Nuevas composiciones de neumovirus y procedimientos para su utilización.

Composición que comprende un polinucleótido de ARN aislado que es al menos un 96% idéntico sobre la longitud completa de la secuencia de SEQ ID NO:

1, o un polinucleótido de ARN aislado que es al menos un 96% idéntico sobre la longitud completa de la secuencia de SEQ ID NO: 4.

Nuevas composiciones de neumovirus y procedimientos para su utilización CAMPO DE LA INVENCIÓN

[1] La presente invención se refiere en general al campo de la virología y más específicamente a virus recién descubiertos en la familia Paramyxoviridae, subfamilia Pneumovirinae, hallada en mamíferos, Incluyendo caninos y felinos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

[2] Los perros domésticos confinados juntos, como en un refugio de animales, residencias caninas, o Instalaciones de cría, a menudo se ven afectados con Infecciones respiratorias agudas (tos de las perreras). La enfermedad se transmite rápidamente y es difícil de eliminar ya que nuevos animales se introducen continuamente. Un espectro de agentes puede producir un complejo síndrome de múltiples infecciones y secuencialmente solapantes que hacen el diagnóstico y tratamiento difícil. Los perros afectados presentan signos clínicos que van desde la tos seca leve y secreción nasal a neumonía y la muerte en casos graves. Los gatos también están Infectados con diversos agentes que producen dificultad respiratoria de grados diversos de gravedad. Los mismos virus o similares también pueden infectar a los seres humanos. Por lo tanto, existe una necesidad continua no satisfecha para Identificar los agentes que infectan a una gran variedad de mamíferos y para desarrollar composiciones y procedimientos para su uso en el diagnóstico, profilaxis y/o terapia para dichas infecciones. La presente invención satisface estas necesidades. Reenshaw et al. (21); Emergency Infectious Diseases 16(6): 993- 995 describe neumovirus en perros con enfermedad respiratoria aguda.

[3] La base de datos NCBI con número de acceso AY74399 actualizada el 11 de enero de 25 proporciona la

secuencia genómica de un neumovirus murino.

DESCRIPCIÓN RESUMIDA DE LA INVENCIÓN

[4] La presente invención se basa en el descubrimiento de nuevos neumovirus. Los virus pueden infectar diferentes tipos de mamíferos, Incluyendo, pero no necesariamente limitado a, perros, gatos y probablemente humanos. La presencia del virus se puede correlacionar positivamente con la enfermedad respiratoria aguda de los caninos (ARDC), o con enfermedades respiratorias en felinos, o con trastornos respiratorios o de otro tipo en seres humanos u otros mamíferos.

[5] La memoria describe polinucleótidos aislados y proteínas de los virus. La invención incluye composiciones y procedimientos para la detección de los virus (tal como se describe en las reivindicaciones).

[6] Los virus son virus de ARN de cadena negativa. La descripción incluye cadenas negativas aisladas, las cadenas positivas que tienen complementariedad inversa a las cadenas negativas, los equivalentes de ADN de los polinucleótidos de ARN, proteínas que son codificadas por las cadenas positivas, y fragmentos de los polinucleótidos y las proteínas.

[7] En ciertas realizaciones, el polinucleótido de cadena negativa aislado comprende la secuencia de SEQ ID NO: 1 o una secuencia que es al menos un 96% idéntica a la secuencia de SEQ ID NO: 1. La memoria también describe polinucleótidos que comprenden la secuencia de SEQ ID NO: 2 o SEQ ID NO: 3, o un polinucleótido que tiene una secuencia que es al menos un 96% idéntica a la secuencia de SEQ ID NO: 2 o 3.

[8] Los polinucleótidos, y/o las proteínas y/o fragmentos descritos en este documento se pueden aislar de cualquier fuente adecuada, o pueden producirse de manera recombinante usando técnicas bien conocidas.

[9] La invención proporciona un procedimiento para detectar la presencia del virus en una muestra biológica obtenida de un canino, tal como se define en las reivindicaciones. El procedimiento comprende detectar de la muestra biológica una secuencia de polinucleótido comprendida por el virus, tal como se define en las reivindicaciones. La presencia del polinucleótido es indicativa de que el canino está infectado con el virus.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

[1]

Figura 1. Ensayo de inmunofluorescencia de células A72 utilizando anticuerpos monoclonales (Mab) específicos del virus sincitial respiratorio humano. A) Mab 2G122 en células Infectadas. B) Mab 2G122 en células no infectadas. C) Mab 5H5N en las células infectadas. D) Mab 5H5N en células no infectadas. Se utilizaron soluciones madre de Mab primarios obtenidas del fabricante a una dilución de 1:1. El fondo rojo se produce mediante contratinción con azul de Evan.

Figura 2. Ensayo de inmunofluorescencia que muestra la reactividad de un suero canino seleccionado al azar

sometido a pruebas no relacionadas con la respiración frente a células A72 caninas infectadas y no infectadas. A) Suero en células infectadas a una dilución de 1:32. B) suero en células no infectadas a una dilución de 1:32. El fondo rojo se produce mediante contratinción con azul de Evan.

Figura 3. Una representación gráfica de la organización de un genoma viral que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 1.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

[11] La presente descripción proporciona nuevos polinucleótidos aislados y proteínas de los virus, composiciones y procedimientos para la detección de los virus.

[12] Los virus descritos en el presente documento son virus de ARN de cadena negativa (menos). Por lo tanto, el material genético empaquetado en el virión es una sola cadena de ARN que es el complemento inverso de una cadena positiva. La cadena positiva se transcribe a partir de la cadena negativa por una ARN polimerasa dependiente de ARN. La cadena positiva funciona, al menos en parte, como un ARNm en que las proteínas virales codificadas por la cadena positiva se traducen en el citoplasma de las células infectadas, y a continuación participa en el ensamblaje de nuevas partículas virales y empaquetamiento de genomas de cadena negativa.

[13] En ciertas realizaciones, la descripción proporciona un polinucleótido de cadena negativa aislado que comprende la secuencia de SEQ ID NO: 1 o una secuencia que es al menos un 96% idéntica a la secuencia de SEQ ID NO: 1. La descripción incluye también polinucleótidos que son complementarios a la cadena negativa. En ciertas realizaciones, estos polinucleótidos comprenden la secuencia presentada en la SEQ ID NO: 4, o una secuencia que es al menos un 96% idéntica a SEQ ID NO: 4. También se proporcionan polinucleótidos aislados que comprenden la secuencia de SEQ ID NO: 1 o una secuencia que es al menos un 96% idéntica a la secuencia de SEQ ID NO: 1, o que comprenden la secuencia de SEQ ID NO: 4, o una secuencia que es al menos un 96% idéntica a SEQ ID NO: 4. También se describen polinucleótidos que comprenden la secuencia de SEQ ID NO: 2 y/o SEQ ID NO: 3, o un polinucleótido que tiene una secuencia que es al menos un 96% idéntica a la secuencia de SEQ ID NO: 2 o 3. También se describen complementos inversos de estas secuencias y las secuencias que tienen al menos un 96% de identidad a los complementos inversos.

[14] Se describe el equivalente de ADN de cada secuencia de ARN descrita en este documento. Por lo tanto, la descripción incluye cada secuencia de ARN descrita en este documento donde cada U (uracilo) en el ARN se sustituye por T (timina). Cada uno de los polinucleótidos virales descritos en este documento incluye polinucleótidos que son idénticos a la secuencia presentada en la SEQ ID NO designada para cada polinucleótido, y se incluyen adicionalmente todos los polinucleótidos que son al menos un 96% idénticos a las secuencias presentadas en las SEQ ID NOs virales. En realizaciones particulares, los polinucleótidos que son al menos un 96% idénticos a las secuencias de polinucleótidos presentadas en la lista de secuencias son al menos un 96% idénticos a las secuencias en toda su longitud. Sin pretender estar ligado por ninguna teoría particular, se considera que las secuencias de polinucleótidos presentadas en el presente documento y que incluyen aquellas que tienen una identidad de al menos un 96% a las secuencias de polinucleótidos virales establecidas en el listado de secuencias, son distintas de los polinucleótidos que están comprendidos por virus relacionados, tales como los virus que ya son conocidos por infectar mamíferos murinos. También se considera, de nuevo sin pretender quedar ligado por ninguna teoría en particular, que la atenuación de los virus mediante, por ejemplo, pasos en serie, puede dar lugar a virus que comprenden y/o transcriben polinucleótidos que son al menos un 96% idénticos a las secuencias presentadas en el listado de secuencias. Las secuencias que no son idénticas a las secuencias enumeradas específicamente en el listado de secuencias pueden ser entre un 96,% y un 99,9% idénticas a las secuencias presentadas, incluyendo todos los números enteros hasta el primer... [Seguir leyendo]

1. Composición que comprende un polinucleótido de ARN aislado que es al menos un 96% idéntico sobre la longitud completa de la secuencia de SEQ ID NO: 1, o un polinucleótido de ARN aislado que es al menos un 96% Idéntico

sobre la longitud completa de la secuencia de SEQ ID NO: 4.

2. Composición que comprende el equivalente de ADN del polinucleótido de ARN aislado, según la reivindicación 1, en la que cada uracilo en el polinucleótido está sustituido portimina.

3. Procedimiento in vitro de determinación de si un canino está infectado o no con un neumovirus, que comprende

determinar la presencia de un polinucleótido en una muestra biológica obtenida del canino, en el que la presencia del polinucleótido es indicativa de que el canino está infectado con un virus de neumonía;

en el que el polinucleótido es un polinucleótido de ARN que es al menos un 96% idéntico sobre la longitud completa de la secuencia de SEQ ID NO: 1; o sobre la longitud completa del complemento inverso de la misma tal como se 15 define en la SEQ ID NO: 4, o el equivalente de ADN de la misma en la que cada uracilo en el polinucleótido está sustituido por timina.