Una composición de vacuna adecuada para su administración a un huésped vertebrado,

incluido el ser humano, que comprende:

(a) un componente de vacuna de polinucleótido que comprende al menos un polinucleótido que codifica al menos un antígeno, de forma que la introducción de dicha formulación en dicho huésped vertebrado da como resultado la expresión de una cantidad biológicamente eficaz de dicho antígeno o antígenos para inducir una respuesta inmunitaria profiláctica o terapéutica;

(b) un componente de vacuna de antígeno proteico que comprende al menos un antígeno proteico seleccionado del grupo de antígenos proteicos modelo y antígenos proteicos de vacuna; y

(c) un adyuvante cargado negativamente, de base mineral, además caracterizada porque dicho adyuvante cargado negativamente de base mineral se preincuba o se mezcla con dicho al menos un componente de vacuna de antígeno proteico antes de la formulación con dicho componente de vacuna de polinucleótido.

Composiciones de vacuna combinadas de ADN/proteína Campo de la invención La presente invención se refiere a composiciones de vacuna combinadas de ADN/proteína novedosas que comprenden al menos un antígeno codificado por una molécula de ácido nucleico y al menos un antígeno proteico adyuvados con un adyuvante de base mineral para potenciar la inmunogenicidad de ambos en una única formulación de vacuna.

Antecedentes de la invención

La vacunación con ADN es una importante estrategia de inmunización novedosa para cebar específicamente respuestas inmunitarias humorales y celulares (S. Gurunathan y col., Annu Rev. Immunol. (2000) 18:927-74) . Con las vacunas de ADN basadas en la inyección de nucleótidos solos, se requieren 50-100 μg de nucleótido para producir una respuesta inmunitaria potente contra el antígeno codificado por el ADN. No se sabe en qué proporción se transcribe en realidad el ADN a proteínas y no está claro a qué cantidad de proteína subsiguiente da lugar. No obstante, se ha demostrado que no se detectan o prácticamente no se detectan respuestas inmunitarias detectables cuando se inyectan < 10 μg de ADN plasmídico en ratones.

Actualmente, las vacunas de ADN no están aún en el mercado. Las limitaciones que impiden la introducción de la vacunación con ADN en la práctica clínica incluyen la ausencia evidente de técnicas que pueden administrar dosis bajas de una vacuna de ADN en una forma suficientemente inmunogénica a una amplia variedad de animales y al ser humano. Resultará evidente que el desarrollo de técnicas que podrían conducir a la producción de una respuesta inmunitaria potente después la administración de dosis significativamente más bajas de nucleótidos de ADN atraería el interés tanto científico como económico entre los fabricantes de vacunas.

En publicaciones recientes se han propuesto diversos adyuvantes para potenciar la inmunogenicidad de las vacunas de ADN. Por ejemplo, las referencias interrelacionadas WO 00/02591, WO 98/35562 y S. Wang y col., Vaccine 18:1227-1235 (2000) divulgan formulaciones de vacuna que comprenden moléculas de ácido nucleico y un adyuvante a base de fosfato de aluminio o a base de fosfato de calcio proporcionado en una concentración biológicamente eficaz para mejorar la inducción de una respuesta inmunitaria subsiguiente a la vacunación. Se ha demostrado que las formulaciones con adyuvantes a base de fosfato de calcio o de aluminio antes de la inyección facilitan la administración de vacunas de ADN, ya que las valoraciones de anticuerpos se incrementan de 10 a 100 veces y la dosis inmunogénica de ADN se reduce 10 veces. Aunque el mecanismo mediante el cual el fosfato de aluminio o el hidroxifosfato de aluminio ejerce este efecto adyuvante no está claro, los adyuvantes tienen un extenso historial de uso en la vacunación práctica.

El documento WO 99/51269 divulga una vacuna de ADN que contiene un ADN desnudo que incorpora y expresa in vivo una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido antigénico y al menos un compuesto adyuvante seleccionado de la clase de polímeros (met) acrílicos y copolímeros de anhídrido maleico y derivados de alquenilo, preferentemente un carbómero o un EMA®.

El documento WO 02/03961 divulga un sistema de administración de ácido nucleico que comprende moléculas de ácido nucleico encapsuladas en microesferas biodegradables, adecuado para administrar vacunas de ADN, que comprende un adyuvante para modular la eficacia inmunoestimuladora, comprendiendo dicho adyuvante un aminoalquil glucosaminido-4-fosfato (AGP) .

El documento WO99/30733 divulga un procedimiento para potenciar una respuesta inmunitaria basada en una combinación de polinucleótido y polipéptido. Las composiciones farmacéuticas que comprenden ADN + polipéptido pueden contener un hidróxido de aluminio (Al (OH) 3) preparado especialmente. El antígeno proteico se adsorbió en hidróxido de aluminio (ejemplo 8) y, posteriormente, se coacervó con policaprolactona para crear una forma compleja con liberación lenta del antígeno desde el Al (OH) 3 tratado especialmente. Este complejo se mezcló después con el ADN en la proporción de 2 μg de proteína y 10 μg de ADN antes de su uso. No se investigaron más enfoques para la adyuvación de la combinación de péptido-nucleótido usando otros adyuvantes de base mineral.

El documento WO 97/28818 divulga vacunaciones y vacunas que comprenden un ácido nucleico que codifica un primer epítopo y un péptido que codifica un segundo epítopo, en particular la transfección in vitro de CPA (células presentadoras de antígeno) con antígeno codificado por ADN (y no tejido muscular, que es el tejido diana habitual para la inmunización con ADN) , y se demostró la presencia simultánea de antígeno peptídico, así como de antígeno codificado por ADN y transcrito en APC. Se analizaron varios sistemas de administración y vectores y se especuló (pág. 42) sobre el posible uso de una amplia variedad de adyuvantes, pero no se proporcionó ningún dato experimental para el uso de ningún adyuvante.

El documento WO00/68259 revela el uso de seroalbúmina bovina como un antígeno proteico modelo, pero no se refiere a una composición de vacuna que comprende un componente de vacuna de polinucleótido y un componente de vacuna de antígeno proteico.

El documento WO93/24148 se refiere a vacunas combinadas que comprenden el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg) y otros antígenos, en las que el HBsAg se adsorbe a fosfato de aluminio o hidróxido de aluminio. Sin embargo, el documento WO93/24148 no se refiere a una composición de vacuna que comprende un componente de vacuna de polinucleótido y un componente de vacuna de antígeno proteico.

Las vacunas convencionales permiten la combinación de antígenos diferentes, pero sólo dentro del grupo de componentes de vacuna adyuvadas o dentro del grupo de organismos pertinentes a vacunas vivas atenuadas no adyuvadas. El grupo anterior, que está adyuvado principalmente por sales minerales, da lugar a una respuesta de Th2 que es protectora frente a las enfermedades mencionadas, mientras que una adyuvación similar podría tener un efecto inhibidor sobre la respuesta inmunitaria necesaria para la protección contra los componentes de la vacuna viva atenuada (E.B. Lindblad y col., Infect. Immun. 65 (2) :623-629 (1997) ) . Actualmente, esta dicotomía limita las posibilidades de preparar vacunas de combinación en la que estén representadas, respectivamente, las enfermedades de los dos grupos. Las enfermedades cubiertas por las vacunas vivas atenuadas requieren a menudo una respuesta inmunitaria de tipo Th1, ya que la protección contra estas enfermedades no depende sólo de una respuesta de anticuerpos.

Todavía existe la necesidad de investigar más para mejorar la inmunogenicidad de las vacunas de ADN. Cabe destacar a este respecto que, por lo que saben los inventores, la posibilidad de combinar vacunas de ADN a base de nucleótidos con vacunas convencionales a base de proteínas o proteínas adsorbidas para establecer una combinación eficaz de estas dos tecnologías no se ha explorado hasta el momento, especialmente no en relación con el uso de adyuvantes de base mineral cargados negativamente.

La tecnología de vacunas de ADN tiene el potencial de inducir la respuesta de tipo Th1 necesaria para la protección contra esas enfermedades que actualmente se evitan mediante el grupo de vacunas vivas atenuadas. La presente invención proporciona una combinación de al menos una vacuna de ADN con una o más vacunas estimuladoras de Th2 adyuvadas de forma clásica, superando de este modo tales limitaciones de preparar un programa extenso de vacunas de combinación.

Sumario de la invención

La presente invención proporciona una composición de vacuna combinada de ADN/antígeno proteico adecuada para su administración a un huésped vertebrado, incluido el ser humano, que comprende:

(a) un componente de vacuna de polinucleótido que comprende al menos un polinucleótido que codifica al menos un antígeno, de forma que la introducción de dicha formulación en dicho huésped vertebrado da como resultado la expresión de una cantidad biológicamente eficaz de dicho antígeno o antígenos para inducir una respuesta inmunitaria profiláctica o terapéutica;

(b) un componente de vacuna de antígeno proteico que comprende al menos un antígeno proteico seleccionado del grupo de antígenos proteicos modelo y antígenos proteicos de vacuna; y

(c) un adyuvante de base mineral cargado negativamente, que se caracteriza... [Seguir leyendo]

1. Una composición de vacuna adecuada para su administración a un huésped vertebrado, incluido el ser humano, que comprende:

(a) un componente de vacuna de polinucleótido que comprende al menos un polinucleótido que codifica al menos un antígeno, de forma que la introducción de dicha formulación en dicho huésped vertebrado da como resultado la expresión de una cantidad biológicamente eficaz de dicho antígeno o antígenos para inducir una respuesta inmunitaria profiláctica o terapéutica;

(b) un componente de vacuna de antígeno proteico que comprende al menos un antígeno proteico seleccionado del grupo de antígenos proteicos modelo y antígenos proteicos de vacuna; y

(c) un adyuvante cargado negativamente, de base mineral,

además caracterizada porque dicho adyuvante cargado negativamente de base mineral se preincuba o se mezcla con dicho al menos un componente de vacuna de antígeno proteico antes de la formulación con dicho componente de vacuna de polinucleótido.

2. Una composición de vacuna según la reivindicación 1, en la que dicho adyuvante cargado negativamente de base mineral es una sal de aluminio o una sal de calcio.

3. Una composición de vacuna según la reivindicación 2, en la que dicha sal de aluminio o calcio se selecciona del grupo que consiste en fosfato de aluminio, hidroxifosfato de aluminio, hidróxido de aluminio tratado con fosfato, fosfato de calcio, hidroxifosfato de calcio e hidróxido de calcio tratado con fosfato.

4. Una composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que dicho grupo de antígenos proteicos modelo varía desde proteínas con punto isoeléctrico (PIE) ácido hasta proteínas con PIE alcalino.

5. Una composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que dicho grupo de antígenos proteicos de vacuna incluye una proteína de superficie o una proteína del núcleo del VHB, una toxina destoxificada de la bacteria Clostridium tetani, el toxoide tetánico, una toxina destoxificada de la bacteria Clostridium botulinus, el toxoide botulínico, y una toxina destoxificada de la bacteria Cor y nebacterium diphtheriae, el toxoide de la difteria.

6. Una composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que dicho grupo de antígenos proteicos de vacuna incluye antígenos proteicos derivados del poliovirus inactivado.

7. Un kit que comprende una composición de vacuna como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1-6 en una forma de dosificación unitaria para su administración a un receptor vertebrado, incluido el ser humano.

8. Procedimiento para preparar una composición de vacuna según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que un adyuvante cargado negativamente con base mineral se preincuba o se mezcla con al menos un componente de vacuna de antígeno proteico antes de la formulación con un componente de vacuna de polinucleótido.

FIG. 1