Procedimientos para detectar anticuerpos contra un fármaco.

Procedimiento para inmunodetectar un anticuerpo contra un fármaco (ACF) en una muestra,

en donde el fármaco es un anticuerpo terapéutico dirigido contra un antígeno deseado, en donde el procedimiento comprende:

a) verificar la presencia del antígeno en la muestra;

b) si está presente, neutralizar el antígeno de la muestra; y

c) inmunodetectar la presencia o la cantidad de dicho ACF en dicha muestra.

Procedimientos para detectar anticuerpos contra un fármaco La presente invención hace referencia a los procedimientos para detectar anticuerpos contra un fármaco. La presente invención también hace referencia a los procedimientos para vigilar los pacientes que están sometidos a un 5 tratamiento con anticuerpos terapéuticos.

Antecedentes de la invención

Los anticuerpos terapéuticos se están utilizando cada vez más para el tratamiento de diferentes trastornos, tales como trastornos inmunitarios, trastornos inflamatorios, neoplasias malignas o enfermedades infecciosas. Estos anticuerpos terapéuticos son típicamente anticuerpos monoclonales procedentes de diferentes especies, o anticuerpos humanizados o quiméricos (véase, p. ej., Levene et al., 2005, J. Royal Soc. Med. 98, pág. 145-152) . Según la enfermedad, se han utilizado anticuerpos terapéuticos dirigidos contra los siguientes antígenos deseados de manera independiente: TNF, VEGF, HER2, CD20, receptor del IGF-I, EGFR o receptor de la IL-6, por ejemplo.

Los anticuerpos terapéuticos anti-TNF se utilizaron ampliamente para tratar a los pacientes con diferentes enfermedades inflamatorias o autoinmunitarias, entre ellas artritis reumatoide, esclerosis múltiple, enfermedad de 15 Crohn o espondilitis anquilosante. Los ejemplos de tales agentes anti-TNF incluyen etanercept, golimumab, certolizumab pegol, adalimumab o infliximab. El etanercept es una proteína de fusión dimérica que consiste en dos dominios extracelulares del receptor p75 de TNF de humano, unido al fragmento Fc de una inmunoglobulina humana de tipo 1 (IgG1) . El golimumab es un anticuerpo monoclonal anti-TNF de humano. El certolizumab pegol es un anticuerpo monoclonal, con más precisión un fragmento Fab' PEGilado de un anticuerpo monoclonal anti20 TNF humanizado. El adalimumab es un anticuerpo monoclonal anti-TNF humanizado y el infliximab es un anticuerpo monoclonal anti-TNF quimérico (Perdriger A, «Infliximab in the treatment of rheumatoid arthritis». Biologics: Targets & Therapy 2009: 3, 183-191) . Estos anticuerpos se fijan al TNF y bloquean su acción inflamatoria.

Otros ejemplos de los anticuerpos terapéuticos incluyen, sin limitación, un anticuerpo monoclonal anti-IL-6R tal y como se describe en la solicitud de patente internacional WO 2004/096274 y un anticuerpo anti-IGF-IR tal y como se describe, por ejemplo, en la solicitud de patente internacional WO 2005/005635.

Sin embargo, durante el tratamiento con anticuerpos terapéuticos se puede generar una respuesta inmunitaria contra el propio anticuerpo terapéutico y los pacientes a menudo desarrollan, durante el transcurso del tratamiento, anticuerpos contra el propio fármaco («anticuerpos contra un fármaco») . Como resultado, la proporción plasmática del anticuerpo terapéutico disminuye y, de manera simultánea o posterior, reaparecen o se incrementan los 30 síntomas de la enfermedad. Así pues, estos anticuerpos contra un fármaco («ACF») reducen o neutralizan totalmente el efecto de un anticuerpo terapéutico (véase, p. ej., Wolbink G. J. et al. «Development of anti-Infliximab antibodies and relationship to clinical response in patients with rheumatoid arthritis». Arthritis & Rheumatism, 2006, 54 (3) : 711-715; G. M. Bartelds et al. «High levels of human antibodies to adalimumab in a patient not responding to adalimumab treatment». Anna Rheum Dis 2006; 65: 1249-1250) . La detección de estos ACF en las muestras de un sujeto podrían representar, por lo tanto, un procedimiento para vigilar a los pacientes durante el transcurso del tratamiento.

Se han descrito en la técnica procedimientos para detectar los ACF, tales como, por ejemplo, en las solicitudes de patente internacional n.os WO 2008/137885, WO 2007/101661 o WO 2009/091240. Los procedimientos citados en estas solicitudes son procedimientos inmunológicos que utilizan anticuerpos de captura y de marcación. Se han 40 descrito otros procedimientos y recomendaciones relacionados con la detección de los ACF en Anthony R. Mire-Sluis et al., Journal of Immunological Methods, 333 (2008) 1-9, Eugen Koren et al., Journal of Immunological Methods, 289 (2004) 1-16) . Wolbink et al (Arthritis & Rheumatism 54 (2006) 711-715) también debaten sobre la importancia clínica de los anticuerpos contra el infliximab en los pacientes con artritis reumatoide. Ninguno de estos procedimientos se propone la evaluación simultánea de los ACF y del antígeno pertinente. Ninguno de estos 45 procedimientos reconoce la importancia de una detección combinada de diferentes parámetros.

Patton et al. (J. Immunol. Methods. 304 (2005) 189-195) hacen referencia a un procedimiento de ELISA para detectar anticuerpos contra proteínas.

La presente invención se refiere a procedimientos mejorados para la detección de los ACF y la vigilancia de los pacientes que están sometidos a tratamientos con anticuerpos terapéuticos.

Compendio de la invención La presente invención da a conocer procedimientos inmunológicos mejorados para detectar anticuerpos contra un fármaco. La presente invención también da a conocer procedimientos para vigilar a los pacientes que están sometidos a un tratamiento con anticuerpos terapéuticos. Se describen los kits idóneos para la aplicación de los procedimientos anteriores.

Más específicamente, un objeto de la presente invención se refiere a un procedimiento para inmunodetectar (la presencia o la cantidad de) anticuerpos contra un fármaco (ACF) en una muestra (in vitro) , en donde el fármaco es un anticuerpo terapéutico dirigido contra un antígeno desado, en donde el procedimiento comprende:

a) verificar la presencia del antígeno en la muestra;

b) si está presente, neutralizar el antígeno en la muestra; y c) inmunodetectar (la presencia o la cantidad de) dicho ACF en dicha muestra.

Los inventores han descubierto que la presencia del antígeno en la muestra dificulta sustancialmente la capacidad de detección del correspondiente ACF. Por consiguiente, no se puede obtener la detección fiable del ACF en una muestra si no se hace tal etapa de neutralización anterior.

Otro objeto descrito en la presente memoria es un procedimiento para inmunodetectar un anticuerpo contra un fármaco (ACF) en una muestra (in vitro) , en donde el fármaco es un anticuerpo terapéutico dirigido contra un antígeno deseado, en donde el procedimiento comprende:

a) tratar la muestra para neutralizar el antígeno que puede estar presente; y b) inmunodetectar la presencia o la cantidad de dicho ACF en dicha muestra.

La invención también se refiere a un procedimiento para detectar la capacidad de respuesta de un paciente a un tratamiento con anticuerpos terapéuticos, en donde el anticuerpo terapéutico está dirigido contra un antígeno deseado, en donde el procedimiento comprende determinar, en una muestra del paciente, la presencia o la cantidad de:

el anticuerpo terapéutico, el antígeno, y los anticuerpos contra un fármaco dirigidos contra dicho anticuerpo terapéutico;

para obtener un perfil del paciente, en donde el perfil del paciente indica la capacidad de respuesta a dicho tratamiento, y en donde los ACF se detectan según el procedimiento para inmunodetectar un ACF de la invención.

Preferiblemente, en el procedimiento anterior, si el antígeno está presente en la muestra, entonces se realiza otra etapa para determinar la presencia de dicho ACF después del tratamiento de la muestra para neutralizar el antígeno. Por consiguiente, en un aspecto preferido descrito en la presente memoria, el procedimiento para detectar la capacidad de respuesta de un paciente a un tratamiento con anticuerpo terapéutico, en donde el anticuerpo terapéutico está dirigido contra un antígeno deseado, comprende:

(a) determinar, en una muestra del paciente, la presencia o la cantidad de:

el anticuerpo terapéutico, el antígeno, y los anticuerpos contra un fármaco dirigidos contra dicho anticuerpo terapéutico;

(b) si el antígeno se detecta en la muestra de la etapa (a) , entonces tratar otra muestra del sujeto para neutralizar el antígeno y determinar de nuevo la presencia de dicho ACF en dicha muestra tratada, por lo que se obtiene un perfil del paciente, en donde el perfil del paciente indica la capacidad de respuesta a dicho tratamiento.

Dicho procedimiento se realiza preferiblemente en diferentes momentos de tiempo a lo largo del transcurso del tratamiento del paciente, de tal manera que se puede vigilar la capacidad de respuesta del paciente o la eficacia del tratamiento y, si es apropiado, se puede ajustar el tratamiento.

En otra realización, la invención también se refiere a un procedimiento para detectar la capacidad de respuesta... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento para inmunodetectar un anticuerpo contra un fármaco (ACF) en una muestra, en donde el fármaco es un anticuerpo terapéutico dirigido contra un antígeno deseado, en donde el procedimiento comprende: 5 a) verificar la presencia del antígeno en la muestra;

b) si está presente, neutralizar el antígeno de la muestra; y c) inmunodetectar la presencia o la cantidad de dicho ACF en dicha muestra.

2. Procedimiento para detectar la capacidad de respuesta de un paciente a un tratamiento con anticuerpo terapéutico, en donde el anticuerpo terapéutico está dirigido contra un antígeno deseado, en donde el procedimiento 10 comprende determinar, en una muestra del paciente, la presencia o la cantidad de: el anticuerpo terapéutico, el antígeno, y los anticuerpos contra un fármaco dirigidos contra dicho anticuerpo terapéutico;

para obtener un perfil del paciente, en donde el perfil del paciente indica la capacidad de respuesta a dicho 15 tratamiento, y en donde los ACF se detectan de acuerdo con el procedimiento de la reivindicación 1.

3. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 2, en donde dicha determinación se realiza mediante ELISA o inmunocaptura.

4. Procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde dicho antígeno es el TNF

y en donde el fármaco es preferiblemente un anticuerpo anti-TNF seleccionado de infliximab, etanercept, 20 adalimumab, golimumab y certolizumab pegol.

5. Procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, en donde el paciente tiene una enfermedad autoinmunitaria o inflamatoria.

6. Procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, que además comprende determinar,

en una muestra de dicho paciente, la presencia o la cantidad de proteína C reactiva (PCR) o la velocidad de 25 sedimentación globular (VSG) .

7. Procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6, para vigilar o ajustar el tratamiento del paciente.

8. Procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la muestra es una muestra de líquido corporal, preferiblemente una muestra de suero o plasma sanguíneo.

9. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 7 para vigilar a un paciente que está en tratamiento con anti-TNF, en donde el procedimiento comprende determinar, en una muestra del paciente, la presencia o la cantidad de: el anticuerpo terapéutico, el antígeno, y los anticuerpos contra un fármaco dirigidos contra dicho anticuerpo terapéutico;

para obtener un perfil del paciente, en donde el perfil del paciente indica si el paciente responde al tratamiento o no, lo que permite un ajuste del tratamiento.

10. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 9, en donde si la concentración de TNF está por debajo de 10 pg/ml, la concentración del anticuerpo terapéutico está por encima de 1 g/ml y la concentración del ACF está por debajo de 50 ng/ml, entonces el paciente es un paciente que responde y se debe continuar el tratamiento o incluso disminuirlo.

11. Procedimiento de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde se determina la presencia o la cantidad de TNF inactivo, en donde dicha presencia o cantidad es indicativa de la capacidad de respuesta del paciente al tratamiento.

12. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 11, en donde si la concentración de TNF inactivo es superior a 10 pg/ml, entonces el paciente no está respondiendo al tratamiento.

13. Procedimiento para detectar la capacidad de respuesta de un paciente a un tratamiento con un anticuerpo terapéutico, en donde el anticuerpo terapéutico está dirigido contra el TNF, en donde el procedimiento comprende

determinar, en una muestra del paciente, la presencia o la cantidad de TNF inactivo, en donde dicha presencia o cantidad es indicativa de que la capacidad de respuesta del paciente a dicho tratamiento es baja o está disminuyendo.