Polipéptido CRIg para la prevención y el tratamiento de trastornos asociados al complemento.

Un polipéptido CRIg, o una inmunoadhesina CRIg que comprende un polipéptido CRIg fusionado a una secuencia de inmunoglobulina,

para su uso en la prevención o el tratamiento de una afección ocular asociada al complemento, en donde el polipéptido CRIg o la inmunoadhesina CRIg son un inhibidor selectivo de la ruta alternativa del complemento.

Polipéptido CRIg para la prevención y el tratamiento de trastornos asociados al complemento.

Campo de la invención

La presente invención concierne a un receptor específico de macrófagos recientemente descubierto, CRIg (anteriormente denominado STIgMA), y a su uso en la prevención y/o el tratamiento de afecciones oculares asociadas al complemento, tales como la degeneración macular relacionada con la edad (DMRE) y la neovascularización coroidal (NVC).

Antecedentes de la invención

El sistema del complemento es una cascada compleja de enzimas constituido por una serie de glucoproteínas séricas que normalmente existen en forma de proenzima inactiva. Tres rutas principales, la ruta clásica y la ruta alternativa, que convergen al nivel de C3, pueden activar el complemento, donde dos convertasas de C3 similares escinden C3 en C3a y C3b. También se ha descrito una ruta adicional, la ruta de la lectina de unión a mañosa (LUM).

Los componentes de la ruta clásica se identifican con una C y un número (por ejemplo, C1, C3). Debido a la secuencia en la que estos se identificaron, los cuatro primeros componentes están numerados C1, C4, C2 y C3. Los componentes de la ruta alternativa se indican con letras (por ejemplo B, P, D). Los fragmentos de escisión se designan con una letra minúscula después de la designación del componente (por ejemplo, C3a y C3b son fragmentos de C3). El fragmento C3b inactivo se designa como iC3b. Las cadenas polipeptídicas de las proteínas del complemento se designan con una letra griega después del componente (por ejemplo, C3a y C3|3, las cadenas a y P de C3). Las abreviaturas de los receptores de la membrana celular de C3 son CR1, CR2, CR3 y CR4.

La ruta clásica del sistema del complemento es un efector principal de la rama humoral de la respuesta inmunitaria humana. El desencadenante activador de la ruta clásica y de la ruta LUM (lectina de unión a mañosa) es el anticuerpo de IgG o de IgM unido a antígenos o a lectinas en las células diana. La unión del anticuerpo al antígeno expone un sitio del anticuerpo que es un sitio de unión para el primer componente del complemento, C1. C1 se une a las regiones expuestas de al menos dos anticuerpos unidos a antígeno, y como resultado, se activan sus subunidades C1r y C1s. La subunidad C1s activada es responsable de la escisión de los dos siguientes componentes del complemento implicados, C4 y C2. C4 se escinde en dos fragmentos, de los cuales la molécula más grande de C4b, se une a la membrana diana cercana, mientras que la molécula pequeña de C4a se retira. Un sitio expuesto en C4b depositado está disponible para interaccionar con el siguiente componente del complemento, C2. Inmediatamente como en la etapa anterior, C1s activado escinde la molécula de C2 en dos partes, de las cuales permanece el fragmento C2a, mientras el fragmento más pequeño C2b, se retira. C4b2a, también conocida como convertasa C3, permanece unida a la membrana. Esta convertasa C3 convierte el siguiente componente del complemento, C3 en su forma activa.

La activación de la ruta alternativa del complemento comienza cuando C3b se une a la pared celular y a otros componentes celulares de los patógenos y/o a anticuerpos de IgG. Después, el factor B se combina con C3b unido a la célula y forma C3bB. C3bB se separa después en Bb y Ba mediante el factor B, para la formación de la convertasa de C3 de la ruta alternativa, C3bBb. La properdina, una proteína sérica, se une después a C3bBb y forma C3bBbP que actúa como una convertasa de C3, que separa enzimáticamente moléculas de C3 en C3a y C3b. En este punto, se activa la ruta alternativa del complemento. Parte de C3b se une a C3bBb para formar C3bBb3b, que es capaz de separar moléculas de C5 en C5a y C5b.

La ruta alternativa es una ruta de autoampllficación y es importante en la eliminación y el reconocimiento de bacterias y otros patógenos en ausencia de anticuerpos. La ruta alternativa también puede amplificar la activación del complemento después de la activación inicial del complemento mediante cualquiera de la ruta de la lectina y/o clásica. La etapa limitante de la velocidad de activación de la ruta alternativa en seres humanos es la acción enzimática del factor D en la escisión del factor B para formar la convertasa de C3 de la ruta alternativa, C3bBb. (Stahl etal., American Journal of Pathology 162: 449-455 (23)). Existen pruebas contundentes sobre el papel de la activación y deposición del complemento en la artritis Inducida por adyuvante (AIA), y en la artritis Inducida por colágeno (AIC) y en diversas otras enfermedades y afecciones.

Recientemente, el control defectuoso de la ruta alternativa se ha Implicado en el desarrollo de enfermedades renales y oculares, Incluyendo el síndrome urémico hemolítlco (SUH) y la DMRE (Zipfel et al., Mol. Immunol. 43: 97-16 (26), disponible en línea en www.sclencedlrect.com ). Se ha descubierto que C3 es esencial para el desarrollo de NVC en ratones (Bora etal., J. Immunol. 174(1): 491-7 (25)).

También es muy conocido el papel del sistema del complemento en afecciones Inflamatorias y daño asociado a tejidos, enfermedades inmunitarlas y enfermedades asociadas al complemento.

Se ha sugerido que la ruta alternativa juega un papel importante en la inflamación (Mollnes ef al., Trends in Immunology 23: 61-64 (22)), en el daño tisular local y remoto después de isquemia y reperfusión (Stahl ef al., anteriormente mencionado); síndrome de diestrés respiratorio del adulto (SDRA, Schein ef a/.; Chest 91: 85-854 (1987)); activación del complemento durante la cirugía de derivación cardlopulmonar (Fung ef al, J Thorac Cardlovasc Surg 122: 113-122 (21)); dermatomlosltls (Klssel, JT ef al, NEJM 314: 329-334 (1986)); y pénflgo (Honguchl ef al. J Invest Dermatol 92: 588-592 (1989)). La ruta alternativa del complemento también se ha Implicado en enfermedades autoinmunitarias, tales como, por ejemplo, nefritis lúpica y glomerulonefritis y vasculitis resultante (véase, por ejemplo, Watanabe ef al., J. Immunol. 164: 786-794 (2)); y artritis reumatoide, tal como artritis reumatoide juvenil (Aggarwal ef al., Rheumatology 29: 189-192 (2); y Neumann E. ef al, Arthrltls Rheum. 4: 934- 45 (22)).

El aumento local de la deposición y activación del complemento se correlaciona con la gravedad de la enfermedad (Atkinson, J Clin Invest 112: 1639-1641 (23)). Se han sometido a ensayo antagonistas del receptor de C5a, tales como péptidos y moléculas orgánicas pequeñas, para el tratamiento de la artritis (Woodruf ef al., Arthritis & Rheumatism 46(9): 2476-2485 (22)), y diversas otras enfermedades ¡nmunoinflamatorias (Short ef al., Br J Pharmacol 126: 551-554 (1999); Finch ef al., J Med Chem 42: 1965-174 (1999)); y compañías, tales como Promics (Australia), han llevado a cabo ensayos clínicos en seres humanos para ensayar la eficacia de antagonistas de C5a en indicaciones similares. C5a también está implicado en dermatomiositis y pénfigo (Kissel, JT ef al, NEJM 314:329- 334 (1986)). Se ha mostrado que los anticuerpos monoclonales anti-C5a que reducen la disfunción endotelial coronaria inducida por derivación cardiopulmonar y cardioplegia (Tofukuji ef al., J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 116: 16-169 (1998)), previenen la artritis inducida por colágeno y mejoran la enfermedad establecida (Wang ef al., Proc. Nati. Acad. Sci. EE.UU. A 92(19): 8955-8959 (1995)).

La opsonofagocitosis, el proceso de deposición de fragmentos del complemento en la superficie de partículas y la captación posterior por células fagocíticas, es crucial para la eliminación de partículas circulantes que incluyen complejos ¡nmunitarios, células apoptóticas o desechos celulares y patógenos (Gasque, P., Mol Immunol. 41: 189- 198 (24)). Se sabe que los macrófagos residentes en los tejidos juegan un papel importante en la eliminación de partículas, mediada por complemento, de la circulación. Las células de Kupffer, que constituyen más del 9 % de los macrófagos residentes en los tejidos, están continuamente expuestas a la sangre de la vena porta hepática y están estratégicamente situadas en los sinusoides hepáticos para eliminar eficazmente del tracto gastrointestinal, virus, células tumorales, bacterias, hongos, parásitos y sustancias nocivas opsonizadas. Este proceso de eliminación depende en gran parte de la presencia del complemento C3 como una opsonina (Fujita ef al., Immunol. Rev. 198: 185-22 (24)). Después de la unión a las superficies bacterianas por medio de un tioéster, C3 se escinde y amplifica la ruta alternativa del complemento. Esta reacción conduce a la deposición adicional de fragmentos C3 que pueden servir como ligandos para receptores del complemento en macrófagos. La importancia de esta ruta se muestra por la alta susceptibilidad... [Seguir leyendo]

1. Un polipéptido CRIg, o una inmunoadhesina CRIg que comprende un pollpéptido CRIg fusionado a una secuencia de inmunoglobulina, para su uso en la prevención o el tratamiento de una afección ocular asociada al complemento, en donde el polipéptido CRIg o la Inmunoadhesina CRIg son un Inhibidor selectivo de la ruta alternativa del complemento.

2. El polipéptido CRIg o la inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 1, en donde el polipéptido CRIg se selecciona del grupo que consiste en polipéptidos CRIg de SEC ID N°: 2, 4, 6, 8, y los dominios extracelulares (DEC) de dichos polipéptidos.

3. El polipéptido CRIg o la inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 2, en donde dicho polipéptido CRIg es el DEC de un polipéptido CRIg de SEC ID N°: 2, 4, 6 u 8.

4. El polipéptido CRIg o la inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 3, en donde dicho polipéptido CRIg es el DEC de un polipéptido CRIg de SEC ID N°: 4 o 6.

5. La inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 1, en la que la secuencia de inmunoglobulina es una secuencia de región constante de inmunoglobulina.

6. La inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 5, en la que la secuencia de región constante de la Inmunoglobulina es la de una cadena pesada de inmunoglobulina.

7. La inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 6, en la que la secuencia de región constante de cadena pesada de inmunoglobulina se fusiona a una reglón extracelular de un polipéptido CRIg de SEC ID N°: 2, 4, 6 u 8 para producir una proteína de fusión CRIg-lg.

8. La inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 7, en la que dicha secuencia de región constante de inmunoglobulina es la de una IgG.

9. La inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 8, en la que dicha IgG es una lgG-1 o una lgG-3.

1. La Inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 9, en la que la secuencia de reglón constante de cadena pesada de lgG-1 comprende al menos una región bisagra, CH2 y CH3.

11. La Inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 9, en la que la secuencia de reglón constante de cadena pesada de lgG-1 comprende una región bisagra, CHI, CH2 y CH3.

12. La Inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 7, en la que la proteína de fusión CRIg-lg comprende un enlazador entre las secuencias de CRIg y de Ig.

13. La inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 7, en la que la proteína de fusión CRIg-lg esta codificada por un ácido nucleico seleccionado del grupo que consiste en SEC ID N°: 2, 21, 25, 26, 27 y 28.

14. El polipéptido CRIg o la inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 1, en donde la afección ocular asociada al complemento se selecciona del grupo que consiste en degeneración macular relacionada con la edad (DMRE), neovascularización coroidal (NVC), uveítis, retinopatía diabética y otras retinopatías relacionadas con isquemia, endoftalmitis, edema macular diabético, miopía patológica, enfermedad de von Hippel-Lindau, histoplasmosis ocular, Oclusión de la Vena Central de la Retina (OVCR), neovascularización corneal y neovascularización retiniana.

15. El polipéptido CRIg o la inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 14, en donde la enfermedad ocular asociada al complemento es degeneración macular relacionada con la edad (DMRE) o neovascularización coroidal (NVC).

16. El polipéptido CRIg o la inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 15, para su uso en la prevención de la NVC.

17. El polipéptido CRIg o la inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 15, para su uso en la prevención de la progresión de la DMRE.

18. El polipéptido CRIg o la inmunoadhesina CRIg de la reivindicación 17, para su uso en la prevención de la progresión de la DMRE a NVC.

19. Un polipéptido CRIg, o una inmunoadhesina CRIg, que comprende un polipéptido CRIg fusionado a una secuencia de inmunoglobulina, para su uso en la prevención del desarrollo o de la progresión de la degeneración macular relacionada con la edad (DMRE) en un sujeto con riesgo de desarrollar una DMRE o que presenta un diagnóstico de DMRE en al menos un ojo.

2. El polipéptido CRIg de la reivindicación 19, que es tal como se define en la reivindicación 3 o en la reivindicación 4.

21. La ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 19, en la que el polipéptido de fusión comprende el dominio extracelular de un polipéptido de SEC ID N°: 4 o 6 fusionado a una secuencia de región constante de cadena pesada de inmunoglobulina.

22. La ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 21, en la que el polipéptido de fusión se selecciona del grupo que consiste en pollpéptldos de fusión codificados por las secuencias de nucleótidos de SEC ID N°: 2, 21, 25, 26, 27 y 28.

23. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg de una cualquiera de las reivindicaciones 19 a 22, en donde el sujeto es un ser humano.

24. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 23, en dondeel sujeto humano presenta un diagnóstico de DMRE en al menos un ojo.

25. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 24, en donde dicha DMRE es DMRE seca de categoría 3 o de categoría 4.

26. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 25, en donde dicho sujeto se ha identificado como que está expuesto a un riesgo a desarrollar NVC.

27. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 26, en donde dicho sujeto está genéticamente expuesto a un riesgo a desarrollar NVC.

28. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 28, en donde dicho sujeto humano presenta un diagnóstico de DMRE en los dos ojos.

29. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 28, en el que dicho sujeto humano tiene una DMRE de categoría 3 o categoría 4 en los dos ojos.

3. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 23, que ralentiza la progresión de la DMRE.

31. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 25, que retrasa la progresión de la DMRE a

NVC.

32. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 23, que previene la progresión de la DMRE a NVC.

33. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 24, en donde el sujeto humano presenta un diagnóstico de DMRE en un solo ojo.

34. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 33, que retrasa el desarrollo de la DMRE en el otro ojo.

35. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 33, que previene el desarrollo de la DMRE en el otro ojo.

36. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 23, que es para una administración por inyección intravítrea.

37. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 23, que es para una administración junto con un agente adicional para la prevención o el tratamiento de la DMRE o de la NVC.

38. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg de la reivindicación 37, en donde dicho agente adicional es un anticuerpo antl-VEGF-A.

39. Un polipéptido CRIg, o una ¡nmunoadhesina CRIg que comprende un polipéptido CRIg fusionado a una secuencia de inmunoglobulina, para su uso en el tratamiento profiláctico o terapéutico de la degeneración macular relacionada con la edad (DMRE) seca.

4. El polipéptido CRIg o la ¡nmunoadhesina CRIg para su uso como se define en la reivindicación 39, que es como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 2 a 11.