PLATAFORMA ANALÍTICA Y PROCEDIMIENTO DE DETECCIÓN CON ANALITOS A DETECTAR EN UNA MUESTRA EVENTUALMENTE DESPUÉS DEL FRACCIONAMIENTO COMO ASOCIADOS DE UNIÓN ESPECÍFICOS INMOVILIZADOS.

Plataforma analítica y procedimiento de detección con analitos a detectar en una muestra eventualmente después de fraccionamiento como asociados de unión específicos inmovilizados La presente invención se refiere a una plataforma analítica y a un procedimiento realizado con ésta para analizar una multiplicidad de muestras en lo relativo a los compuestos contenidos en las muestras, biológicamente relevantes como participantes en reacciones de unión específicas, como analitos, caracterizado porque dichas muestras o fracciones de dichas muestras con los analitos a detectar allí contenidos, como una primera multiplicidad de asociados de unión específicos se aplican directamente o después de diluciones adicionales de las muestras o de las fracciones en al menos una matriz unidimensional o bidimensional en áreas de medición diferenciadas en una plataforma sensora de campo evanescente como soporte sólido, en donde se disponen distintas muestras o fracciones o distintas diluciones de muestras o fracciones en distintos áreas de medición diferenciadas, una o varias sustancias de detección, como una segunda multiplicidad de asociados de unión específicos, para la detección específica de uno o varios analitos contenidos en las muestras, a partir de dicha primera multiplicidad de asociados de unión específicos, se ponen en contacto en una única o en varias etapas de una reacción de unión específica con las muestras o sus fracciones o sus diluciones aplicadas en dichas áreas de medición diferenciadas, modificaciones de señales optoelectrónicas como consecuencia de la unión de sustancias de detección con analitos contenidos en áreas de medición diferenciadas, se miden con resolución local en el campo evanescente de la plataforma sensora de campo evanescente y a partir del tamaño relativo de las modificaciones de dichas señales optoelectrónicas de los respectivos áreas de medición se determina cualitativa y/o cuantitativamente la presencia de los analitos. Al mismo tiempo dichas modificaciones de señales optoelectrónicas, pueden ser determinadas como consecuencia de la unión de sustancias de detección a analitos contenidos en las muestras en áreas de medición diferenciadas, en el campo evanescente de la plataforma sensora de campo evanescente, por ejemplo, a partir de la comparación de las señales medidas simultáneamente de distintos rangos de medición, las que contienen analitos a detectar correspondientes (en concentración y/o cantidad conocida o desconocida) con las señales de áreas de medición, las que no contienen analitos a detectar correspondientes. Para la determinación de dichas modificaciones de señales también se pueden usar las señales de áreas de medición con concentración desconocida con aquellas áreas de medición con analitos allí contenidos en concentración conocida. Para el caso de la captación continua de señales y durante la adición de las sustancias de detección correspondientes y su unión a las áreas de medición que contienen analitos correspondientes se puede determinar una modificación correspondiente también a partir del transcurso temporal de las señales de las áreas de medición correspondientes. A continuación la expresión una muestra" o una muestra de inmovilización" o muestra inmovilizada" se refiere también a dos o más, es decir, a una multiplicidad de tales muestras o muestras de inmovilización", en tanto no se indique expresamente de otro modo. Para numerosos campos de aplicación es necesario determinar una multiplicidad de analitos biológicamente relevantes en una muestra compleja, por ejemplo en procedimientos de diagnóstico para la determinación del estado de salud de un individuo o en la investigación y el desarrollo de productos farmacéuticos para la determinación de la influencia que ejerce un organismo y su funcionamiento complejo por medio de la alimentación de compuestos biológicamente activos. Mientras que procedimientos de separación analíticos conocidos están optimizados en general para separar, dentro de un tiempo en lo posible corto, una cantidad en lo posible grande, de compuestos contenidos en una muestra dada de acuerdo con un parámetro fisicoquímico predeterminado, como por ejemplo, del peso molecular o del cociente de carga molecular y masa, los procedimientos de detección por bioafinidad se basan en que, con un elemento de detección biológico o bioquímico o sintético, en lo posible de alta especificidad, se detecte y se una el analito correspondiente (único) en forma altamente selectiva en una muestra compuesta en forma compleja. La detección de una multiplicidad de compuestos diferentes requiere por lo tanto el uso de una cantidad correspondiente de diferentes elementos de reconocimiento específicos. Un procedimiento de detección que se basa en reacciones de bioafinidad se puede realizar tanto en una solución homogénea como también en la superficie de un soporte sólido. Según la configuración específica del procedimiento, después de la unión de los analitos a los elementos de reconocimiento correspondientes y eventualmente otras sustancias de detección así como también eventualmente entre distintos pasos del procedimiento son necesarios pasos de lavado, para separar los complejos formados a partir de los elementos de reconocimiento y los analitos a detectar así como también eventualmente otras sustancias de detección del resto de la muestra y de los reactivos adicionales usados eventualmente. Se han divulgado en forma relativamente amplia procedimientos para la detección simultánea de una multiplicidad de diferentes ácidos nucleicos en una muestra con ayuda de ácidos nucleicos inmovilizados complementarios 2   correspondientes, inmovilizados sobre un soporte sólido en áreas de medición diferenciadas, separados espacialmente, como elementos de reconocimiento. Por ejemplo, se conocen, en base a plaquetas de vidrio o de microscopio, matices de oligonucleótidos como elementos de reconocimiento con una densidad de feature muy alta (densidad de áreas de medición sobre un soporte sólido común). Por ejemplo, en la patente US No. 5.445.934 (Affymax Technologies) se describen y reivindican matrices de oligonucleótidos con una densidad de más de 1000 features por centímetro cuadrado. Desde hace poco se acumulan también las descripciones de matrices y con ello los procedimientos de detección realizados de modo similar para la determinación simultánea de una multiplicidad de proteínas, por ejemplo, en la patente US N.º 6.365.418 B1. En las patentes para las así llamadas micromatrices" de este tipo, tanto para la detección de ácidos nucleicos como también para otros biopolímeros, como por ejemplo, proteínas, se describe en cada caso, que una multiplicidad de diferentes elementos de reconocimiento específicos en áreas de medición diferenciadas para la generación de una matriz para la detección de un analito son inmovilizados y a continuación se pone en contacto la muestra a ensayar con los analitos presentes allí en una mezcla (eventualmente compleja). De acuerdo con las descripciones conocidas, se encuentran diferentes elementos de reconocimiento específicos en cada caso en una forma en lo posible muy pura en diferentes áreas de medición diferenciadas, de modo que en las áreas de medición con diferentes elementos de reconocimiento se unen en general diferentes analitos de la muestra. Este tipo de ensayos conocidos requiere que los elementos de reconocimiento específicos a inmovilizar en forma en lo posible muy pura sean enriquecidos por medio de pasos de procesamiento en parte muy costosos y complicados. Como los distintos elementos de captación se diferencian más o menos fuertemente en sus propiedades fisicoquímicas (por ejemplo, en su polaridad), existen también diferencias correspondientes en las condiciones para una inmovilización óptima de estos elementos de reconocimiento, por ejemplo por adsorción o unión covalente, en áreas de medición diferenciadas sobre un soporte sólido común, eventualmente sobre una capa que brinda adhesividad aplicada encima. Por consiguiente, las condiciones de inmovilización (como por ejemplo, tipo de la capa de que brinda adhesividad) elegidas para la inmovilización de una multiplicidad de diferentes elementos de reconocimiento, difícilmente puedan representar simultáneamente un óptimo para todos los elementos de reconocimiento, sino simplemente un compromiso entre las propiedades de inmovilización de los diferentes elementos de reconocimiento. En este tipo de matrices es además desventajoso que para la detección de analitos en una multiplicidad de diferentes muestras, en general es necesaria la puesta a disposición de una cantidad correspondiente de matrices discretas de elementos de reconocimiento, a las cuales se alimentan las diferentes muestras, sobre portadores comunes o discretos.... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para ensayar una multiplicidad de muestras en lo relativo a los compuestos contenidos en las muestras, biológicamente relevantes como participantes en reacciones de unión específicas, como analitos, caracterizado porque dichas muestras o fracciones de dichas muestras con los analitos a detectar allí contenidos, como una primera multiplicidad de asociados de unión específicos se aplican directamente o después de diluciones adicionales de las fracciones en al menos una matriz unidimensional o bidimensional en áreas de medición diferenciadas en una plataforma sensora de campo evanescente como soporte sólido, en donde se disponen distintas muestras o fracciones o distintas diluciones de muestras o fracciones en distintos áreas de medición diferenciadas, una o varias sustancias de detección, como una segunda multiplicidad de asociados de unión específicos, para la detección específica de uno o varios analitos contenidos en las muestras o sus fracciones, a partir de dicha primera multiplicidad de asociados de unión específicos, se ponen en contacto en una única etapa o en varias etapas de una reacción de unión específica con las muestras o fracciones aplicados en dichas áreas de medición diferenciadas o sus diluciones, modificaciones de señales optoelectrónicas como consecuencia de la unión de sustancias de detección con analitos contenidos en áreas de medición diferenciadas, se miden con resolución local en el campo evanescente de la plataforma sensora de campo evanescente, y a partir del tamaño relativo de las modificaciones de dichas señales optoelectrónicas de los respectivos áreas de medición se determina cualitativa y / o cuantitativamente la presencia de los analitos a detectar allí de forma específica. 2. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado por un procedimiento de separación para dividir la muestra en una o varias de dichas fracciones del grupo de procedimientos formado por centrifugación, cromatografía líquida de alta presión y microcromatografía líquida de alta presión por medio del método de cromatografía en fase normal, en fase inversa, de intercambio iónico o de interacción hidrófoba, cromatografía por exclusión de tamaño, cromatografía en gel, electroforesis, electroforesis capilar, electrocromatografía, electroforesis de flujo libre. 3. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 12, caracterizado porque se diluye una fracción de una muestra antes de la aplicación sobre dicha plataforma sensora de campo evanescente como soporte sólido al menos en un factor 10. 4. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 12, caracterizado porque se diluye una fracción de una muestra antes de la aplicación sobre dicha plataforma sensora de campo evanescente como soporte sólido al menos en un factor 30. 5. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 14, caracterizado porque las muestras están seleccionadas del grupo de extractos de células sanas o enfermas, extractos de tejido animal o humano o de tejido vegetal, así como de líquidos corporales o sus componentes. 6. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 14, caracterizado porque las muestras están seleccionadas del grupo que comprende extractos de células estimuladas o no tratadas y extractos de tejido sano o enfermo. 7. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 16, caracterizado porque una muestra por ensayar de un organismo o estructura tisular o celular o célula se extrajo por medio de un método del grupo de cortes de tejidos, biopsia o Laser Capture Micro Dissection. 8. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 17, caracterizado porque una muestra inmovilizada comprende el material de menos de 20000 células. 9. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 18, caracterizado porque una muestra inmovilizada comprende el material de menos de 1000 células. 10. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 19, caracterizado porque los analitos contenidos en una muestra inmovilizada están presentes en forma nativa o desnaturalizada. 11. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 19, caracterizado porque los analitos, ácidos nucleicos o proteínas contenidos en una muestra inmovilizada, después del tratamiento con urea, se presentan en forma desnaturalizada, en donde los epítopos de dichos analitos tienen libre acceso para la unión a sus correspondientes sustancias de detección. 12. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 111, caracterizado porque las cantidades totales relativas de uno o varios compuestos como analitos contenidas en una muestra inmovilizada son determinadas, como suma de sus presencias en forma fosforilada o no fosforilada y / o en forma glicosilada y / o no glicosilada.   13. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 111, caracterizado porque las cantidades relativas de uno o varios compuestos como analitos contenidas en una muestra inmovilizada se determinan en cada caso por su presencia en forma fosforilada y / o no fosforilada y / o en forma glicosilada y / o no glicosilada, para una o varias de dichas formas. 14. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 111, caracterizado porque se determina el grado de activación uno o varios de analitos contenidos en una muestra inmovilizada. 15. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 111, caracterizado porque se determina el grado de fosforilación y / o el grado de glucosilación de uno o varios de analitos contenidos en una muestra inmovilizada. 16. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 115, caracterizado porque se detectan diferencias de menos del 20 %, con preferencia de menos del 10 %, de las cantidades relativas de uno o varios compuestos contenidos en una muestra inmovilizada y en una o varias muestras comparativas en forma fosforilada y / o no fosforilada y / o en forma glicosilada y / o no glicosilada como analitos, para una o varias de dichas formas. 17. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 16, caracterizado porque dicha muestra inmovilizada y una o varias muestras comparativas se extrajeron del mismo lugar de origen en diferentes momentos y porque se determinan modificaciones temporales de las cantidades relativas de uno o varios compuestos contenidas en estas muestras en forma fosforilada y / o no fosforilada y / o en forma glicosilada y / o no glicosilada como analitos. 18. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 117, caracterizado porque se extrajeron diferentes muestras del mismo organismo o del mismo cultivo celular. 19. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 18, caracterizado porque se extrajeron diferentes muestras en diversas posiciones del mismo organismo. 20. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 117, caracterizado porque se extrajeron diferentes muestras de distintos organismos o distintos cultivos celulares. 21. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 120, caracterizado porque la plataforma sensora de campo evanescente, para mejorar la adherencia de la muestra inmovilizada a aplicar en las áreas de medición diferenciadas, comprende una capa adhesiva sobre la que se aplican dichas fracciones de muestras o diluciones de estas fracciones. 22. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 21, caracterizado porque dicha capa adhesiva tiene un espesor de menos de 200 nm, con preferencia de menos de 20 nm. 23. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 2122, caracterizado porque dicha capa adhesiva comprende compuestos del grupo de silanos, silanos funcionalizados, epóxidos, polímeros funcionalizados, cargados o polares y mono o multicapas pasivas o funcionalizadas autoorganizadas, tioles, fosfatos y fosfonatos de alquilo, copolímeros de bloque multifuncionales. 24. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 2122, caracterizado porque dicha capa adhesiva comprende compuestos del grupo de ácidos organofosfóricos de la fórmula general I (A) YBOPO3 H2 (IB) o de ácidos organofosfónicos de la fórmula general I (B) YBPO3 H2 (IB) y sus sales, en los que B significa un resto alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, hetarilo o hetarilalquilo e Y hidrógeno o un grupo funcional de la serie de hidroxi, carboxi, amino, mono o dialquilamino eventualmente sustituido con alquilo inferior, tiol, o un grupo ácido negativo de la serie de éster, fosfato, fosfonato, sulfato, sulfonato, maleimida, succinimidilo, epoxi o acrilato. 25. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 124, caracterizado porque una o varias muestras inmovilizadas se mezclan antes de su aplicación sobre la plataforma sensora de campo evanescente como soporte sólido con una solución de polímeros o monómeros polimerizables, eventualmente en presencia de iniciadores o de reticulantes químicos. 26. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 25, caracterizado porque dicha solución de polímeros o monómeros polimerizables o reticulantes químicos está seleccionada del grupo que comprende soluciones de polisacáridos. 27. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 2526, caracterizado porque la mezcla de una o varias muestras inmovilizadas con una solución de polímeros o monómeros polimerizables da lugar a la inmovilización de una estructura de red tridimensional con componentes de muestras allí unidas, accesibles para sustancias de detección en la siguiente etapa de una reacción de bioafinidad sobre la plataforma sensora de campo evanescente como soporte sólido. 21   28. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 120, caracterizado porque la muestra inmovilizada se aplica en áreas de medición diferenciadas sobre la plataforma sensora de campo evanescente directamente o sobre una capa adhesiva colocada sobre ella de forma espacialmente selectiva con ayuda de un procedimiento que se selecciona del grupo de procedimientos formados por Inkjet spotting, spotting mecánico por medio de vástago, muelle o capilares, Micro contact printing, contacto fluídico de las áreas de medición con dichas muestras suministrándolas en microcanales paralelos o cruzados bajo acción de diferencias de presión o potenciales eléctricos o electromagnéticos, así como procedimientos de inmovilización fotoquímicos o fotolitográficos. 29. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 128, caracterizado porque se aplican áreas entre las áreas de medición diferenciadas para minimizar la unión inespecífica de sustancias de detección entre las áreas de medición espacialmente separados respecto de los analitos y otros componentes de la muestra inmovilizada aplicada, así como respecto de componentes que no unen los analitos con las sustancias de detección para dichos analitos. 30. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 29, caracterizado porque estos componentes que no se unen están seleccionados de los grupos formados por albúminas, en especial, albúmina de suero bovino o albúmina de suero humano, caseína, anticuerpos, policlonales o monoclonales, inespecíficos de especies extraña o empíricamente inespecíficos para el o los analitos a detectar, detergentes, ADN natural o sintético fragmentado que no hibride con los polinucleótidos a analizar, o también polímeros no cargados pero hidrófilos. 31. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 123, caracterizado porque en el caso de los analitos a detectar contenidos en muestras inmovilizadas aplicadas en áreas de medición diferenciadas se trata de compuestos del grupo formado por proteínas, por ejemplo anticuerpos y fragmentos de anticuerpos mono o policlonales, péptidos, enzimas, glucopéptidos, oligosacáridos, lectinas, antígenos para anticuerpos, proteínas funcionalizadas con sitios de unión adicionales, así como ácidos nucleicos. 32. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 31, caracterizado porque en el caso de los analitos a detectar contenidos en muestras inmovilizadas aplicadas en áreas de medición diferenciadas se trata de compuestos del grupo que comprende proteínas celulares citosólicas o unidas a membrana, en especial, proteína quinasas participantes de los procesos de transducción de señales en células. 33. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 132, caracterizado porque los cambios en las señales optoeléctricas medidas con resolución local se producen como consecuencia de la unión de las sustancias de detección a los analitos presentes en áreas de medición diferenciadas en las muestras inmovilizadas, por cambios locales en las condiciones de resonancia para generar un plasmón superficial en una capa de metal fina como parte de dicha plataforma sensora de campo evanescente. 34. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 33, caracterizado porque dichos cambios en las condiciones de resonancia consisten un cambio del ángulo de resonancia para la iluminación con una luz de excitación para generar un plasmón superficial en una capa fina de metal como parte de dicha plataforma sensora de campo evanescente. 35. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 33, caracterizado porque dichos cambios en las condiciones de resonancia consisten en cambio de la longitud de onda de resonancia de una luz de excitación incidente para generar un plasmón superficial en una capa fina de metal como parte de dicha plataforma sensora de campo evanescente. 36. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 135, caracterizado porque los cambios en las señales optoeléctricas medidas con resolución local se producen, como consecuencia de la unión de las sustancias de detección a los analitos presentes en áreas de medición diferenciadas en las muestras inmovilizadas, por cambios locales en el índice de refracción efectivo en estas áreas de dicha plataforma sensora de campo evanescente. 37. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 132, caracterizado porque los cambios en las señales optoeléctricas medidas con resolución local se producen, como consecuencia de la unión de las sustancias de detección a los analitos presentes en áreas de medición diferenciadas en las muestras inmovilizadas, por cambios locales de una o más luminiscencias de moléculas capaces de producir luminiscencia presentes dentro del campo evanescente de dicha plataforma sensora de campo evanescente. 38. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 37, caracterizado porque dichos cambios en una o más de las luminiscencias provienen de moléculas capaces de producir luminiscencia o nanopartículas capaces de producir luminiscencia que se unen como marcas luminiscentes a una o más sustancias de detección para los analitos presentes en las áreas de medición diferenciadas. 39. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 38, caracterizado porque se emplean dos o más marcas luminiscentes con diferentes longitudes de emisión y/o diferentes espectros de excitación, con preferencia con diferentes longitudes de emisión y la misma longitud de excitación, para la detección del analito. 40. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 3839, caracterizado porque se emplean dos o más marcas luminiscentes con diferentes velocidades de decaimiento de la emisión para la detección del analito. 22   41. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 3940, caracterizado porque para la detección de diferentes analitos en una muestra inmovilizada se utilizan dos o más marcas luminiscentes. 42. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 3941, caracterizado porque para la detección de diferentes analitos en un área de medición se utilizan dos o más marcas luminiscentes. 43. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 3742, caracterizado porque la iluminación con luz de excitación se lleva a cabo en pulsos de entre 1 fseg y 10 minutos, y la luz de emisión de las áreas de medición se mide de manera resuelta en el tiempo. 44. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 3643, caracterizado porque la plataforma sensora de campo evanescente que actúa como soporte sólido comprende una guía de onda óptica, que comprende una o más capas. 45. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 44, caracterizado porque la plataforma sensora de campo evanescente que actúa como soporte sólido comprende una guía de onda óptica plana que es continua o dividida en áreas de guía de onda diferenciadas y comprende una o más capas. 46. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 45, caracterizado porque la plataforma sensora de campo evanescente que actúa como soporte sólido comprende una quía de onda óptica de película fina plana que tiene una capa conductora de la onda esencialmente ópticamente transparente sobre una segunda capa también esencialmente ópticamente transparente con un índice de refracción inferior que la capa y opcionalmente también una capa intermedia esencialmente ópticamente transparente entre la capa conductora de la onda y la segunda capa, también con un índice de refracción inferior que la capa conductora de la onda. 47. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 146, caracterizado porque la luz de excitación de una o más fuentes de luz se acopla en una capa conductora de la onda de la plataforma sensora de campo evanescente por medio de uno o más elementos de acoplamiento óptico seleccionados del grupo formado por acopladores de prismas, acopladores evanescentes con guías de onda óptica unidas con campos evanescentes superpuestos, acopladores de superficies frontales con lentes de enfoque, con preferencia lentes cilíndricas, dispuestas antes de una cara frontal de dicha capa conductora de la onda, y acopladores de rejilla. 48. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 47, caracterizado porque el acoplamiento de la luz de excitación se realiza en una capa conductora de la onda de la plataforma sensora de campo evanescente con la ayuda de una o más estructuras de rejilla para acoplamiento que están estampadas en dicha capa conductora de la onda. 49. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 148, caracterizado porque el desacoplamiento de la luz guiada en una capa conductora de la onda de la plataforma sensora de campo evanescente se realiza con la ayuda de una o más estructuras de rejilla para desacoplamiento que están estampadas en dicha capa conductora de la onda y que tienen período y profundidad de rejilla idéntico o diferente con respecto a las estructuras de rejilla para el acoplamiento. 50. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 4849, caracterizado porque la luz de excitación de una más fuentes de luz se acopla por medio de una estructura de rejilla para acoplar la luz de excitación en una capa conductora de la onda de dicha plataforma sensora de campo evanescente y es guiada como onda guiada a las áreas de medición de la plataforma sensora de campo evanescente, además la luminiscencia de la moléculas capaces de producir luminiscencia que se genera en el campo evanescente de dicha onda guiada se registra con resolución local con uno o más detectores y se determina la concentración relativa de uno o más analitos a partir de dichas señales de luminiscencia. 51. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 3750, caracterizado porque además de la determinación de una o más luminiscencias se determinan los cambios en el índice de refracción efectivo en las áreas de medición. 52. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 3351, caracterizado porque la una o más luminiscencias y/o determinaciones de las señales luminosas en la longitud de excitación se llevan a cabo con selectiva polarización. 53. Procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 4752, caracterizado porque la una o más luminiscencias se miden con una polarización diferente de la de la luz de excitación. 54. Plataforma analítica para analizar una multiplicidad de muestras en lo relativo a los compuestos contenidos en las muestras como analitos, que son biológicamente relevantes como participantes en las reacciones de bioafinidad, que comprende una plataforma sensora de campo evanescente que actúa como soporte sólido, 23   al menos una matriz de una o dos dimensiones de las áreas de medición diferenciadas con asociados de unión inmovilizados allí en dicha plataforma sensora de campo evanescente para detectar dichos analitos en una reacción de bioafinidad, caracterizada porque dichas áreas de medición diferenciadas se generaron por la aplicación de dichas muestras o fracciones de dichas muestras en forma directa o después de diluciones adicionales de dichas muestras o de sus fracciones, con los analitos detectados allí, como una primera multiplicidad de asociados de unión específicos, diferentes muestras o fracciones o diferentes diluciones de dichas muestras o de sus fracciones se disponen en diferentes áreas de medición diferenciadas, y dicho uno o más asociados de unión inmovilizados, que forman dicha primera multiplicidad de asociados de unión específicos, son los uno o más analitos mismos que están contenidos en las muestras a analizar. 55. Plataforma analítica de acuerdo con la reivindicación 54, caracterizada porque una o más muestras o fracciones de una muestra se diluyen en al menos un factor 10 antes de la aplicación en la plataforma sensora de campo evanescente que actúa como soporte sólido, y diferentes diluciones de una fracción se aplicaron en diferentes áreas de medición diferenciadas en dicha plataforma sensora de campo evanescente. 56. Plataforma analítica de acuerdo con la reivindicación 54, caracterizada porque una o más muestras o fracciones de una muestra se diluyen en al menos un factor 30 antes de la aplicación en la plataforma sensora de campo evanescente que actúa como soporte sólido, y diferentes diluciones de una fracción se aplicaron en diferentes áreas de medición diferenciadas en dicha plataforma sensora de campo evanescente. 57. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5456, caracterizada porque las muestras se seleccionan del grupo de extractos de células sanas o enfermas, extractos de tejido animal humano o de tejido de planta, y de fluidos corporales o sus componentes. 58. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5456, caracterizada porque las muestras muestras se seleccionan del grupo que comprende extractos de células estimuladas o no tratadas y extractos de tejido sano o enfermo. 59. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5458, caracterizada porque las muestras para analizar se extrajeron de un organismo o una estructura tisular celular o célula por medio de un procedimiento del grupos de cortes de tejido, biopsia o microdisección por captura láser. 60. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5459, caracterizada porque una muestra inmovilizada comprende el material de menos de 20000 células. 61. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5460, caracterizada porque una muestra inmovilizada comprende el material de menos de 1000 células. 62. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5461, caracterizada porque los analitos presentes en una muestra inmovilizada están en forma nativa o desnaturalizada. 63. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5461, caracterizada porque los analitos contenidos en las muestras inmovilizadas están en forma desnaturalizada después del tratamiento con urea, estando los epítopos de dichos analitos libremente accesibles para la unión a sus correspondientes sustancias de detección. 64. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5463, caracterizada porque diferentes muestras aplicadas se extrajeron del mismo organismo o el mismo cultivo celular. 65. Plataforma analítica de acuerdo con la reivindicación 64, caracterizada porque diferentes muestras aplicadas se extrajeron de varias posiciones del mismo organismo. 66. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5463, caracterizada porque diferentes muestras aplicadas se extrajeron de distintos organismos o cultivos celulares. 67. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5466, caracterizada porque la plataforma sensora de campo evanescente comprende una capa adhesiva a la que se aplican dichas muestras a fracciones de muestras o diluciones de estas fracciones, a fin de mejorar la capacidad adhesiva de las muestras inmovilizadas aplicadas en las áreas de medición diferenciadas. 68. Plataforma analítica de acuerdo con la reivindicación 67, caracterizada porque dicha capa adhesiva tiene un grosor de menos de 200 nm, con preferencia menos de 20 nm. 24   69. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 6768, caracterizada porque dicha capa adhesiva comprende compuestos del grupo de silanos, silanos funcionalizados, epóxidos, polímeros cargados o polares, funcionalizados y mono o multicapas pasivas o funcionalizadas autoorganizadas, tioles, fosfatos de alquilo y fosfonatos de alquilo, copolímeros de bloque multifuncionales. 70. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 6768, caracterizada porque dicha capa adhesiva comprende compuestos del grupo de ácidos organofosfóricos de la fórmula general I(A) YBOPO3H2 (IA) o de ácidos organofosfónicos de la fórmula general I(B) YBPO3H2 (IB), y sus sales, en las que B significa un resto alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, hetarilo o hetarilalquilo, e Y hidrógeno o un grupo funcional de la serie de hidroxi, carboxi, amino, mono o dialquilamino opcionalmente sustituido con alquilo inferior, tiol o un grupo ácido negativo de la serie de éster, fosfato, fosfonato, sulfato, sulfonato, maleimida, succinimidilo, epoxi o acrilato. 71. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5470, caracterizada porque una o más muestras inmovilizadas se mezclan con una solución de polímeros o monómeros polimerizables, eventualmente en presencia de iniciadores o de reticulantes químicos, antes de su aplicación a la plataforma sensora de campo evanescente que actúa como soporte sólido. 72. Plataforma analítica de acuerdo con la reivindicación 71, caracterizado porque dicha solución de polímeros o monómeros polimerizables o reticulantes químicos, se selecciona del grupo que comprende soluciones de polisacáridos. 73. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 7172, caracterizada porque la mezcla de las una o más muestras inmovilizadas con una solución de polímeros o monómeros polimerizables, opcionalmente en presencia de iniciadores o de reticulantes químicos, produce la inmovilización de una estructura de red tridimensional con componentes de muestra allí incorporados que son accesibles a las sustancias de detección en la etapa posterior de una reacción de bioafinidad, sobre la plataforma sensora de campo evanescente que actúa como soporte sólido. 74. Plataforma analítica de acuerdo con la reivindicaciones 5473, caracterizada porque una matriz comprende más de 50, con preferencia más de 500, particularmente con preferencia más de 5000, áreas de medición. 75. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5474, caracterizada porque las áreas de medición de una matriz se disponen en una densidad de más de 10, con preferencia de más de 100, particularmente con preferencia de más de 1000, áreas de medición por centímetro cuadrado. 76. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5475, caracterizada porque una multiplicidad de matrices de áreas de medición estén dispuestas sobre la plataforma sensora de campo evanescente que actúa como soporte sólido. 77. Plataforma analítica de acuerdo con la reivindicación 76, caracterizada porque al menos 5, con preferencia al menos 50, matrices de áreas de medición estén dispuestas sobre la plataforma sensora de campo evanescente que actúa como soporte sólido. 78. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5477, caracterizada porque están aplicadas áreas entre las áreas de medición diferenciadas entre las áreas de medición separadas espacialmente respecto de los analitos y otros ingredientes de las muestras inmovilizadas aplicadas, así como respecto de componentes que no se unen con las sustancias de detección para dichos analitos. 79. Plataforma analítica de acuerdo con la reivindicación 78, caracterizada porque estos componentes que no se unen se seleccionan de los grupos formados por albúminas, en particular albúmina sérica bovina o albúmina sérica humana, caseína, anticuerpos policlonales o monoclonales, inespecíficos, de especies extrañas o anticuerpos empíricamente inespecíficos para los analitos a detectar, detergentes, ADN natural o sintético fragmentado que no hibride con los polinucleótidos a analizar, o también polímeros no cargados pero hidrófilos. 80. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5479, caracterizada porque los analitos a detectar y contenidos en las muestras inmovilizadas aplicadas en las áreas de medición diferenciadas son compuestos del grupo formado por proteínas y ácidos nucleicos. 81. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5479, caracterizada porque los analitos a detectar y contenidos en las muestras inmovilizadas aplicadas en las áreas de medición diferenciadas son compuestos del grupo formado por proteínas citosólicas o celulares unidas a membrana, en particular proteínas involucradas en los procesos de transducción de señales en las células.   82. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5481, caracterizada porque la plataforma sensora de campo evanescente comprende una capa fina de metal, eventualemente sobre una capa intermedia dispuesta debajo de esta y que tiene un índice de refracción de con preferencia < 1,5, como por ejemplo dióxido de silicio o fluoruro de magnesio en el que el grosor de dicha capa de metal y de la eventual capa intermedia se selecciona de manera que un plasmón superficial se pueda excitar a la longitud de onda de una luz de excitación incidente y/o a la longitud de onda de una luminiscencia generada. 83. Plataforma analítica de acuerdo con la reivindicación 82, caracterizada porque el metal se selecciona del grupo que comprende oro y plata. 84. Plataforma analítica de acuerdo con la reivindicación 82, caracterizada porque la capa de metal tiene un grosor de entre 10 nm y 1000 nm, con preferencia entre 30 nm y 200 nm. 85. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5484, caracterizada porque la plataforma sensora de campo evanescente que actúa como soporte sólido comprende una guía de onda óptica que comprende una o más capas. 86. Plataforma analítica de acuerdo con la reivindicación 85, caracterizada porque la plataforma sensora de campo evanescente que actúa como soporte sólido comprende una guía de onda óptica plana que es continua o dividida en áreas conductoras de la onda diferenciadas y comprende una o más capas. 87. Plataforma analítica de acuerdo con la reivindicación 86, caracterizada porque la plataforma sensora de campo evanescente que actúa como soporte sólido comprende una quía de onda óptica de película fina plana que tiene una capa conductora de la onda esencialmente ópticamente transparente sobre una segunda capa también esencialmente ópticamente transparente (b) con un índice de refracción inferior que la capa conductora de la onda y eventualmente también una capa intermedia esencialmente ópticamente transparente entre la capa conductora de la onda y la segunda capa, también con un índice de refracción inferior que la capa conductora de la onda. 88. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5487, caracterizada porque una capa conductora de la onda de la plataforma sensora de campo evanescente está en contacto óptico con uno o más elementos de acoplamiento óptico que permiten que la luz de excitación de una o más fuentes luminosas se acoplen en dicha capa conductora de la onda, estando seleccionados dichos elementos de acoplamiento óptico del grupo de acopladores de prismas, acopladores evanescentes con guías de onda óptica unidas con campos evanescentes superpuestos, acopladores de superficies frontales con lentes de enfoque, con preferencia lentes cilíndricas, dispuestas antes de una cara frontal de dicha capa conductora de la onda de la plataforma sensora de campo evanescente, y acopladores de rejilla. 89. Plataforma analítica de acuerdo con la reivindicación 88, caracterizada porque una o más estructuras de rejilla que permiten que la luz de excitación de una o más fuentes luminosas se acoplen están diseñadas en una capa conductora de la onda de la plataforma sensora de campo evanescente para el acoplamiento. 90. Plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5488, caracterizada con un período y están estampadas en una capa conductora de la onda de la plataforma sensora de campo evanescente y una o varias estructuras de rejilla para el desacoplamiento con el mismo o distinto periodo de rejilla y profundidad de rejilla que las estructuras de rejilla por el acoplamiento que permiten que se acople la luz guiada en dicha capa conductora de la onda. 91. Uso de un procedimiento de acuerdo con una de las reivindicaciones 153 o de una plataforma analítica de acuerdo con una de las reivindicaciones 5490 para el análisis cuantitativo y/o cualitativo para determinar analitos químicos, bioquímicos o biológicos en procedimientos de rastreo en investigación farmacológica, química combinatoria, desarrollo clínico y preclínico, para estudios de unión en tiempo real y para determinar parámetros cinéticos en el análisis de afinidad y en investigación, para determinaciones cualitativas y cuantitativas, y para detectar anticuerpos, antígenos, patógenos o bacterias en la investigación y desarrollo de productos farmacéuticos, diagnóstico humano y veterinario, investigación y desarrollo de productos agroquímicos, diagnóstico de plantas sintomático y presintomático, para estratificación de pacientes en el desarrollo de productos farmacéuticos y para la selección de medicamentos terapéuticos, para la detección de patógenos, sustancias nocivas y agentes causantes en análisis de productos alimenticios y análisis ambiental. 26   27   28   29     31