Procedimientos de multiplexación cíclica de muestras y obtención de imágenes in situ.
Un procedimiento para obtención de imágenes in situ de muestras mediante multiplexación cíclica que comprende las etapas de:
(i) proporcionar una muestra inmovilizada en un soporte de muestra;
(ii) proporcionar un dispositivo microfluídico que comprende una cámara microfluídica, al menos una entrada de fluido en un extremo de dicha cámara microfluídica y al menos una salida de fluido en otro extremo de dicha cámara microfluídica configurada para conducir un fluido suministrado desde un sistema de alimentación de fluido a presión a través de la cámara microfluídica para el transporte advectivo de sustancias fluídicas y reactivos dentro de dicha cámara microfluídica de manera uniforme, en el que al menos una pared de la cámara microfluídica está formada por el soporte de muestra y en el que el volumen de la cámara microfluídica es de 2,5 μl y 200 μl;
(iii) montar dicho soporte de muestra sobre dicha cámara microfluídica con la muestra orientada al interior de la cámara microfluídica
(iv) inyectar en secuencia una pluralidad de reactivos, incluyendo al menos una sonda de obtención de imágenes, a través de la entrada de fluido en la cámara microfluídica, a un caudal en un intervalo entre 1 μl/s y 100 μl/s;
(v) obtener imágenes de una señal emitida por componentes de la muestra que reaccionó con dicha al menos una sonda de obtención de imágenes;
(vi) repetir las etapas (iv) y (v) con diferentes sondas de obtención de imágenes;
en el que dicha inyección en secuencia de una pluralidad de reactivos incluye:
- una etapa de elución en la que se inyecta un tampón de elución para eliminar material no deseable que permanece potencialmente en la muestra; (S1)
- una etapa de bloqueo de enlace no específico en la que se inyecta un tampón de bloqueo; (S2)
- una etapa de marcado de muestra en la que se inyecta una sonda de obtención de imágenes; (S3) y - una etapa de preobteción de imágenes opcional en la que se inyecta un tampón de obtención de imágenes, en la que cada una de estas etapas puede ir precedida y/o seguida de una etapa de lavado opcional en la que se inyecta un tampón de lavado, (S4)
en el que dicha al menos una sonda de obtención de imágenes resulta de la inyección de una secuencia de anticuerpos específicos como sondas de marcado y moléculas de detección crocromógenas o fluorescentes, dirigidas a las entidades moleculares que han de ser analizadas dentro de dicha muestra.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/EP2017/052662.
Solicitante: Lunaphore Technologies SA.
Inventor/es: GIJS, MARTIN, CIFTLIK,ATA TUNA, DUPOUY,DIEGO GABRIEL, JORIS,PIERRE.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- G01N33/543 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › con un soporte insoluble para la inmovilización de compuestos inmunoquímicos.
PDF original: ES-2799705_T3.pdf
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