Preparaciones de ARN que comprenden ARN modificado purificado para reprogramar células.

Un procedimiento de reprogramación de una célula somática humana o de otro mamífero que reside in vitro y que presenta un primer estado o fenotipo diferenciado en una célula madre pluripotente inducida (iPSC),

que comprende:

a) introducir en dicha célula que presenta un primer estado o fenotipo diferenciado una preparación de ARN purificado que comprende moléculas de ARNm modificadas sintetizadas in vitro que

- codifica una pluralidad de 4 o más, 5 o más o 6 factores de inducción de iPSC seleccionados del grupo que consiste en OCT4, SOX2, KLF4, MYC, NANOG y LIN28,

- comprende, al menos, un nucleósido modificado seleccionado del grupo que consiste en 1- metilpseudouridina (m1Ψ) en lugar de, al menos, una porción del nucleósido uridina no modificado homólogo, pseudouridina que no está adicionalmente modificada (Ψ) en lugar de, al menos, una porción del nucleósido uridina no modificado homólogo, 5-metiluridina (m5U) en lugar de, al menos, una porción del nucleósido uridina no modificado homólogo, 5-metoxiuridina (mo5U) en lugar de, al menos, una porción del nucleósido uridina no modificado homólogo, 2-tiouridina (s2U) en lugar de, al menos, una porción del nucleósido uridina no modificado homólogo y 5-metilcitidina (m5C) en lugar de, al menos, una porción del nucleósido uridina no modificado homólogo, y

- presenta una caperuza 5' y una cola de poli(A) 3';

en el que dichas moléculas de ARNm modificadas que componen dicha preparación de ARN purificado se purifican utilizando un procedimiento que elimina: moléculas contaminantes de ARN que son inmunogénicas y tóxicas para la célula por inducción de una respuesta inmunitaria innata, como puede detectarse midiendo la disminución de la secreción de citoquinas IFN-α o TNF-α a partir de células dendríticas transfectadas con dichas moléculas de ARNm modificadas purificadas en comparación con la secreción de dichas citoquinas a partir de células dendríticas transfectadas con las moléculas de ARNm modificadas no purificadas;

de tal forma que dicha preparación de ARN purificado está libre de moléculas contaminantes de ARN que, si están presentes, activarían una respuesta inmunitaria en dicha célula, suficiente para evitar la supervivencia de dicha célula y la generación de una célula reprogramada; y

b) repetir dicha introducción de dicha preparación de ARN purificado en múltiples días y cultivar la célula, en el que la célula se reprograma en una iPSC.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E16181434.

Solicitante: THE TRUSTEES OF THE UNIVERSITY OF PENNSYLVANIA.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 3160 Chestnut Street, Suite 200 Philadelphia, PA 19104-6283 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: JENDRISAK,JEROME, DAHL,GARY, MEIS,JUDITH, PERSON,ANTHONY, KARIKÓ,KATALIN, WEISSMAN,DREW.

Fecha de Publicación: 4 de Enero de 2017.

Clasificación Internacional de Patentes:

C12N15/113 QUIMICA; METALURGIA. › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Acidos nucleicos no codificantes que modulan la expresión de genes, p.ej. oligonucleótidos antisentido.
C12N5/02 C12N […] › C12N 5/00 Células no diferenciadas humanas, animales o vegetales, p. ej. líneas celulares; Tejidos; Su cultivo o conservación; Medios de cultivo para este fin (reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00). › Propagación de células individuales o de células en suspensión; Su conservación; Medios de cultivo para este fin.
C12N5/071 C12N 5/00 […] › Células o tejidos de vertebrados, p.ej. células o tejidos humanos.

PDF original: ES-2665681_T3.pdf

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