Composición farmacéutica, que comprende un soporte farmacéuticamente aceptable y,

como ingrediente activo, un vehículo viral de presentación que es una partícula viral no apta para la propagación in vivo, vehículo de presentación que presenta un polipéptido, donde dicho polipéptido comprende al menos un epítopo del beta-amiloide (Aß), y donde dicho epítopo genera anticuerpos de unión con Aß contra dicho epítopo durante la administración a un sujeto y donde dichos anticuerpos inhiben la agregación de dicho beta-amiloide

Agentes, composiciones y métodos que los utilizan útiles en el tratamiento o la prevención de la enfermedad de Alzheimer.

Campo y antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a composiciones que comprenden un soporte farmacéuticamente aceptable y, como ingrediente activo, un vehículo viral de presentación que es una partícula viral no apta para la propagación in vivo, presentando dicho vehículo de presentación un polipéptido, en el que dicho polipéptido comprende al menos un epítopo de beta-amiloide (Aß), y en el que dicho epítopo genera anticuerpos de unión a Aß contra dicho epítopo cuando se administra a un sujeto y en el que dichos anticuerpos inhiben la agregación de dicho beta-amiloide.

Las enfermedades que forman placas se caracterizan por la presencia de depósitos de placas amiloides en el cerebro así como por la degeneración neuronal. Los depósitos amiloides se forman por péptidos agregados a una masa insoluble. La naturaleza del péptido varía según las enfermedades pero en la mayoría de los casos, el agregado tiene una estructura de lámina beta y se tiñe con tinción Rojo del Congo. Además de la enfermedad de Alzheimer (EA), la enfermedad de Alzheimer de aparición precoz, la enfermedad de Alzheimer de aparición tardía, la enfermedad de Alzheimer presintomática, otras enfermedades caracterizadas por depósitos amiloides son, por ejemplo, la amiloidosis SAA, el síndrome islandés hereditario, el mieloma múltiple, y las enfermedades priónicas. La enfermedad priónica más común en animales son el temblor epidémico (escrapie) de ovejas y cabras y la encefalopatía espongiforme (BSE) del ganado (Wilesmith y Wells (1991) Curr Top Microbiol Immunol 172: 21-38).

En los humanos se han identificado cuatro enfermedades priónicas: (i) kuru, (ii) la enfermedad Creutzfeldt-Jakob (CJD), (iii) la enfermedad Gerstmann-Streussler-Sheinker (GSS), y (iv) y el insomnio familiar fatal (FFI) (Gajdusek (1977) Science 197: 943-960; Medori, Tritschler et al. (1992) N Engl J Med 326: 444-449).

Etiología de enfermedades priónicas

Las enfermedades priónicas implican la conversión de la proteína priónica celular normal (PrP^C) en la correspondiente isoforma escrapie (PrP^Sc). Las mediciones espectroscópicas demuestran que la conversión de PrP^C en la isoforma escrapie (PrP^Sc) supone una importante transición de conformación, implicando que las enfermedades priónicas, como otras enfermedades amiloidogénicas, son trastornos de la conformación proteínica. La transición de PrP^C a PrP^Sc está acompañada de una disminución de la estructura secundaria a-helicoidal (del 42% al 30%) y de un notable incremento del contenido en lámina beta (del 3% al 43%) (Caughey et al. 1991, Pan et al. 1993). Esta reestructuración está asociada a propiedades fisioquímicas anormales, incluyendo la insolubilidad de detergentes no desnaturalizantes y la resistencia parcial a la proteolisis. Estudios anteriores han mostrado que un péptido sintético homólogo a residuos 106-126 de PrP humano (PrP 106-126) muestra algunas de las propiedades fisicoquímicas y patogénicas de PrP^Sc (Selvaggini et al. 1993, Tagliavini et al. 1993, Forloni, et. al. 1993). El péptido muestra un notable polimorfismo conformacional, adquiriendo diferentes estructuras secundarias en diversos entornos (De Gioia et al. 1994). Tiende a adoptar una conformación de lámina beta en soluciones tamponadas y se acumula en fibrillas amiloides que son resistentes en parte a la digestión con proteasa. Recientemente, los estudios cristalográficos por rayos x de un complejo de anticuerpos 3F4 y su epítopo péptido (PrP 104-113) han proporcionado una visión estructural de esta flexible región que se considera es un componente de la reestructuración conformacional esencial para el desarrollo de una enfermedad priónica (Kanyo et al. 1999). La identificación de clases de secuencias que participan en los procesos de plegado-desplegado y/o solubilización-agregación puede abrir una nueva vía en el tratamiento de enfermedades que forman placas, basada en la prevención de la agregación y/o la inducción de la desagregación (Silen y Agard, 1989, Frenkel et al. 1998, Horiuchi y Caughey, 1999).

Enfermedad de Alzheimer - consideraciones clínicas

La enfermedad de Alzheimer (EA) es un trastorno progresivo que tiene como resultado la demencia senil. De manera general, la enfermedad presenta dos categorías: la aparición tardía que se produce en la vejez (normalmente pasados los 65 años) y la aparición precoz que se desarrolla mucho antes del periodo senil, entre los 35 y 60 años por ejemplo. En ambos tipos de enfermedad, la patología es similar, pero las anomalías tienden a ser más graves y generalizadas en los casos que comienzan a una edad temprana. La enfermedad se caracteriza por dos tipos de lesiones del cerebro, las placas seniles y los nudos neurofibrilares. Las placas seniles son áreas de neutrófilos desorganizados de hasta 150 mm con depósitos amiloides extracelulares en el centro, visibles mediante análisis microscópico de secciones de tejido cerebral. Los nudos neurofibrilares son depósitos intracelulares de proteína tau consistentes en dos filamentos enrollados entre sí en parejas.

Placas seniles y otras enfermedades amiloides

El principal componente de las placas seniles es un péptido denominado Aß o péptido beta-amiloide (ßAP). El péptido beta-amiloide es un fragmento interno de 39-43 aminoácidos de una proteína precursora denominada proteína precursora de amiloide (PPA). Varias mutaciones de la proteína PPA han sido correlacionadas con la presencia de la enfermedad de Alzheimer (Ver, por ej., Goate et al., Nature 349,704, 1991, valina⁷¹⁷ a isoleucina; Chartier Harían et al. Nature 353, 844, 1991, valina⁷¹⁷ a glicina; Murrell et al., Science 254, 97, 1991, valina⁷¹⁷ fenilalanina; Mullan et al., Nature Genet. 1, 345, 1992, una mutación doble, cambiando lisina⁵⁹⁵-metionina⁵⁹⁶ por asparagina⁵⁹⁵-leucina⁵⁹⁶).

Se cree que tales mutaciones causan la enfermedad de Alzheimer por el procesamiento incrementado o alterado de la PPA en beta-amiloide, en particular, por el procesamiento de la PPA en cantidades mayores de la forma larga del beta-amiloide (es decir, Aß1-42 y Aß1-43). Se cree que las mutaciones en otros genes, como los genes de la presenilina, PS1 y PS2, afectan indirectamente el procesamiento de la PPA generando mayores cantidades del beta-amiloide de forma larga (ver Hardy, TINS 20, 154, 1997). Estas observaciones indican que el beta-amiloide y en particular su forma larga, es un elemento causativo de la enfermedad de Alzheimer.

También se conocen otros péptidos o proteínas de los que hay pruebas de auto-agregación, como por ejemplo, sin ánimo de ser exhaustivos, la amilina (Young AA. et al., 1994, FEBS Lett, 343(3);237-41); bombesina, ceruleína, octapéptido de colecistokinina, eledoisina, pentapéptido relacionado con la gastrina, tetrapéptido de gastrina, somatostatina (reducida), sustancia P; y péptido, hormona que libera la hormona luteinizante, somatostatina N-Tyr (Banks y Kastin, Prog Brain Res., 91:139-4, 1992).

La unión de anticuerpos monoclonales de elevada afinidad (mAbs) a dichas regiones puede alterar la dinámica molecular de todo el conjunto o cadena de proteínas. Mediante la selección adecuada, se ha descubierto que los anticuerpos monoclonales (mAbs) reconocen epítopos incompletamente plegados y que inducen la conformación nativa en proteínas parcial o incorrectamente plegadas (Frauenfelder et al. 1979, Blond y Goldberg 1987, Karplus y Petsko 1990, Carlson y Yarmush 1992, Solomon y Schwartz 1995).

Tratamiento

La Patente U.S. Nº 5.688.561 Solomon enseña métodos de identificar anticuerpos monoclonales eficaces para desagregar agregados de proteínas e impedir la agregación de dichas proteínas. Específicamente, la Patente US Nº 5.688.561 muestra anticuerpos monoclonales anti-beta-amiloides eficaces para desagregar placas beta-amiloides e impedir la formación de placas beta-amiloides in vitro. La Patente U.S. Nº 5.688.561 estipula el uso in vivo de dichos anticuerpos para impedir la formación de placas por agregación de placas beta-amiloides o para desagregar placas beta-amiloides que ya se hayan formado. Sin embargo, estas demostraciones no identifican un epítopo que se pueda emplear para generar dichos anticuerpos. Además, estas demostraciones no proporcionan...

1. Composición farmacéutica, que comprende un soporte farmacéuticamente aceptable y, como ingrediente activo, un vehículo viral de presentación que es una partícula viral no apta para la propagación in vivo, vehículo de presentación que presenta un polipéptido, donde dicho polipéptido comprende al menos un epítopo del beta-amiloide (Aß), y donde dicho epítopo genera anticuerpos de unión con Aß contra dicho epítopo durante la administración a un sujeto y donde dichos anticuerpos inhiben la agregación de dicho beta-amiloide.

2. Composición farmacéutica según la reivindicación 1, donde dicha partícula viral no apta para la propagación in vivo se elige en el grupo que consiste en una partícula viral de ADN bicatenario no apta para la propagación in vivo, una partícula viral de ADN monocatenario no apto para la propagación in vivo, una partícula viral de ARN de cadena positiva no apta para la propagación in vivo y una partícula viral de ARN de cadena negativa no apta para la propagación in vivo.

3. Composición farmacéutica según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, donde dicha partícula viral no apta para la propagación in vivo es una partícula de bacteriófago no apta para la propagación en vivo.

4. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde dicha partícula viral no apta para la propagación in vivo se elige de forma que, menos de 30 días después de una introducción de una triple dosis de 10¹⁰ unidades de ésta en el receptor, un título de dichos anticuerpos sea superior a 1:50 000, de la manera determinada por el análisis ELISA.

5. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde dicho epítopo es EFRH (SEC Nº ID: 1), DAEFRH (residuos 1-6 de SEC Nº ID: 3), DAEFRHD (residuos 1-7 de la SEC Nº ID: 3), o DAEFRHDSG (residuos 1-9 de la SEC Nº ID: 3).

6. Composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, donde dicho epítopo comprende EFRH (SEC Nº ID: 1).

7. Utilización de una composición farmacéutica según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en la producción de un medicamento destinado al tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.

8. Utilización según la reivindicación 7, donde dicha partícula viral no apta para la propagación in vivo se elige en el grupo que consiste en un partícula viral de ADN bicatenario no apta para la propagación in vivo, una partícula viral de ADN monocatenario no apta para la propagación in vivo, una partícula viral de ARN de cadena positiva no apta para la propagación in vivo y una partícula viral de ARN de cadena negativa no apta para la propagación in vivo.

9. Utilización según la reivindicación 7, donde dicha partícula viral no apta para la propagación in vivo es una partícula de bacteriófago no apta para la propagación en vivo.

10. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, donde la enfermedad de Alzheimer es la enfermedad de Alzheimer de aparición precoz.

11. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, donde la enfermedad de Alzheimer es la enfermedad de Alzheimer de aparición tardía.

12. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, donde la enfermedad de Alzheimer es la enfermedad de Alzheimer presintomática.

13. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 12, donde dicho medicamento está destinado a la introducción en el organismo del receptor de manera que se inhiba la agregación del beta-amiloide por aplicación de dicha partícula viral no apta para la propagación in vivo en el sistema olfativo del receptor.

14. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 13, donde dicho epítopo es EFRH (SEC Nº ID: 1), DAEFRH (residuos 1-6 de la SEC Nº ID: 3), DAEFRHD (residuos 1-7 de la SEC Nº ID: 3), o DAEFRHDSG (residuos 1-9 de la SEC Nº ID: 3).

15. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 14, donde dicho epítopo comprende EFRH (SEC Nº ID: 1).

16. Agente que comprende un vehículo viral de presentación que es una partícula viral no apta para la propagación in vivo, vehículo de presentación que presenta un polipéptido, donde dicho polipéptido comprende al menos un epítopo de beta-amiloide (Aß), y donde dicho epítopo genera anticuerpos de unión con Aß contra dicho epítopo durante la administración a un sujeto y donde dichos anticuerpos inhiben la agregación de dicho beta-amiloide.

17. Agente según la reivindicación 16, donde dicha partícula viral no apta para la propagación in vivo se elige en el grupo que consiste en una partícula viral de ADN bicatenario no apta para la propagación in vivo, una partícula viral de ADN monocatenario no apta para la propagación in vivo, una partícula viral de ARN de cadena positiva no apta para la propagación in vivo y una partícula viral de ARN de cadena negativa no apta para la propagación in vivo.

18. Agente según la reivindicación 16 o la reivindicación 17, donde dicha partícula viral no apta para la propagación in vivo es una partícula de bacteriófago no apta para la propagación en vivo.

19. Agente según una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18, donde dicha partícula viral no apta para la propagación in vivo se elige de manera que, menos de 30 días después de una introducción de una triple dosis de 1010 unidades de ésta en el receptor, un título de dichos anticuerpos sea superior a 1:50 000, de la manera determinada por el análisis ELISA.

20. Agente según una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 19, donde dicho epítopo es EFRH (SEC Nº ID: 1), DAEFRH (residuos 1-6 de la SEC Nº ID: 3), DAEFRHD (residuos 1-7 de la SEC Nº ID: 3), o DAEFRHDSG (residuos 1-9 de la SEC Nº ID: 3).

21. Agente según una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 20, donde dicho epítopo comprende EFRH (SEC Nº ID: 1).

22. Utilización de un agente según una cualquiera de las reivindicaciones 16 a 21, en la producción de un medicamento destinado al tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.

23. Utilización según la reivindicación 22, donde dicha partícula viral no apta para la propagación in vivo se elige en el grupo que consiste en una partícula viral de ADN bicatenario no apta para la propagación in vivo, una partícula viral de ADN monocatenario no apta para la propagación in vivo, una partícula viral de ARN de cadena positiva no apta para la propagación in vivo y una partícula viral de ARN de cadena negativa no apta para la propagación in vivo.

24. Utilización según la reivindicación 22, donde dicha partícula viral no apta para la propagación in vivo es una partícula de bacteriófago no apta para la propagación in vivo.

25. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 24, donde la enfermedad de Alzheimer es la enfermedad de Alzheimer de aparición precoz.

26. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 24, donde la enfermedad de Alzheimer es la enfermedad de Alzheimer de aparición tardía.

27. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 24, donde la enfermedad de Alzheimer es la enfermedad de Alzheimer presintomática.

28. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 27, donde dicho medicamento está destinado a la introducción en el organismo del receptor de manera que se inhiba la agregación de beta-amiloide aplicando dicha partícula no apta para la propagación in vivo en el sistema olfativo del receptor.

29. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 28, donde dicho epítopo es EFRH (SEC Nº ID: 1), DAEFRH (residuos 1-6 de la SEC Nº ID: 3), DAEFRHD (residuos 1-7 de la SEC Nº ID: 3), o DAEFRHDSG (residuos 1-9 de la SEC Nº ID: 3).

30. Utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 22 a 29, donde dicho epítopo comprende EFRH (SEC Nº ID: 1).