Métodos para determinar variantes de secuencias usando secuenciación ultraprofunda.
(27/05/2013) Un método para la detección de variantes de secuencia que tienen una frecuencia de menos de 5% en una población de ácidos nucleicos, comprendiendo el método las etapas de:
(a) amplificar un segmento de polinucleótido común a dicha población de ácido nucleico con un par de cebadores de ácidos nucleicos para PCR que definen un locus para producir una primera población de amplicones comprendiendo cada amplicón dicho segmento de polinucleótido;
(b) liberar la primera población de amplicones en microrreactores acuosos en una emulsión de agua-en-aceite de manera que una pluralidad de los microrreactores acuosos comprende un único amplicón de la primera población de amplicones, una única perla, y disolución de reacción de amplificación que contiene los reactivos necesarios para realizar la amplificación de ácido nucleico;
(c)…
Método de amplificación y secuenciamiento de ácidos nucleicos.
(26/09/2012) Un método para secuenciar ácidos nucleicos que comprende:
(a) fragmentar moléculas de ácido nucleico plantilla grandes para generar una pluralidad de ácidos nucleicosfragmentados;
(b) suministrar una población de los ácidos nucleicos fragmentados de cadena sencilla a un sistema (array) de almenos 10.000 cámaras de reacción sobre una superficie plana, en donde una pluralidad de los pocillos nocomprende más de una partícula y un único ácido nucleico fragmentado de cadena sencilla;
(c) amplificar los ácidos nucleicos fragmentados de cadena sencilla en las cámaras de reacción, en donde unapluralidad de copias amplificadas de los ácidos nucleicos fragmentados de cadena sencilla son inmovilizadossobre partículas; y
(d) llevar a cabo una reacción de secuenciamiento simultáneamente en una pluralidad de las…
Amplificación de ácidos nucleicos en emulsión en perlas.
(21/05/2012) Un metodo para enriquecer un amplicón, que comprende:
(a) distribuir una solución que comprende una pluralidad de perlas y una pluralidad de especies de moleculas de acido nucleico de molde, en una pluralidad de gotitas de emulsión acuosa en una fase oleosa termoestable;
en el que un primer subconjunto de las gotitas comprenden una o mas de las perlas y una o mas de las especies de acido nucleico de molde encapsuladas en ellas, y un segundo subconjunto de las gotitas comprenden una o mas de las perlas sin ninguna de las especies de moleculas de acido nucleico de molde encapsuladas en ellas;
(b) amplificar las…
SECUENCIACION DESDE DOS EXTREMOS.
(12/07/2010) Método de secuenciación de una molécula de ácido nucleico, que comprende las etapas de:
(a) hibridar dos o más cebadores de secuenciación con una o una pluralidad de cadenas individuales de la molécula de ácido nucleico, en la que todos los cebadores excepto uno son cebadores reversiblemente bloqueados,
(b) incorporar por lo menos una base en la molécula de ácido nucleico mediante elongación de polimerasa a partir de un cebador no bloqueado,
(c) bloquear la elongación adicional de dicho cebador no bloqueado,
(d) desbloquear uno de los cebadores reversiblemente bloqueados, formando un cebador desbloqueado,
(e) repetir las etapas (b) a (d) hasta que por…
AMPLIFICACION DE ACIDOS NUCLEICOS MEDIANTE EMULSION DE PERLAS.
(11/05/2010) Método para la amplificación de uno o más ácidos nucleicos sobre una perla, que comprende las etapas siguientes:
(a) formar una emulsión de agua en aceite para crear una pluralidad de microrreactores acuosos, en la que por lo menos uno de los microrreactores comprende un ácido nucleico molde monocatenario, una única perla con una primera población que comprende una pluralidad de moléculas de una primera especie de cebador dispuesta sobre la misma, y una solución de reacción de amplificación que comprende una segunda población que comprende una pluralidad de moléculas de la primera especie de cebador, una pluralidad de moléculas de una segunda especie de cebador, y reactivos necesarios para llevar a cabo la amplificación de ácidos nucleicos, en donde la primera especie de cebador es capaz de unirse al ácido nucleico molde monocatenario, la segunda especie…
PROCEDIMIENTOS PARA AMPLIFICAR Y SECUENCIAR ACIDOS NUCLEICOS.
(09/12/2009) Método para la secuenciación de ácidos nucleicos, que comprende:
(a) fragmentar moléculas grandes de ácido nucleico de molde para generar una pluralidad de ácidos nucleicos fragmentados;
(b) administrar los ácidos nucleicos fragmentados en microrreactores acuosos en una emulsión de agua en aceite de manera que una pluralidad de microrreactores acuosos comprende una única copia de un ácido nucleico fragmentado, una única perla capaz de unirse al ácido nucleico fragmentado, y solución de reacción de amplificación que contiene los reactivos necesarios para llevar a cabo la amplificación del ácido nucleico;
(c) amplificar los ácidos nucleicos fragmentados en los microrreactores, formando copias amplificadas de dichos ácidos nucleicos y la unión de las copias amplificadas a las perlas en los microrreactores;
(d) administrar…