Métodos para seleccionar y amplificar polinucleótidos.

Un procedimiento de selección y amplificación de polinucleótidos en un soporte sólido,

que comprende:

a) proporcionar una pluralidad de oligonucleótidos de amplificación inmovilizados en un soporte sólido;

b) hibridar una población de sondas oligonucleotídicas con un subconjunto de dichos oligonucleótidos de amplificación, comprendiendo cada una de dichas sondas oligonucleotídicas una primera porción que es complementaria a los oligonucleótidos de amplificación y una segunda porción que comprende la secuencia de una región seleccionada de un polinucleótido plantilla;

c) realizar una reacción de extensión para extender los oligonucleótidos de amplificación hibridados para producir una población de oligonucleótidos de captura unidos al soporte, comprendiendo cada oligonucleótido de captura en dicha población una secuencia que es complementaria a una región seleccionada de un polinucleótido plantilla, proporcionando de esta manera un soporte sólido que comprende la población de oligonucleótidos de captura unidos al soporte y una población de oligonucleótidos de amplificación no extendidos;

d) aplicar una población de polinucleótidos plantilla al soporte sólido en condiciones tales que los polinucleótidos plantilla hibridan selectivamente con los oligonucleótidos de captura unidos al soporte, en el que los polinucleótidos plantilla comprenden una secuencia adaptadora en el extremo 5', en el que la secuencia adaptadora es la misma que la secuencia de los oligonucleótidos de amplificación no extendidos;

e) extender los oligonucleótidos de captura unidos al soporte que se hibridan con los polinucleótidos plantilla, generando de ese modo productos de extensión, teniendo los productos de extensión una porción complementaria con los polinucleótidos molde y una porción complementaria a los oligonucleótidos de amplificación no extendidos; y

f) amplificar los productos de extensión, en donde la amplificación comprende la hibridación de uno o más de los oligonucleótidos de amplificación no extendidos con uno o más de los productos de extensión, produciendo de esta manera un producto de amplificación en fase sólida.

Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E13180255.

Solicitante: ILLUMINA, INC.

Nacionalidad solicitante: Estados Unidos de América.

Dirección: 5200 Ilumina Way San Diego, CA 92122 ESTADOS UNIDOS DE AMERICA.

Inventor/es: RIGATTI,ROBERTO, SABOT,ANDREA, SHEN,MIN-JUI RICHARD.

Fecha de Publicación: .

Clasificación Internacional de Patentes:

  • C12Q1/68 SECCION C — QUIMICA; METALURGIA.C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA.C12Q PROCESOS DE MEDIDA, INVESTIGACION O ANALISIS EN LOS QUE INTERVIENEN ENZIMAS O MICROORGANISMOS (ensayos inmunológicos G01N 33/53 ); COMPOSICIONES O PAPELES REACTIVOS PARA ESTE FIN; PROCESOS PARA PREPARAR ESTAS COMPOSICIONES; PROCESOS DE CONTROL SENSIBLES A LAS CONDICIONES DEL MEDIO EN LOS PROCESOS MICROBIOLOGICOS O ENZIMOLOGICOS. › C12Q 1/00 Procesos de medida, investigación o análisis en los que intervienen enzimas o microorganismos (aparatos de medida, investigación o análisis con medios de medida o detección de las condiciones del medio, p. ej. contadores de colonias, C12M 1/34 ); Composiciones para este fin; Procesos para preparar estas composiciones. › en los que intervienen ácidos nucleicos.

PDF original: ES-2595055_T3.pdf

 

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