Procedimiento para identificación y enumeración de cambios en la secuencia de ácido nucleico, expresión, copia o metilación de ADN, usando reacciones combinadas de nucleasa, ligasa, polimerasa y secuenciación.
Un procedimiento para amplificar moléculas de ácido nucleico, en el que dicho procedimiento comprende:
proporcionar una colección de diferentes construcciones circulares quiméricas de ácido nucleico monocatenario, en la que cada construcción comprende:
un primer segmento monocatenario de ADN genómico original de un organismo huésped y
un segundo segmento de ácido nucleico sintético monocatenario que está unido al primer segmento monocatenario y comprende una secuencia de nucleótidos que es exógena al organismo huésped, en el que dicha secuencia de nucleótidos comprende una porción de identificador único, en la que la secuencia de nucleótidos de la porción de identificador único y del segmento del ADN genómico original distingue una construcción quimérica de ácido nucleico monocatenario de la colección de cualquier otra construcción quimérica de ácido nucleico monocatenario de la colección, en el que dichas construcciones quiméricas de ácido nucleico monocatenario de la colección están circularizadas y son adecuadas para amplificación por círculo rodante y/o secuenciación;
mezclar la colección de diferentes construcciones circulares quiméricas de ácido nucleico monocatenario con una polimerasa y una pluralidad de cebadores cortos que tienen una longitud de 6 a 10 nucleótidos y comprenden bases aleatorias y/o análogos de nucleótidos, en el que uno o más de los cebadores cortos son complementarios a una porción de una o más construcciones circulares quiméricas de ácido nucleico monocatenario de la colección; con lo que dicho mezclado forma una mezcla de reacción de amplificación;
y
someter la mezcla de reacción de amplificación a uno o más tratamientos de hibridación y extensión, en los que el uno o más cebadores cortos hibridan con las construcciones circulares quiméricas de ácido nucleico monocatenario y la polimerasa extiende los cebadores cortos hibridados para producir una pluralidad de productos de extensión, en el que cada producto de extensión comprende dos o más secuencias lineales en tándem, en el que cada secuencia lineal en tándem es complementaria a una construcción quimérica de ácido nucleico monocatenario de la colección.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2015/034724.
Solicitante: CORNELL UNIVERSITY .
Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.
Dirección: 395 Pine Tree Road, Suite 310 Ithaca, NY 14850 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.
Inventor/es: BARANY,FRANCIS, EFCAVITCH,JOHN WILLIAM.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C12Q1/68 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS, ÁCIDOS NUCLEICOS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas, ácidos nucleicos o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.
PDF original: ES-2748457_T3.pdf
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