Reactivo de medición inmunológica para su uso en la medición de KL-6.

Reactivo de inmunoensayo de KL-6 que comprende una disolución a de un pH de 4,

0 a un pH de 5,5 que contiene una inmunoglobulina derivada de animal que reacciona con factor reumatoide y una disolución que contiene un portador insoluble en el que se inmoviliza un anticuerpo anti-KL-6.

Reactivo de medición inmunológica para su uso en la medición de KL-6 Campo técnico

El campo técnico de esta invención se refiere a un reactivo de ensayo y a un ensayo para la medición de KL-6 en una muestra. Además, el campo técnico de la presente invención se refiere a una técnica de inmunoaglutinación, a reactivos y a métodos para inhibir reacciones no específicas en esta técnica.

Antecedentes de la técnica

KL-6 es un antígeno de hidrato de carbono sialilado que está implicado en fibrosis pulmonar (documento no de patente (DNP) 1, documento de patente (DP) 1). Los niveles de KL-6 se miden para el diagnóstico y la determinación de estrategias terapéuticas para neumonía intersticial dado que niveles de KL-6 elevados y su fluctuación en neumonía intersticial indican un estado patológico (DP 1). Se han dado a conocer un método de predicción de la aparición de neumonía intersticial provocada por la administración de interferón mediante la medición de niveles de MUC-1/KL-6 en suero (DP 2), un método de examen de pronóstico en pacientes con cáncer de pulmón mediante la medición de KL-6 (DP 3) y un método de detección de carcinoma mucinoso papilar intraductal o cáncer de páncreas mediante la medición de KL-6 en jugo pancreático (DP 4). En los últimos años, ha aumentado la necesidad de la medición de KL-6 para el diagnóstico y la determinación de estrategias terapéuticas para neumonía intersticial incluyendo neumonía intersticial inducida por fármacos, neumonía intersticial inducida por trastorno del colágeno, etc., diagnóstico de pacientes con cánceres de pulmón, de páncreas, etc., y diagnóstico y determinación de estrategias terapéuticas para neumonía intersticial en pacientes tratados con preparación de anticuerpos para artritis reumatoide, enfermedad de Crohn, artritis idiopática juvenil generalizada, enfermedad de Castleman, etc.

En los documentos de patente 1-4, se ha usado el ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (a continuación en el presente documento, método ELISA) para la medición de KL-6. Aunque ELISA es un método fiable, el ensayo de inmunoaglutinación de látex es superior para pruebas rápidas, fáciles y económicas de un gran número de muestras y se usa ampliamente como reactivo clínico para medir componentes traza.

Sin embargo, cuando una muestra que contiene el factor reumatoide se somete a prueba mediante un método de medición inmunológica tal como ELISA o inmunoaglutinación de látex, la aparición de una reacción no específica debida a interferencia a partir del factor reumatoide dependiente de la muestra es un problema conocido (DNP 2). Además, la aparición de una reacción no específica debida a interferencia a partir de anticuerpos heterófilos (anticuerpo anti-inmunoglobulina de ratón: HAMA, etc. y anticuerpo anti-inmunoglobulina de cabra: HAGA, etc.) es un problema conocido.

Se conoce que un método que elimina la parte de Fe del anticuerpo unido al látex, un método que usa un anticuerpo que se une al factor reumatoide (DP 5) y otros métodos similares inhiben la interferencia a partir del factor reumatoide en el ensayo de inmunoaglutinación de látex.

El DNP 3 da a conocer un ensayo de aglutinación de látex para anticuerpos humanos anti-lgM de Brucella\ el DNP 4 da a conocer un inmunoensayo de látex turbidimétrico para ferritina sérica; el DNP 5 da a conocer un inmunoensayo de látex de alfa-fetoproteína sérica usando pretratamiento con polietilenglicol.

Sin embargo, los presentes inventores han encontrado muestras en las que no se pudo inhibir adecuadamente la aparición de reacciones no específicas ni siquiera mediante los métodos mencionados anteriormente.

Bibliografía de la técnica anterior

Bibliografía de patentes

[Documento de patente 1] Solicitud examinada publicada japonesa n.° 1995-3127 [Documento de patente 2] Solicitud no examinada publicada japonesa n.° 25-121441 [Documento de patente 3] Publicación de patente japonesa n.° 483855 [Documento de patente 4] Solicitud no examinada publicada japonesa n.° 26-38576 [Documento de patente 5] Solicitud no examinada publicada japonesa n.° 1995-12818 Bibliografía no de patentes

[Documento no de patente 1] New serum indicator of ¡nterstitial pneumonitis activity. Sialylated carbohydrate antigen KL-6. Kohno N, Kyoizumi S, Awaya Y, Fukuhara H, Yamakido M, Akiyama M. Chest. julio de 1989; 96 (1): 68-73.

[Documento no de patente 2] Interference by rheumatoid factor with the detection of C-reactive protein by the látex agglutlnatlon method. Deyo RA, Pope RM, Persellln RH. J Rheumatol. mayo-junio de 198; 7 (3): 279-87.

[Documento no de patente 3] Látex agglutlnatlon assay for human anti-Brucella IgM antibodies; Cambiaso C. L. et al., Journal of Immunological Methods, septiembre de 1989; 122 (2): 169-175

[Documento no de patente 4] Turbidimetric látex immunoassay for serum ferritin. Bernard A. et al., Journal of Immunological Methods, julio de 1984; 71 (2): 141-147

[Documento no de patente 5] Látex immunoassay of serum alpha-fetoprotein using polyethylene glycol pretreatment. Passelecq B. etai, abril de 1988; 19(1): 69-74

Sumario de la invención

Problemas que van a resolverse mediante la Invención

La presente invención tiene como objetivo proporcionar un reactivo de ensayo y un ensayo para medir con precisión KL-6, en particular, un reactivo de ensayo y un ensayo para medir con precisión KL-6 en muestras que contienen el factor reumatoide y/u otras sustancias no específicas.

Medios para resolver el problema

La presente invención proporciona un reactivo de inmunoensayo de KL-6 que comprende una disolución a de un pH de 4, a un pH de 5,5 que contiene una inmunoglobulina derivada de animal que reacciona con factor reumatoide y una disolución que contiene un portador insoluble en el que se inmoviliza un anticuerpo anti-KL-6.

La presente invención también proporciona un método para inmunoensayo de KL-6 que comprende usar una muestra, una Inmunoglobulina derivada de animal que reacciona con factor reumatoide, y un portador insoluble en el que se inmoviliza un anticuerpo anti-KL-6 y medir el cambio en la absorbancia que acompaña a la aglutinación del portador insoluble debido a la reacción ¡nmunitaria entre KL-6 en la muestra y el anticuerpo anti-KL-6 inmovilizado en el portador insoluble en una disolución a de un pH de 4, a un pH de 5,5.

Estudios extensos de los presentes inventores indicaron que pueden medirse con precisión KL-6 en muestras que contienen el factor reumatoide y/u otras sustancias no específicas usando un reactivo de inmunoensayo que comprende una disolución a pH de 4, a 5,5 que contiene el inhibidor de interferencia del factor reumatoide y un portador insoluble en el que se inmovilizan anticuerpos anti-KL-6. Esto condujo a completar la presente invención. Más específicamente, esta invención tiene la siguiente configuración.

(1) Un reactivo de inmunoensayo de KL-6 que comprende una disolución (pH de 4, a 5,5) que contiene un inhibidor de interferencia del factor reumatoide y una disolución que contiene un portador insoluble en el que se inmoviliza un

anticuerpo anti-KL-6.

(2) El reactivo de inmunoensayo según el punto (1) anterior, en el que el portador insoluble es una partícula de látex.

(3) Un inmunoensayo de KL-6 que comprende medir el cambio en la absorbancia que acompaña a la aglutinación de un portador insoluble debido a la reacción ¡nmunitaria entre KL-6 en una muestra y un anticuerpo anti-KL-6 inmovilizado en el portador insoluble en una disolución a pH de 4, a 5,5, usando la muestra, un inhibidor de interferencia del factor reumatoide, y un portador insoluble en el que se inmoviliza un anticuerpo anti-KL-6.

(4) Un inmunoensayo de KL-6 en el que se añade una disolución a pH de 4, a 5,5 que contiene un inhibidor de interferencia del factor reumatoide y un portador insoluble en el que se inmoviliza un anticuerpo anti-KL-6 a una muestra y se mide el cambio en la absorbancia que acompaña a la aglutinación del portador insoluble debido a la reacción ¡nmunitaria entre KL-6 en la muestra y el anticuerpo anti-KL-6 inmovilizado en el portador insoluble.

(5) El inmunoensayo según el punto (3) o (4) anterior, en el que el portador insoluble es una partícula de látex.

No existen restricciones particulares en cuanto al inhibidor de interferencia del factor reumatoide usado en la presente invención siempre que inhiba la interferencia del factor reumatoide en el inmunoensayo, y pueden mencionarse como ejemplos HBR (Scantibodies Lab) e inmunoglobulinas derivadas de animal que reaccionan con factor reumatoide tales como IgM, IgG e IgA.

Tal como se describió anteriormente,... [Seguir leyendo]

1. Reactivo de inmunoensayo de KL-6 que comprende una disolución a de un pH de 4, a un pH de 5,5 que contiene una inmunoglobulina derivada de animal que reacciona con factor reumatoide y una disolución que

contiene un portador ¡nsoluble en el que se inmoviliza un anticuerpo anti-KL-6.

2. Reactivo de inmunoensayo según la reivindicación 1, en el que el portador insoluble es una partícula de látex.

3. Reactivo de inmunoensayo según la reivindicación 1 ó 2, en el que la Inmunoglobulina derivada de animal

que reacciona con factor reumatoide es una IgM, IgG o IgA.

4. Método para inmunoensayo de KL-6 que comprende usar una muestra, una inmunoglobulina derivada de animal que reacciona con factor reumatoide, y un portador insoluble en el que se inmoviliza un anticuerpo

anti-KL-6 y medir el cambio en la absorbancla que acompaña a la aglutinación del portador ¡nsoluble debido

a la reacción inmunitarla entre KL-6 en la muestra y el anticuerpo anti-KL-6 inmovilizado en el portador ¡nsoluble en una disolución a de un pH de 4, a un pH de 5,5.

5. Método para Inmunoensayo de KL-6 según la reivindicación 4, en el que la etapa de usar una muestra,

¡nmunoglobullnas derivadas de animal que reaccionan con factor reumatoide y un portador ¡nsoluble en el

que se inmoviliza un anticuerpo anti-KL-6 comprende añadir a la muestra una disolución a de un pH de 4, a un pH de 5,5 que contiene las ¡nmunoglobullnas derivadas de animal que reaccionan con factor reumatoide y una disolución del portador ¡nsoluble en el que se inmoviliza un anticuerpo anti-KL-6.

6. Método para el Inmunoensayo de KL-6 según la reivindicación 4 ó 5, en el que el portador ¡nsoluble es una

partícula de látex.

7. Método para el Inmunoensayo de KL-6 según una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, en el que la inmunoglobulina derivada de animal que reacciona con factor reumatoide es IgM, IgG o IgA.