7,5 -14 -9,0 -4,7 0,7 0,5 Tabla 16. Estimulación de la producción de AMP cíclico en células CHO transfectadas con Fab de hMAb TSHR1 recombinante, Fab de 4B4 recombinante (un MAb humano de GAD) y Fab híbridos recombinantes (HC y LC mixtos de los dos FAB). Expresión en células HB2151 de E. coli ENSAYOS DE SOBRENADANTES DE CULTIVO Muestra de ensayo 1 Dilución del sobrenadante de cultivo 2 y (concentración de Fab total en sobrenadantes no diluidos) Tampón de ensayo solo 1 0,35 0,25 0,33 pmol de AMP cíclico/pocillo de célula Media de pmol de AMP cíclico/pocillo de célula 0,31 1 Veces del nivel estimulación basal 3   Células no transformadas 10x (id) Células positivas de HC/LC de hMAb TSHR1 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC/LC de hMAb TSHR1 transformadas inducidas e Células positivas de HC de hMAb TSHR1/LC de 4B4 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC de hMAb TSHR1/LC de 4B4 transformadas e inducidas Células positivas de HC de 4B4/LC de hMAb TSHR1 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC de 4B4/LC de hMAb TSHR1 transformadas e inducidas Células positivas de HC/LC de 4B4 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC/LC de 4B4 transformadas inducidas e 10 x (id) 10x (421 ng/ml) 10x (id) 10x (262 ng/ml) 10x (id) 10x (84 ng/ml) 10x (id) 10x (522 ng/ml) 43 0,51 0,67 0,48 0,84 1,80 2,13 >6,4 >6,4 >6,4 0,55 0,63 0,58 0,47 0,47 0,52 0,65 0,59 0,60 0,51 0,37 0,38 0,65 0,73 0,64 0,55 0,41 0,35 0,55 1,8 1,59 5,1 a >6,4 >20 0,59 1,9 0,48 1,6 0,61 2,0 0,42 1,4 0,67 2,2 0,44 1,4 1 Tampón de ensayo: disolución salina tamponada de Hanks (exenta de NaCl) que contiene glucosa 1 g/l, HEPES 20 mmol/, sacarosa 222 mmol/l, seroalbúmina bovina (SAB) 15 g/l y 2-isobutil-1-metilxantina 0,5 mmol/l, pH 7,4 2 Diluciones en tampón de ensayo 3 Basal= producción de AMP cíclico en presencia de tampón de ensayo solo a La detección de la actividad de estimulación de AMP cíclico en las células no inducidas era debida a la actividad constitutiva del promotor, que da un bajo nivel de expresión de Fab en ausencia de IPTG. Los niveles de Fab recombinante total fueron indetectables (límite de detección = 5-10 ng/ml), mientras que la estimulación del ensayo de AMP cíclico puede detectar hasta 0,3 ng/ml de Fab de hMAb TSHR1- id = indetectable.   Tabla 17. Estimulación de la producción de AMP cíclico en células CHO transfectadas con TSHR por Fab de TSHR1 recombinante, Fab de 4B4 recombinante (un MAb humano de GAD) y Fab híbridos recombinantes (HC y LC mixtos de los dos Fab). Expresión en células HB2151 de E. coli ENSAYOS DE FRACCIONES PERIPLASMÁTICAS Muestra de ensayo Dilución de la fracción periplasmática (FP) 2 y (concentración de Fab total en la FP no diluida) Tampón de ensayo solo 0,35 0,25 0,33 Células no transformadas 10x (id) Células positivas de HC/CL de hMAb TSHR1 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC/LC de hMAb TSHR1 transformadas inducidas e Células positivas de HC de hMAb TSHR1/LC de 4B4 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC de hMAb TSHR1/LC de 4B4 transformadas e inducidas Células positivas de HC de 4B4/LC de hMAb TSHR1 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC de 4B4/LC de hMAb TSHR1 transformadas e inducidas Células positivas de HC/LC de 4B4 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC/LC de 4B4 transformadas inducidas e IgG de hMAb de TSHR1 1 ng/ml (producido por hibridoma) 10x (177 ng/ml) 10x (364 ng/ml) 10x (id) 10x (83 ng/ml) 10x (id) 10x (850 ng/ml) 10x (id) 10x (265 ng/ml) Id: indetectable; 1,2,3 véanse las notas al pie de la Tabla 16 pmol de AMP cíclico/pocillo de célula 0,31 0,22 0,35 >6,4 >6,4 >6,4 >6,4 >6,4 - 0,40 0,33 0,33 0,31 0,31 0,41 0,29 0,31 0,29 0,23 0,25 0,24 0,33 0,35 0,29 0,40 0,38 0,32 2,0 2,0 2,0 44 Media de pmol de AMP cíclico/pocillo de célula 0,31 1 0,29 0,9 >6,4 >20,6 a >6,4 >20,6 a 0,35 1,1 0,34 1,1 0,30 1,0 0,24 0,8 0,32 1,0 0,37 1,2 2,0 6,4 Veces del nivel de estimulación basal 3 a La detección de la actividad del Ab de TSHR en las células no inducidas era debida a la actividad constitutiva del promotor, que da un bajo nivel de expresión de Fab en ausencia de IPTG.   Tabla 18. Inhibición de la unión de IgG de 4B4 (un MAb de GAD producido por hibridoma) a 125 I-GAD por Fab de hMAb TSHR1 recombinante, Fab de 4B4 recombinante y Fab híbridos recombinantes (HC y LC mixtos de los dos Fab). Expresión en células HB2151 de E. coli ENSAYOS DE FRACCIONES PERIPLASMÁTICAS Muestra de ensayo añadida con IgG de 4B4 y 125 I-GAD Dilución de la fracción periplasmática (FP) y (concentración de Fab total en la FP no diluida) % de unión de 125 I-GAD Tampón de ensayo de Ab de GAD 28 0 F(ab)2 de 4B4 (producido por hibridoma) 1 µg/ml 0,1 µg/ml 0,01 µg/ml 0,001 µg/ml Células no transformadas 4x 8x (id) 16x Células positivas de HC/LC de hMAb TSHR1 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC/LC de hMAb TSHR1 transformadas e inducidas Células positivas de HC de hMAb TSHR1/LC de 4B4 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC de hMAb TSHR1/LC de 4B4 transformadas e inducidas Células positivas de HC de 4B4/LC de hMAb TSHR1 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC de 4B4/LC de hMAb TSHR1 transformadas e inducidas Células positivas de HC/LC de 4B4 transformadas pero no inducidas Células positivas de HC/LC de 4B4 transformadas e inducidas 4x 8x (177 ng/ml) 16x 4x 8x (364 ng/ml) 16x 4x 8x (id) 16x 4x 8x (83 ng/ml) 16x 4x 8x (id) 16x 4x 8x (850 ng/ml) 16x 4x 8x (id) 16x 4x 8x (265 ng/ml) 16x 1 Se calculó la inhibición de la unión usando la fórmula: % de inhibición= 100 (A/B x 100) 5,5 12 24 29 27 28 29 28 28 28 27 27 29 28 28 27 28 28 28 28 28 28 27 28 28 29 28 27 21 24 26 % de inhibición 1 57 14 -3,9 0,9 -1,7 -6,3 -2,6 -0,5 -0,8 0,7 1,4 -4,2 -1,1 -0,2 1,1 -1,4 -0,7 -2,4 -2,9 -3,2 -3,1 1,7 -0,2 -1,0 -4,4 -1,5 1,7 23,2 12,5 5,6 en que A= % de unión de 125 I-GAD en presencia de la muestra de ensayo, B= % de unión de 125 I-GAD en presencia de tampón de ensayo Id= indetectable.   Tabla 19. Inhibición de la unión de IgG de 4B4 (un MAb de GAD producido por hibridoma) a 125 I-GAD por Fab de hMAb TSHR1 recombinante, Fab de 4B4 recombinante y Fab híbridos recombinantes (HC y LC mixtos de los dos Fab). Expresión en HB2151 de E. coli. ENSAYOS DE SOBRENADANTES DE CULTIVO Muestra de ensayo añadida con IgG de 4B4 y 125 I-GAD Dilución del sobrenadante de cultivo y % de unión (concentración de Fab total en el de I- % de inhibición sobrenadante no diluido) GAD 1 Tampón de ensayo 26 F(ab)2 de 4B4 1 µg/ml 5,2 (producido por hibridoma) 0,1 µg/ml 11 58 0,01 µg/ml 22 0,001 µg/ml 28 -5,2 Células HB2151 no transformadas 4x 28 -5,5 8x (id) 29 -9,1 16x 28 -6,3 Células positivas de HC/LC de hMAb 4x 28 -7,0 TSHR1 transformadas pero no inducidas 8x (id) 29 -9,5 16x 28 -5,2 Células positivas de HC/LC de hMAb 4x 28 -7,0 TSHR1 transformadas e inducidas 8x (421 ng/ml) 28 -6,4 16x 28 -5,6 Células positivas de HC de hMAb 4x 29 -9,0 TSHR1/LC de 4B4 transformadas pero no inducidas 8x (id) 16x 29 28 -7,9 -7,6 Células positivas de HC de hMAb 4x 27 -2,2 TSHR1/LC de 4B4 transformadas e inducidas 8x (262 ng/ml) 16x 28 28 -5,5 -5,1 Células positivas de HC de 4B4/LC de 4x 28 -4,4 hMAb TSHR1 transformadas pero no 8x (id) inducidas 16x 28 28 -7,0 -5,5 Células positivas de HC de 4B4/LC de 4x 27 -2,0 hMAb TSHR1 transformadas e inducidas 8x (84 ng/ml) 28 -5,7 16x 27 -2,5 Células positivas de HC/LC de 4B4 4x 28 -4,8 transformadas pero no inducidas 8x (id) 28 -4,8 16x 27 -1,7 Células positivas de HC/LC de 4B4 4x 11 59 transformadas e inducidas 8x (522 ng/ml) 14 46 16x 17 34 1 Véase la nota al pie de la Tabla 18 Id= Indetectable Tabla 20. Efectos de los anticuerpos monoclonales de ratón de TSHR sobre la estimulación de la producción de AMP cíclico inducida por hMAb TSHR1 en células CHO que expresan TSHR Muestra de ensayo 1 Fab de hMAb TSHR1 5 ng/ml (a) tampón de ensayo 1 pmol de AMP cíclico/pocillo de célula 3,252 2,418 - Media de pmol de AMP cíclico/pocillo de célula 2,835 - 3,9 46 DE Veces del nivel de estimulación basal 3   (b) 2G2 3 4,278 3,392 3,116 (c) 2B4 4 3,320 2,632 2,864 (d) 9D33 4 0,506 0,394 0,428 Tampón de ensayo solo 1 0,696 0,742 0,742 2G2 solo 3 0,252 0,306 0,376 2B4 solo 4 0,298 0,318 0,376 9D33 solo 4 0,280 0,318 0,340 3,595 0,496 4,9 2,939 0,286 4,0 0,443 0,047 0,61 0,727 47 0,02 1 0,311 0,051 0,43 0,331 0,033 0,46 0,313 0,025 0,43 1 Todas las diluciones se hicieron en tampón de ensayo (disolución salina tamponada de Hanks (exenta de NaCl)) que contiene glucosa 1 g/l, HEPES 20 mmol/l, sacarosa 222 mmol/l, seroalbúmina bovina (SAB) 15 g/l y 2-isobutil-1metilxantina 0,5 mmol/l, pH 7,4 2 Basal= producción de AMP cíclico en presencia de tampón de ensayo solo 3 2G2 es un anticuerpo monoclonal de ratón de tiroglobulina (100 g/ml de preparación de IgG) 4 2B4 y 9D33 son anticuerpos monoclonales de ratón de TSHR (100 g/ml de preparaciones de IgG) Tabla 21. Efectos de anticuerpos monoclonales de ratón de TSHR sobre la estimulación inducida por pTSH de la producción de AMP cíclico en células CHO que expresan TSHR Muestra de ensayo 1 pTSH 0,5 ng/ml más: (a) tampón de ensayo 1 pmol de AMP cíclico/pocillo de célula 4,016 2,746 4,960 (b) 2B4 4 0,878 0,710 0,742 (c) 9D33 4 0,436 0,436 0,410 Tampón de ensayo solo 1 0,384 0,318 0,318 2B4 solo 4 0,446 0,486 0,552 Media de pmol de AMP cíclico/pocillo de célula 3,91 0,91 11,5 0,78 0,07 2,3 0,43 0,01 1,3 0,34 DE Veces del nivel de estimulación basal 2 0,03 1 0,49 0,04 1,4   9D33 solo 4 0,332 0,362 0,304 0,33 0,02 0,97 1,2,4 Véanse las notas al pie de la Tabla 20. En un experimento separado, se mostró que un MAb de ratón de control de tiroglobulina (IgG de 2G2 100 g/ml) no tenía efecto sobre la estimulación por pTSH (0,5 ng/ml) de la producción de AMP cíclico ( pTSH más tampón de ensayo= 12,7 veces el nivel basal; pTSH más 2G2 = 11,7 veces el nivel basal) Tabla 22. Inhibición por diversos MAb de la unión de 125 I-TSH, 125 I-hMAb TSHR1 o 125 I-9D33 a tubos recubiertos con TSHR IgG de ensayo y concentración (µg/ml) 1 IgG de 9D33 0,001 0,01 0,1 1 IgG de 2B4 0,001 0,01 0,1 1 IgG de hMAb TSHR1 0,001 0,01 0,1 1 Inhibición de la unión de 125 I-TSH 2 17 34 58 68 36 62 83 13 89 94 48 Inhibición de la unión de 125 IhMAb TSHR1 2 1 Todas las diluciones estaban en un conjunto de sueros de donantes de sangre sanos (conjunto HBD) 2 Se calculó la inhibición de la unión usando la fórmula: % de inhibición= 100 (A/B x 100) 3 21 44 56 11 18 41 88 93 94 Inhibición de la unión de 125 I-9D33 2 en que A: % de unión en presencia de muestra de ensayo y B= % de unión en presencia del conjunto de HBD El Mab de ratón de control de tiroglobulina (2G2, 0,001-100 g/ml) no tenía efecto sobre la unión de TSH, hMAb TSHR1 o 9D33 marcados. Tabla 23. Efecto de los sueros de paciente sobre la unión de 125 I-9D33 y la unión de 125 I-TSH a tubos recubiertos con TSHR Suero de ensayo 1 Conjunto de HBD 125 I-9D33 unido (% de las cuentas totales añadidas) Inhibición de la unión de 125 I- 9D33 (%) 2 11 0 0 G1 2,2 79 90 G2 4,3 74 59 G3 3,2 69 78 G4 5,8 45 50 G5 4,0 62 78 G6 5,1 67 51 G7 5,9 44 74 G8 2,6 75 82 4 9 64 71 4 22 22 1,1 18 72 93 Inhibición de la unión de 125 I-TSH (%) 2   G9 2,0 81 90 G10 5,5 48 62 G11 3,1 62 59 G12 4,0 43 51 G13 6,0 50 59 G14 5,3 71 80 G15 3,1 77 98 G16 2,4 80 93 G17 2,1 84 94 G18 1,7 73 83 G19 2,9 80 94 G20 2,1 71 80 A1 10 1,9 0 A2 10 2,3 0 D1 11 0 0 D2 10 4,5 0 N1 12 -15 6,7 N2 7,9 25 4,1 N3 11 0 6,3 N4 11 -5,0 6,5 N5 9,1 14 6,3 N6 11 -2,1 7,2 N7 14 -37 -1,4 N8 11 -2,1 5,9 N9 12 -9,8 6,7 1 Conjunto de HBD= conjunto de sueros de donantes de sangre sanos G1-G20 son sueros de pacientes con enfermedad de Graves D1 y D2 son de pacientes con diabetes sacarina de tipo I (positivos de autoanticuerpos de ácido glutámico descarboxilasa) A1 y A2 son de pacientes con enfermedad de Addison (positivos de autoanticuerpos de esteroide 21-hidroxilasa) N1-N9 son de donantes de sangre sanos individuales 2 Se calculó la inhibición de la unión usando la fórmula: % de inhibición= 100 (A/B x 100) en que A: % de unión en presencia de muestra de ensayo y B= % de unión en presencia de un conjunto de sueros de donantes de sangre sanos. Tabla 24. Efecto de sueros de paciente con actividades agonista de TSH y antagonista de TSH sobre la unión de 125 I-9D33 a tubos recubiertos con TSHR Muestra dilución de ensayo y 1 I-9D33 unido (% de cuentas totales añadidas) Inhibición de la unión de 125 I-9D33 2 (%) Conjunto de HBD 11 Suero A 1:320 6,4 39 49   1:160 4,7 55 1:80 3,3 69 1:40 2,8 73 1:20 2,4 77 1:10 2,0 82 Suero B 1:320 9,1 13 1:160 8,3 21 1:80 6,4 39 1:40 4,9 53 1:20 3,8 64 1:10 2,5 76 Suero C 1:320 9,7 7,6 1:160 8,9 15 1:80 8,0 24 1:40 6,3 40 1:20 5,1 51 1:10 3,7 65 Suero D 1:320 9,4 11 1:160 8,2 22 1:80 7,2 32 1:40 5,2 51 1:20 4,3 59 1:10 3,3 69 1 Conjunto de HBD = conjunto de sueros de donantes de sangre sanos; los sueros de ensayo se diluyeron en este conjunto Los sueros A y B tienen actividad antagonista de TSH y los sueros C y D actividad agonista de TSH 2 Se calculó la inhibición de la unión con la fórmula usada en la Tabla 23. Tabla 25. Efecto de NIBSC 90/672 sobre la unión de 125 I-9D33 y la unión de 125 I-TSH a tubos recubiertos con TSHR Concentración de 90/672 1 125 I-9D33 unido (% de cuentas totales añadidas) Inhibición de la unión de 125 I-9D33 2 (%) 40 U/l 4,1 72 92 8 U/l 7,1 52 68 2 U/l 11 28 23 1 U/l 13 10 12 0 U/l 15 0 0 1 90/672 diluido en un conjunto de sueros de donantes de sangre sanos 2 Se calculó la inhibición de la unión con la fórmula usada en la Tabla 23. Inhibición de la unión de 125 I-TSH2 (%)   Tabla 26. Inhibición de la unión de Fab de 125 I-hMAb TSHR1 a tubos recubiertos de TSHR por anticuerpos policlonales antiidiotípicos de hMAb TSHR1 en sueros de un ratón inmunizado con Fab de hMAb TSHR1 Muestra de ensayo Dilución 1 de la muestra de ensayo Tampón de ensayo 0 Sueros de un ratón inmunizado con Fab de hMAb TSHR1 1:100.000 1:50.000 1:10.000 1:5.000 1:1.000 51 % de inhibición 2 de la unión de Fab de 125 IhMAb TSHR1 a TSHR 1,3 7,9 49,8 73,0 94,8 Suero de ratón no inmunizado 1:500 -0,8 1 Muestras de ensayo diluidas en tampón de ensayo. La unión en presencia de tampón de ensayo fue de un 43% 2 Se calculó la inhibición de la unión usando la fórmula: % de inhibición= 100 (A/B-100) en que A= % de unión de Fab de 125 I-hMAb TSHR1 en presencia de muestra de ensayo y B= % de unión de Fab de 125 IhMAb TSHR1 en presencia de tampón de ensayo. Tabla 27. Inhibición de la unión de Fab de 125 I-hMAb TSHR1 a tubos recubiertos de TSHR por un anticuerpo monoclonal antiidiotípico de ratón IgG de 7E51 Muestra de ensayo % de unión de Fab de 125 I-hMAb TSHR1 a TSHR Tampón de ensayo solo 16,3 0 IgG de 7E51 diluido en tampón de ensayo 1 µg/ml 10 µg/ml 100 µg/ml 1 Véase la nota al pie de la Tabla 26. 14,5 6,4 1,7 % de inhibición 1 de la unión de Fab de 125 I-hMAb TSHR1 11,0 60,7 89,4   LISTA DE SECUENCIAS <110> RSR Limited <120> Copartícipes de unión para el receptor de tirotropina y usos de los mismos <130> P452347WO <150> GB 0227964.4 <151> 29-11-2002 <150> GB 0302140.9 <151> 29-01-2003 <150> GB 0315147.9 <151> 27-06-2003 <160> 38 <170> PatentIn versión 3.1 <210> 1 <211> 121 <212> PRT <213> humano <400> 1 52   <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> humano <400> 2 <210> 3 <211> 17 <212> PRT <213> humano <400> 3 <210> 4 53   <211> 12 <212> PRT <213> humano <400> 4 <210> 5 <211> 131 <212> PRT <213> humano <400> 5 <210> 6 <211> 111 <212> PRT <213> humano 54   <400> 6 <210> 7 <211> 13 <212> PRT <213> humano <400> 7 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> humano <400> 8 <210> 9 <211> 11 <212> PRT   <213> humano <400> 9 <210> 10 <211> 363 <212> ADN <213> humano <400> 10 <210> 11 <211> 15 <212> ADN <213> humano <400> 11 <210> 12 <211> 51 <212> ADN <213> humano <400> 12 <210> 13 <211> 36 <212> ADN 56   <213> humano <400> 13 <210> 14 <211> 394 <212> ADN <213> humano <400> 14 <210> 15 <211> 333 <212> ADN <213> humano <400> 15 <210> 16 <211> 39 <212> ADN <213> humano <400> 16 57   <210> 17 <211> 21 <212> ADN <213> humano <400> 17 <210> 18 <211> 33 <212> ADN <213> humano <400> 18 <210> 19 <211> 119 <212> PRT <213> ratón <400> 19 58   <210> 20 <211> 5 <212> PRT <213> ratón <400> 20 <210> 21 <211> 17 <212> PRT <213> ratón <400> 21 <210> 22 <211> 10 <212> PRT <213> ratón <400> 22 59   <210> 23 <211> 124 <212> PRT <213> ratón <400> 23 <210> 24 <211> 106 <212> PRT <213> ratón <400> 24   <210> 25 <211> 10 <212> PRT <213> ratón <400> 25 <210> 26 <211> 7 <212> PRT <213> ratón <400> 26 <210> 27 <211> 9 <212> PRT <213> ratón <400> 27 61   <210> 28 <211> 110 <212> PRT <213> ratón <400> 28 <210> 29 <211> 357 <212> ADN <213> ratón <400> 29 <210> 30 62   <211> 15 <212> ADN <213> ratón <400> 30 <210> 31 <211> 51 <212> ADN <213> ratón <400> 31 <210> 32 <211> 30 <212> ADN <213> ratón <400> 32 <210> 33 <211> 373 <212> ADN <213> ratón <400> 33 <210> 34 63   <211> 318 <212> ADN <213> ratón <400> 34 <210> 35 <211> 30 <212> ADN <213> ratón <400> 35 <210> 36 <211> 21 <212> ADN <213> ratón <400> 36 <210> 37 <211> 27 <212> ADN <213> ratón <400> 37 <210> 38 <211> 331 64   <212> ADN <213> ratón <400> 38  

 


Reivindicaciones:

1. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano del receptor de TSH, o uno o más fragmentos del mismo, caracterizado por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, de al menos aproximadamente 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 2. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 1, caracterizado por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 3. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 2, caracterizado por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 4. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por una actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH humana por célula de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 5. Anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado por una actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH humana por célula de al menos aproximadamente 50 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 6. Anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado por una actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH humana por célula de al menos aproximadamente 240 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 7. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 1, en el que (i) la actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, es de al menos aproximadamente 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg; y en el que dicho anticuerpo se caracteriza adicionalmente porque (ii) la actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH por célula es de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 8. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 7, en el que (i) la actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, es de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg; y en el que dicho anticuerpo se caracteriza adicionalmente porque (ii) la actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH por célula es de al menos aproximadamente 240 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 9. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 7, caracterizado por (i) una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg; y 66   (ii) una actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH por célula de al menos aproximadamente 50 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 10. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo del receptor de TSH que comprende un dominio VH de anticuerpo seleccionado del grupo consistente en un dominio VH como se muestra en la SEQ ID NO 1 y un dominio VH que comprende las regiones CDR1 de VH, CDRII de VH y CDRIII de VH de secuencias aminoacídicas como se muestran en la SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3 y SEQ ID NO 4, respectivamente, y un dominio VL seleccionado del grupo consistente en un dominio VL como se muestra en la SEQ ID NO 6 y un dominio VL que comprende las regiones CDRI de VL, CDRII de VL y CDRIII de VL de secuencias aminoacídicas como se muestran en las SEQ ID NO 7, SEQ ID NO 8 y SEQ ID NO 9, respectivamente. 11. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 10, que comprende un dominio VH de anticuerpo como se muestra en la SEQ ID NO 1. 12. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 10, que comprende un dominio VH de anticuerpo que comprende las regiones CDRI de VH, CDRII de VH y CDRIII de VH de secuencias aminoacídicas como se muestran en la SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3 y SEQ ID NO 4, respectivamente. 13. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 10, que comprende un dominio VH de anticuerpo como se muestra en la SEQ ID NO 1 emparejado con un dominio VL de anticuerpo como se muestra en la SEQ ID NO 6, proporcionando un sitio de unión de anticuerpo que comprende ambos de dichos dominios VH y VL del receptor de TSH. 14. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo según la reivindicación 10, que comprende: un dominio VH de anticuerpo que comprende: un dominio VH que comprende las regiones CDRI de VH, CDRII de VH, CDRIII de VH de secuencias aminoacídicas como se muestran en la SEQ ID NO 2, SEQ ID NO 3 y SEQ ID NO 4, respectivamente, y un dominio VL de anticuerpo que comprende: un dominio VL que comprende las regiones CDRI de VL, CDRII de VL, CDRIII de VL de secuencias aminoacídicas como se muestran en la SEQ ID NO 7, SEQ ID NO 8 y SEQ ID NO 9, respectivamente. 15. Un anticuerpo adicional o fragmento del mismo capaz de unirse al receptor de TSH y que compite por la unión al receptor de TSH con un anticuerpo monoclonal humano o anticuerpo recombinante humano del receptor de TSH o un fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos de receptor de TSH, de al menos aproximadamente 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 16. Un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según la reivindicación 15 que comprende un sitio de unión para una región epitópica del receptor de TSH y que compite por la unión al receptor de TSH con un anticuerpo o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14. 17. Un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según la reivindicación 15 que comprende, o deriva de, un anticuerpo monoclonal humano o anticuerpo recombinante humano, o uno o más fragmentos del mismo, reactivo con el receptor de TSH. 18. Un anticuerpo adicional o fragmento de mismo según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 17, caracterizado por una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 19. Un anticuerpo adicional o fragmento de mismo según la reivindicación 18, en el que la acción inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH es de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 20. Un anticuerpo adicional o fragmento de mismo según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 19, en el que la actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH humanos por célula es de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 21. Un anticuerpo adicional o fragmento de mismo según la reivindicación 20, en el que la actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH humanos por célula es de al menos aproximadamente 240 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 67   por mg. 22. Un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según la reivindicación 15, caracterizado por (i) una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, de al menos aproximadamente 15 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg; y en el que dicho anticuerpo se caracteriza adicionalmente por (ii) una actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH por célula de al menos aproximadamente 30 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 23. Un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según la reivindicación 15, caracterizado por (i) una actividad inhibidora con respecto a la unión de TSH marcada con 125 I al receptor de TSH, determinada usando tubos recubiertos con receptor de TSH, de al menos aproximadamente 120 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg; y en el que dicho anticuerpo se caracteriza adicionalmente por (ii) una actividad estimulante con respecto a la producción de AMP cíclico por células CHO que expresan aproximadamente 50.000 receptores de TSH por célula de al menos aproximadamente 240 unidades del estándar internacional NIBSC 90/762 por mg. 24. Un polinucleótido que comprende: (i) una secuencia polinucleotídica como se muestra en las SEQ ID NO 10 o SEQ ID NO 15, que codifica una secuencia aminoacídica de un dominio VH o dominio VL de anticuerpo como se muestra en las SEQ ID NO 1 y SEQ ID NO 6 respectivamente; o (ii) una secuencia nucleotídica que codifica un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo del receptor de TSH según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 14, o que codifica una secuencia aminoacídica de un dominio VH o dominio VL de anticuerpo de un anticuerpo o fragmento del mismo del receptor de TSH según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 14; o (iii) una secuencia nucleotídica que difiere de cualquier secuencia de (i) en la secuencia de codones debido a la degeneración del código genético; o (iv) una secuencia nucleotídica que comprende un fragmento de cualquiera de las secuencias de (i), (ii) o (iii) y que codifica un fragmento Fab, un fragmento Fd, un fragmento Fv, un fragmento dAB, fragmentos F(ab)2 o un fragmento scFV de un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo del receptor de TSH según cualquiera de las reivindicaciones 9 a 14. 25. Un sistema de vector biológicamente funcional que porta un polinucleótido según la reivindicación 24 y que es capaz de introducir el polinucleótido en el genoma de un organismo hospedador. 26. Una célula hospedadora transformada con un polinucleótido según la reivindicación 25. 27. Uno o más anticuerpos antiidiotípicos generados en una región de unión de un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo o un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23. 28. Un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo o un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23 para uso en terapia. 29. Una composición farmacéutica que comprende un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo o un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23, junto con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. 30. Uso de un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo o un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 4-14 y 20-23 en la fabricación de un medicamento para uso en la estimulación del tejido tiroideo o tejido que contiene un receptor de TSH. 31. Uso de un anticuerpo monoclonal humano o recombinante humano o fragmento del mismo o un anticuerpo adicional o fragmento del mismo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 23 en la fabricación de un medicamento para uso en el tratamiento de cáncer de tiroides. 68   Figura 1. Inhibición de la unión de TSH marcada a tubos recubiertos con TSHR por IgG y Fab de hMAb TSHR1. La IgG de control era un autoanticuerpo monoclonal humano de GAD65 69   Figura 2. Actividades estimulantes del tiroides de IgG y Fab de hMAb TSHR1, TSH porcina (70 unidades/mg, pTSH), TSH humana recombinante (6,7 unidades/mg, hTSH) y un anticuerpo monoclonal de control (MAb, un autoanticuerpo monoclonal humano de peroxidasa de tiroides (2G4)). Basal= AMPc producido en presencia de solo disolución salina tamponada de Hanks exenta de NaCl.   Figura 3. Efecto del suero de donante de linfocitos sobre la inhibición de la unión de TSH a TSHR y sobre la estimulación del AMP cíclico en células CHO transfectadas con TSHR. En el caso del ensayo de inhibición de la unión, se diluyó el suero en un conjunto de sueros de donantes de sangre sanos. Para el ensayo de estimulación, se diluyó el suero en disolución salina tamponada de Hanks exenta de NaCl. Los sueros de donantes de sangre sanos (n= 3) dieron respuestas en el intervalo de 1,1-1,3 veces el nivel basal. 71   Figura 3a. Comparación de un ELISA de autoanticuerpos de TSHR según la presente invención con ensayos anteriores, en particular, un ELISA basado en TSH-biotina descrito por J. Bolton, J. Sanders, Y. Oda, C. Chapman, R. Cono, J. Fumaniak, B. Rees Smith Measurement of thyroid-stimulating hormone receptor autoantibodies by ELISA, Clinical Chemistry 1999, volumen 45, pág. 2285-2287 y el RIA original descrito por K. Southgate, F.M. Creagh, M. Teece, C. Kingswood, B. Rees Smith. A receptor assay for the measurement of TSH receptor antibodies in unextracted serum, 1984, Clinical Endocrinology, volumen 20, pág. 539-543. 72   Figura 3b. Comparación de un ELISA de autoanticuerpos de TSHR según la presente invención y un ELISA basado en TSH-biotina descrito por J. Bolton, J. Sanders, Y. Oda, C. Chapman, R. Cono, J. Fumaniak, B. Rees Smith Measurement of thyroid-stimulating hormone receptor autoantibodies by ELISA, Clinical Chemistry 1999, volumen 45, pág. 2285-2287. Se compararon los sueros de 72 pacientes con enfermedad de Graves. y= 1,1154x-13,032, r= 0,99 73   Figura 4. Secuencia nucleotídica de las regiones V, D y J de la cadena pesada de hMAb TSHR1 Figura 4a 74   Figura 4b   Figura 5. Secuencia aminoacídica de las regiones V, D y J de la cadena pesada de hMAb TSHR1 Figura 5a Figura 5b 76   Figura 6. Secuencia de ADN de la cadena ligera de hMAb TSHR1 Figura 6a Figura 6b 77   Figura 7. Secuencia de proteína de la cadena ligera de hMAb TSHR1 Figura 7a Figura 7b 78   Figura 8. Efectos de los sueros de dos pacientes (T1 y T2 con actividad antagonista de TSH) sobre la estimulación de la producción de AMP cíclico (en células CHO transfectadas con TSHR) por pTSH (0,5 ng/ml) e IgG (10 ng/ml) y Fab (5 ng/ml) de hMAb TSHR1 79   Figura 9. Secuencia nucleotídica de la cadena pesada de 9D33 Figura 9a   Figura 9b 81   Figura 10. Secuencia aminocídica de la cadena pesada de 9D33 Figura 10a Figura 10b 82   Figura 11. Secuencia nucleotídica de la cadena ligera de 9D33 Figura 11a Figura 11b 83   Figura 12. Secuencia aminoacídica de la cadena ligera de 9D33 Figura 12a Figura 12b 84