Métodos para controlar el flujo en rutas metabólicas mediante la reubicación de enzimas.

Un método para producir un producto de una ruta biosintética de interés,

el cual comprende:

(a) células bacterianas en crecimiento que expresan enzimas de una ruta biosintética de interés para la producción de un producto, en donde al menos una de las enzimas:

(i) es una enzima que controla el flujo metabólico en la ruta biosintética y

(ii) es una enzima que se modifica genéticamente para contener una secuencia peptídica de orientación periplásmica y se reubica en el periplasma de la célula;

produciendo así células bacterianas que contienen al menos una enzima modificada que es secuestrada en el espacio periplásmico, en donde la modificación genética y el secuestro periplásmico no tienen efecto negativo sobre el crecimiento de las células bacterianas;

(b) lisar las células bacterianas, produciendo así un lisado celular que contiene las enzimas de la ruta biosintética y la al menos una enzima secuestrada con periplasma genéticamente modificada; y

(c) combinar el lisado celular con una o más sustancias seleccionadas de sustratos, enzimas, nutrientes, cofactores, tampones, agentes reductores y sistemas generadores de ATP;

(d) incubar el lisado celular durante un período de tiempo en condiciones suficientes para producir enzimáticamente dicho producto,

en el que el producto se selecciona del grupo que consiste en antibióticos; biosurfactantes; combustibles biológicos, aminoácidos, ácidos orgánicos, ácidos grasos, alcoholes, polioles, sabores, fragancias, nucleótidos, vitaminas, pigmentos, azúcares, polisacáridos, biopolímeros, plásticos, isoprenoides, terpenos y metabolitos celulares.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2011/035639.

Solicitante: Greenlight Biosciences, Inc.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 200 Boston Avenue, Suite 3100 Medford, MA 02155 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: SWARTZ, JAMES R..

Fecha de Publicación: 4 de Julio de 2019.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12N1/00 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo.
C12N1/06 C12N […] › C12N 1/00 Microorganismos, p.ej. protozoos; Composiciones que los contienen (preparaciones de uso médico que contienen material de protozoos, bacterias o virus A61K 35/66, de algas A61K 36/02, de hongos A61K 36/06; preparación de composiciones de uso médico que contienen antígenos o anticuerpos bacterianos, p. ej. vacunas bacterianas, A61K 39/00 ); Procesos de cultivo o conservación de microorganismos, o de composiciones que los contienen; Procesos de preparación o aislamiento de una composición que contiene un microorganismo; Sus medios de cultivo. › Lisis de microorganismos.
C12N15/52 C12N […] › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Genes que codifican enzimas o proenzimas.

PDF original: ES-2718844_T3.pdf

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