Toxina clostridial NetB.
Un polipéptido sustancialmente purificado y/o recombinante, en el que el polipéptido comprende:
i) una secuencia de aminoácidos como se proporciona en SEC ID Nº: 2,
ii) una secuencia de aminoácidos que es al menos 80 % idéntica a SEC ID Nº: 2, y/o
iii) un fragmento antigénico de i) o ii);
en el que i), ii) y iii) son capaces de inducir una respuesta inmunitaria contra la secuencia de aminoácidos como se proporciona en SEC ID Nº: 2.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/AU2008/000813.
Solicitante: Australian Poultry CRC Pty Ltd.
Nacionalidad solicitante: Australia.
Dirección: Building W21, Geography Road, University of New England Armidale, New South Wales 2351 AUSTRALIA.
Inventor/es: MOORE,ROBERT JOHN, ROOD,JULIAN IAN, KEYBURN,ANTHONY LESLIE.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- A61K38/16 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 38/00 Preparaciones medicinales que contienen péptidos (péptidos que contienen ciclos beta-lactama A61K 31/00; dipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina 2,5-dionas, A61K 31/00; péptidos basados en la ergolina A61K 31/48; que contienen compuestos macromoleculares que tienen unidades aminoácido repartidas estadísticamente A61K 31/74; preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos A61K 39/00; preparaciones medicinales caracterizadas por los ingredientes no activos, p. ej. péptidos como soportes de fármacos, A61K 47/00). › Péptidos que tienen más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados.
- A61K39/08 A61K […] › A61K 39/00 Preparaciones medicinales que contienen antígenos o anticuerpos (materiales para ensayos inmunológicos G01N 33/53). › Clostridium, p. ej. Clostridium tetani.
- A61K39/40 A61K 39/00 […] › bacterianos.
- C07K14/33 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › C07K 14/00 Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados. › de Clostridium (G).
- C07K16/12 C07K […] › C07K 16/00 Inmunoglobulinas, p. ej. anticuerpos mono o policlonales. › contra materiales bacterianos.
- C12N15/74 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › C12N 15/00 Técnicas de mutación o de ingeniería genética; ADN o ARN relacionado con la ingeniería genética, vectores, p. ej. plásmidos, o su aislamiento, su preparación o su purificación; Utilización de huéspedes para ello (mutantes o microorganismos modificados por ingeniería genética C12N 1/00, C12N 5/00, C12N 7/00; nuevas plantas en sí A01H; reproducción de plantas por técnicas de cultivo de tejidos A01H 4/00; nuevas razas animales en sí A01K 67/00; utilización de preparaciones medicinales que contienen material genético que es introducido en células del cuerpo humano para tratar enfermedades genéticas, terapia génica A61K 48/00; péptidos en general C07K). › Vectores o sistemas de expresión especialmente adaptados a huéspedes procariotas distintos a E. coli, p. ej. Lactobacillus, Micromonospora.
- C12R1/145 C12 […] › C12R SISTEMA DE INDEXACION ASOCIADO A LAS SUBCLASES C12C - C12Q, RELATIVO A LOS MICROORGANISMOS. › C12R 1/00 Microorganismos. › Clostridium.
PDF original: ES-2550685_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
En otra realización de la presente invención, el polipéptido es un toxoide.
En otra realización más, el polipéptido es una proteína de fusión que comprende al menos otra secuencia polipeptídica.
El al menos otro polipéptido puede ser, por ejemplo, un polipéptido que potencia la estabilidad de un polipéptido de la presente invención, o un polipéptido que ayuda en la purificación de la proteína de fusión, o un polipéptido que 5 potencia las propiedades inmunológicas del polipéptido de la presente invención.
En otra realización más, el polipéptido de la invención es un polipéptido sintético.
La presente invención proporciona además un polinucleótido aislado y/o recombinante que comprende:
i) una secuencia de nucleótidos como se proporciona en SEC ID Nº: 1, ii) una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido de la invención, y/o 10
iii) una secuencia de nucleótidos que es al menos 80% idéntica a SEC ID Nº: 1, en el que el polinucleótido codifica un polipéptido que es capaz de inducir una respuesta inmunitaria contra la secuencia de aminoácidos como se proporciona en SEC ID Nº: 2.
La presente invención proporciona además un vector que comprende el polinucleótido de la invención.
Preferentemente, el polinucleótido en el vector se une operativamente con un promotor. 15
En una realización, el vector es un vector viral o un vector plasmídico.
La presente invención proporciona además una célula hospedadora que comprende el polipéptido recombinante de la invención, el polinucleótido recombinante de la invención y/o el vector de la invención.
Las células hospedadoras de la presente invención pueden ser cualquier célula capaz de producir al menos un polipéptido de la presente invención, e incluyen células animales, vegetales, bacterianas, fúngicas (incluyendo 20 levadura) , parasitarias y de artrópodos.
Preferentemente, la célula hospedadora es una bacteria.
En una realización, la bacteria es E. coli. En una realización más preferida, la bacteria es E. coli seleccionada de CCEC22, CCEC31 y CCEC59.
La presente invención proporciona además un método para producir un polipéptido de acuerdo con la invención, 25 comprendiendo el método cultivar una célula hospedadora de acuerdo con la invención, o un vector de la invención que codifica dicho polipéptido, en condiciones que permitan la expresión del polinucleótido que codifica el polipéptido y aislar dicho polipéptido.
La presente invención proporciona además un anticuerpo sustancialmente purificado o fragmento del mismo, que se une específicamente con un polipéptido de la invención. 30
La presente invención proporciona además una composición que comprende el polipéptido de la invención, el polinucleótido de la invención, el vector de la invención, la célula hospedadora de la invención y/o el anticuerpo de la invención.
En una realización, la composición es una composición inmunogénica.
En una realización, la composición inmunogénica comprende además un adyuvante y/o vehículo farmacéuticamente 35 aceptable.
La presente invención proporciona además una vacuna que comprende un antígeno, en la que el antígeno comprende un polipéptido de acuerdo con la invención.
En una realización, la vacuna comprende un adyuvante y/o vehículo farmacéuticamente aceptable. En una realización, la vacuna comprende además uno o más antígenos adicionales. 40
La presente invención proporciona además una vacuna de ADN que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido de acuerdo con la invención, en el que tras la administración a un sujeto el polipéptido se expresa y se produce una respuesta inmunitaria al polipéptido.
Se desvela en la presente memoria una bacteria atenuada que produce un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 40% idéntica a SEC ID Nº: 2 y/o SEC ID Nº: 3, en la que la bacteria 45 produce una cantidad reducida del polipéptido en comparación con una bacteria de tipo silvestre y/o tiene actividad de toxina reducida en comparación con el polipéptido en una bacteria de tipo silvestre.
Se desvela en la presente memoria que en algunas situaciones la bacteria atenuada no expresa el polipéptido.
Se desvela en la presente memoria que en algunas situaciones la bacteria atenuada se ha modificado adicionalmente para expresar un polipéptido heterólogo. El polipéptido heterólogo puede ser, por ejemplo, un polipéptido biológicamente activo o un antígeno. Los ejemplos de polipéptidos biológicamente activos incluyen citocinas, factores de crecimiento y enzimas. El antígeno puede ser, por ejemplo, de un agente de enfermedad 5 bacteriano, fúngico, parasitario o viral.
Se desvela en la presente memoria que en algunas situaciones la bacteria atenuada pertenece al género Clostridium. Se desvela en la presente memoria que en algunas situaciones la bacteria es Clostridium perfringens.
La presente invención proporciona además un método para atenuar un método para atenuar la virulencia de una bacteria que expresa un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos al menos 80% idéntica a SEC ID 10 Nº: 2, comprendiendo el método mutar una secuencia polinucleotídica que codifica el polipéptido para reducir la expresión y/o actividad de toxina del polipéptido, por lo que la bacteria atenuada tiene actividad de toxina reducida en comparación con la bacteria no atenuada.
Se desvela en la presente memoria un método para inducir una respuesta inmunitaria en un sujeto, comprendiendo el método administrar al sujeto el polipéptido de la invención, el polinucleótido de la invención, el vector de la 15 invención, la composición de la invención, la vacuna de la invención, la célula hospedadora de la invención y/o la bacteria de la invención.
Se desvela en la presente memoria que en algunas situaciones la célula hospedadora o la bacteria está viva.
Se desvela en la presente memoria que en algunas situaciones el polipéptido, polinucleótido, composición, vector, célula hospedadora o bacteria se suministra en el huevo. 20
La presente invención proporciona además un método para determinar si un sujeto se ha expuesto a un patógeno que expresa un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 80% idéntica a SEC ID Nº: 2, en el que el método comprende determinar la presencia o ausencia del polipéptido en una muestra obtenida del sujeto, en el que la presencia del polipéptido es indicativa de exposición al patógeno.
La presente invención proporciona además un método para determinar si un sujeto se ha expuesto a un patógeno 25 que expresa un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 80% idéntica a SEC ID Nº: 2, en el que el método comprende determinar la presencia o ausencia de anticuerpos en la muestra que se unen específicamente con un polipéptido de acuerdo con la invención, en el que la presencia de los anticuerpos es indicativa de exposición al patógeno.
La presente invención proporciona además un método para determinar si un sujeto se ha expuesto a un patógeno 30 que expresa un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 80% idéntica a SEC ID Nº: 1, en el que el método comprende determinar la presencia o ausencia del polinucleótido en una muestra obtenida del sujeto, en el que la presencia del polinucleótido es indicativa de exposición al patógeno.
Puede usarse cualquier técnica adecuada para determinar la presencia o ausencia del polinucleótido. Por ejemplo, la presencia o ausencia del polinucleótido puede detectarse por hibridación, por ejemplo por transferencia de 35 Southern, o por amplificación del polinucleótido, por ejemplo por PCR.
En una realización el patógeno es del género Clostridium. En una realización preferida el patógeno es Clostridium perfringens.
En una realización de los métodos de la invención, el sujeto es aviar.
Preferentemente, el sujeto es un ave de corral. Por ejemplo, el sujeto puede ser un pollo, pavo, faisán, codorniz, 40 pato, avestruz u otra ave de corral criada habitualmente en cantidades comerciales.
En una realización más preferida, el sujeto es un pollo.
Se desvela en la presente memoria un método para explorar con respecto a un agonista o antagonista que modula la actividad de un polipéptido de la invención, comprendiendo el método poner en contacto el polipéptido de la invención con un compuesto candidato, y determinar si dicho compuesto aumenta o reduce la actividad de toxina del 45 polipéptido... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Un polipéptido sustancialmente purificado y/o recombinante, en el que el polipéptido comprende:
i) una secuencia de aminoácidos como se proporciona en SEC ID Nº: 2, ii) una secuencia de aminoácidos que es al menos 80 % idéntica a SEC ID Nº: 2, y/o
iii) un fragmento antigénico de i) o ii) ; 5
en el que i) , ii) y iii) son capaces de inducir una respuesta inmunitaria contra la secuencia de aminoácidos como se proporciona en SEC ID Nº: 2.
2. El polipéptido de la reivindicación 1, en el que el polipéptido tiene actividad de toxina, o el polipéptido tiene actividad de toxina reducida en comparación con un polipéptido codificado por SEC ID Nº: 2, o el polipéptido es un toxoide. 10
3. El polipéptido de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 95% idéntica a SEC ID Nº: 2 y/o un fragmento antigénico del mismo, en el que el polipéptido o fragmento antigénico del mismo es capaz de inducir una respuesta inmunitaria contra la secuencia de aminoácidos como se proporciona en SEC ID Nº: 2.
4. El polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el fragmento antigénico es 15 de al menos 10 aminoácidos de longitud.
5. El polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el fragmento antigénico es de al menos 20 aminoácidos de longitud.
6. El polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el fragmento antigénico es de al menos 60 aminoácidos de longitud. 20
7. El polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el fragmento antigénico es de al menos 100 aminoácidos de longitud.
8. Un polinucleótido aislado y/o recombinante que comprende:
i) una secuencia de nucleótidos como se proporciona en SEC ID Nº: 1, ii) una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las 25 reivindicaciones 1 a 7, y/o iii) una secuencia de nucleótidos que es al menos 80% idéntica a SEC ID Nº: 1, en el que el polinucleótido codifica un polipéptido que es capaz de inducir una respuesta inmunitaria contra la secuencia de aminoácidos como se proporciona en SEC ID Nº: 2.
9. Un vector que comprende el polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 8. 30
10. Una célula hospedadora que comprende el polipéptido recombinante de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, el polinucleótido recombinante de la reivindicación 8 y/o el vector de la reivindicación 9.
11. Un método para producir un polipéptido aislado de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, comprendiendo el método cultivar una célula hospedadora de acuerdo con la reivindicación 10, o un vector de la reivindicación 9 que codifica dicho polipéptido, en condiciones que permiten la expresión del polinucleótido que 35 codifica el polipéptido, y aislar dicho polipéptido.
12. Un anticuerpo sustancialmente purificado que se une específicamente con un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
13. Una composición que comprende el polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, el polinucleótido de la reivindicación 8, el vector de la reivindicación 9, la célula hospedadora de la reivindicación 10, 40 y/o el anticuerpo de la reivindicación 12.
14. Una vacuna que comprende un antígeno, en la que el antígeno comprende un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7.
15. Una vacuna de ADN que comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que tras la administración a un sujeto el polipéptido se expresa y se produce una 45 respuesta inmunitaria al polipéptido.
16. Un método para atenuar la virulencia de una bacteria que expresa un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos al menos 80% idéntica a SEC ID Nº: 2, comprendiendo el método mutar una secuencia polinucleotídica que codifica el polipéptido para reducir la expresión y/o actividad de toxina del polipéptido, por lo que la bacteria atenuada tiene actividad de toxina reducida en comparación con la bacteria no atenuada.
17. Un método para determinar si un sujeto se ha expuesto a un patógeno que expresa un polipéptido que 5 comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos 80% idéntica a SEC ID Nº: 2 y/o que expresa un polinucleótido que comprende una secuencia de nucleótidos que es al menos 80% idéntica a SEC ID Nº: 1, en el que el método comprende determinar la presencia o ausencia del polipéptido en una muestra obtenida del sujeto, determinar la presencia o ausencia de anticuerpos en la muestra que se unen específicamente con el polipéptido y/o determinar la presencia o ausencia del polinucleótido en una muestra obtenida del sujeto, en el que la presencia del 10 polipéptido, los anticuerpos y/o el polinucleótido es indicativa de exposición al patógeno.
18. Alimento y/o bebida que comprende el polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o el anticuerpo de acuerdo con la reivindicación 12.
19. Un organismo transgénico no humano que comprende un polinucleótido exógeno que codifica el polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7. 15
20. Uso del polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, el polinucleótido de la reivindicación 8, el vector de la reivindicación 9, la célula hospedadora de la reivindicación 10, la composición de la reivindicación 13, la vacuna de la reivindicación 14 o reivindicación 15, la bacteria producida por el método de la reivindicación 16 y/o el alimento y/o la bebida de la reivindicación 18 en la fabricación de un medicamento para inducir una respuesta inmunitaria en un sujeto. 20
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