Amplificación de ácidos nucleicos.

Un método para amplificar una plantilla de ácido nucleico que comprende:



(A) la transcripción inversa de un ARN monocatenario para producir un ácido nucleico bicatenario lineal que comprende dos hebras complementarias independientes:

(B) la formación de una hebra circular que comprende un primer adaptador polinucleotídico y un segundo adaptador polinucleotídico y las dos hebras complementarias, en donde cada adaptador comprende una sola hebra de ácido nucleico que contiene una secuencia de nucleótidos de una hebra de una secuencia de reconocimiento de enzima de restricción;

(C) la hibridación de la hebra circular de la etapa (B) con un primer cebador polinucleotídico y la síntesis de un producto de extensión del primer cebador;

(D) la hibridación del producto de extensión de primer cebador de la etapa (C) con un segundo cebador polinucleotídico y la síntesis de un producto de extensión del segundo cebador, en donde el producto de extensión del segundo cebador es complementario al producto de extensión del primer cebador;

(E) la producción de un nuevo ácido nucleico bicatenario que comprende al menos una porción del producto de extensión del primer cebador y al menos una porción del producto de extensión del segundo cebador y una secuencia de reconocimiento bicatenaria completa de enzima de restricción que corresponde a la secuencia de la una hebra de la secuencia de reconocimiento de enzima de restricción de la etapa (B);

(F) la escisión del nuevo ácido nucleico bicatenario de la etapa (E) con una enzima de restricción; y

(G) la formación de dos o más ácidos nucleicos bicatenarios más pequeños, al menos dos de los cuales comprenden al menos una porción de una copia del ácido nucleico bicatenario lineal de la etapa (A), con lo que se amplifica el ácido nucleico bicatenario lineal;

en donde las etapas (A) a (G) se realizan en una mezcla de reacción en condiciones isotérmicas, y en donde la mezcla de reacción comprende:

(i) el ARN monocatenario;

(ii) una transcriptasa inversa;

(iii) el primer adaptador polinucleotídico y el segundo adaptador polinucleotídico;

(iv) el primer cebador polinucleotídico y el segundo cebador polinucleotídico;

(v) una ligasa;

(vi) una polimerasa; y

(vii) la enzima de restricción.

Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/US2014/030028.

Solicitante: Theranos IP Company, LLC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 7333 Gateway Boulevard Newark, CA 94560 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: PATEL,PRANAV.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2738602_T3.pdf

 

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