Método para producir proteínas en Pichia pastoris que carecen de actividad de unión cruzada detectable a anticuerpos frente a antígenos de célula hospedadora.
Sección de la CIP Química y metalurgia
(06/07/2016). Solicitante/s: MERCK SHARP & DOHME CORP. Clasificación: C07K14/00, C12P21/06.
Un método para producir una glicoproteína recombinante en Pichia pastoris que carece de actividad de unión cruzada detectable con anticuerpos preparados frente a antígenos de célula hospedadora, que comprende:
(a) proporcionar una célula hospedadora recombinante de Pichia pastoris que no presente ninguna actividad de ß-manosiltransferasa 1, 2, 3 y 4 con respecto a un N-glicano u O-glicano, en donde los genes de ß- manosiltransferasa 1, 2 y 3 han experimentado deleción o interrupción, incluyendo la célula hospedadora una molécula de ácido nucleico que codifica la glicoproteína recombinante
(b) cultivar la célula hospedadora en un medio en condiciones eficaces para expresar la glicoproteína recombinante; y
(c) recuperar la glicoproteína recombinante del medio para producir la glicoproteína recombinante que carece de actividad de unión cruzada detectable con anticuerpos preparados frente a antígenos de célula hospedadora.
PDF original: ES-2589655_T3.pdf
Producción de glucoproteínas con O-glucosilación reducida.
(25/02/2015) Un método para producir una proteína que tiene glucosilación O-ligada reducida, que comprende:
(a) proporcionar un ácido nucleico que codifica una glucoproteína y un segundo ácido nucleico que codifica una a1,2-manosidasa;
(b) introducir el ácido nucleico y el segundo ácido nucleico en una célula hospedadora y cultivar la célula hospedadora que contiene el ácido nucleico y el segundo ácido nucleico para producir un cultivo de la célula hospedadora;
(c) poner en contacto el cultivo de la célula hospedadora con uno o más inhibidores de la glucosilación O-ligada mediada por Dol-P-Man:Proteína (Ser/Thr) Manosil Transferasa (Pmt); y
(d) aislar la glucoproteína…
Métodos para eliminar la manosilfosforilación de glucanos en la producción de glucoproteínas.
(12/11/2014) Un hospedador fúngico que comprende una disrupción, una deleción o una mutación combinadas de los genes MNN4B y PNO1 en donde el hospedador fúngico es Pichia pastoris y es capaz de producir menos del 1 % de glucoproteínas manosilfosforiladas de los N-glucanos totales en donde el gen de MNN4B en el que hay que provocar una disrupción, suprimir o mutar codifica un ARN mensajero que se corresponde con un ADNc que comprende o consiste en una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste en
(a) SEC ID Nº: 3;
(b) una secuencia de ácido nucleico que es una variante degradada de SEC ID Nº: 3;
(c) una secuencia de ácido nucleico al menos 50 %, al menos 60 %, al menos 65 %, al menos 70 %, al menos 75 %, al menos 80 %, al menos…
Producción de glucoproteínas modificadas con múltiples estructuras antenarias.
(05/09/2013) Una célula huésped de hongo unicelular o multicelular que es capaz de producir glucoproteínas que comprenden una estructura nuclear de N-glucano triantenario, en la que las células huésped son genomanipuladas para que produzcan glucoproteínas que tienen un N-glucano GlcNAc2Man3GlcNAc2 y en la que las células huésped además incluyen un ácido nucleico que codifica el dominio catalítico de la N-acetilglucosaminiltransferasa IV exógena GnT IVB (Δ104-53) humana fusionado con los nucleótidos 1-108 del gen MNN2 de S. cerevisiae que actúa como péptido de señalización de direccionamiento celular no asociado normalmente con el dominio catalítico, que dirige dicho dominio catalítico al RE o al aparato de Golgi de la célula huésped.
Expresión de N-acetilglucosaminiltransferasa III en eucariotas inferiores.
(21/08/2013) Un procedimiento para fabricar una glucoproteína recombinante en una célula huésped de levadura u hongo unicelular o multicelular filamentoso de eucariota inferior modificada para producir una glucoproteína que tiene una estructura central de Man3GlcNAc2 o de Man5GlcNAc2, que comprende la etapa de introducir en la célula un ácido nucleico que codifica una actividad de N-acetilglucosaminiltransferasa III, en el que dicha actividad es de una enzima que comprende el dominio catalítico de N-acetilglucosaminiltransferasa III GnTIII Δ32 de ratón o GnTIII Δ86 de ratón fusionado con un péptido de dirección MNN2 de Saccharomyces cerevisiae.
Biblioteca de ADN combinatoria para producir N-glucanos modificados en eucariotas inferiores.
(29/07/2013) Una célula huésped de un hongo unicelular o filamentoso que no presenta actividad α1,6 manosiltransferasa conrespecto al N-glucano en una glucoproteína, comprendiendo dicha célula huésped un ácido nucleico que codificauna proteína de fusión que comprende el dominio catalítico de una α-1,2-manosidasa fusionada en el extremo N-terminal con un péptido señal de dirección celular SEC12, VAN1 o MNN10 para la producción de una estructura decarbohidrato de Man5GlcNAc2, en donde Man5GlcNAc2 se produce como un sustrato productivo para GnTI in vivodentro de la célula huésped a un rendimiento de al menos el 30 por ciento en moles.
Biblioteca de ADN combinatoria para producir N-glucanos modificados en eucariotas inferiores.
(15/01/2013) Un procedimiento para producir una glucoproteína de tipo humano en una célula huésped que es un hongo unicelular o filamentoso que no presenta actividad α1, 6 manosiltransferasa con respecto al N-glucano en una glucoproteína, comprendiendo el procedimiento la etapa de introducir en la célula huésped un ácido nucleico que codifica una proteína de fusión que comprende el dominio catalítico de una α-1, 2-manosidasa fusionada en el extremo N-terminal con un péptido señal de dirección celular SEC12, VAN1, o MNN10 para la producción de una estructura de carbohidrato de Man5GlcNAc2, en el que Man5GlcNAc2 se produce como un sustrato productivo para GnTI in vivo dentro de la célula huésped a un rendimiento de al menos 30 por ciento en moles.
Producción de glicoproteínas modificadas que tienen estructuras multiantenarias.
(16/07/2012) Una célula huésped de hongo unicelular o pluricelular que es capaz de producir glicoproteínas que comprendenuna estructura central de N-glicano triantenaria, en la que la célula huésped se modifica por ingeniería genética paraproducir glicoproteínas que tienen un N-glicano GlcNAc2Man3GlcNAc2 y en el que la célula huésped incluye ademásuna molécula de ácido nucleico que codifica el dominio catalítico de la N-acetilglucosaminiltransferasa V (GnT V) deratón (Δ145) fusionado a los aminoácidos 1-36 del péptido señal de dirección celular de MNN2 de S. cerevisiae, quedirige el dominio catalítico al RE o al aparato de Golgi de la célula huésped.
EXPRESION DE N-ACETILGLUCOSAMINIL TRANSFERASA III EN EUCARIOTAS INFERIORES.
(25/03/2010) Un procedimiento para fabricar una glucoproteína recombinante en una célula huésped de levadura u hongo unicelular o multicelular filamentoso de eucariota inferior modificada para producir una glucoproteína que tiene una estructura central de Man3GlcNAc2 o de Man5GlcNAc2, que comprende la etapa de introducir en la célula un ácido nucleico que codifica una actividad de N-acetilglucosaminiltransferasa III, en el que dicha actividad es de una enzima que comprende el dominio catalítico de N-acetilglucosaminiltransferasa III GnTIII ?32 de ratón o GnTIII ?86 de ratón fusionado con un péptido de dirección MNN2 de Saccharomyces cerevisiae