Métodos y composiciones para dirigirse a la poliubiquitina.

Un anticuerpo aislado que se une específicamente a:

(i) poliubiquitina con enlaces de lisina 48,

que comprende:

(a) secuencias de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 como se muestran para un clon seleccionado de apu01, apu02, apu03, apu04, apu05, apu06, apu07, apu08, apu09, apu10, apu11, apu12, apu13, apu14 o apu15 mostradas como SEC ID Nº: 265-279; SEC ID Nº: 281-295; y SEC ID Nº: 297-311, respectivamente, y una secuencia de HVR-L1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVR-L3 como se muestra para el clon correspondiente seleccionado de apu01, apu02, apu03, apu04, apu05, apu06, apu07, apu08, apu09, apu10, apu11, apu12, apu13, apu14 o apu15 mostrados como SEC ID Nº: 313-327; o

(b) secuencias de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 como se muestran para un clon seleccionado de apu2.01. apu2.02, apu2.03, apu2.04, apu2.05, apu2.06, apu2.07, apu2.08, apu2.09 o apu2.10 mostrados como las SEC ID Nº: 695-704; SEC ID Nº: 706-715; y SEC ID Nº: 717-726, respectivamente, y una secuencia de HVRL1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVR-L3 como se muestra para el clon correspondiente seleccionado de apu2.01, apu2.02, apu2.03, apu2.04, apu2.05, apu2.06, apu2.07, apu2.08, apu2.09 o apu2.10 mostradas como SEC ID Nº: 728-737;

o

(ii) poliubiquitina con enlaces de lisina 63, que comprende:

(a) secuencias de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 como se muestran para un clon seleccionado de apu17, apu18, apu19, apu20, apu21, apu22, apu23 y apu24 mostradas como las SEC ID Nº: 329-336, 338-345 y 347-354, respectivamente, y una secuencia de HVR-L1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVRL3 como se muestra para el clon correspondiente seleccionado de apu17, apu18, apu19, apu20, apu21, apu22, apu23 y apu24 mostrados como las SEC ID Nº: 356-363; o

(b) secuencias de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 como se muestran para un clon seleccionado de apu2.11, apu2.12, apu2.13, apu2.14, apu2.15, apu2.16, apu2.17, apu2.18, apu2.19 y apu2.20 mostradas como las SEC ID Nº: 739-748, 750-759 y 761-770, respectivamente, y una secuencia de HVR-L1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVR-L3 como se muestra para el clon correspondiente seleccionado de apu2.11, apu2.12. apu2.13. apu2.14, apu2.15, apu2.16, apu2.17, apu2.18, apu2.19 y apu2.20 mostradas como SEC ID Nº: 772-781: o

(c) secuencias de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 como se muestran para un clon seleccionado de apu3.01, apu3.02, apu3.03, apu3.04, apu3.05, apu3.06, apu3.07, apu3.08, apu3.09, apu3.10 y 3.11 mostrados como las SEC ID Nº: 789-799, 801-811 y 813-823, respectivamente, y una secuencia de HVR-L1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVR-L3 mostrada como SEC ID Nº: 777.

Métodos y composiciones para dirigirse a la poliubiquitina Campo de la invención La presente invención se refiere al campo de los anticuerpos anti-poliubiquitina, y más particularmente a anticuerpos anti-poliubiquitina que no se unen específicamente con monoubiquitina y que pueden diferenciar entre poliubiquitinas que tienen diferentes enlaces isopeptídicos.

Antecedentes La ubiquitina es una proteína pequeña que tiene importantes papeles reguladores en una amplia diversidad de rutas celulares. El mejor conocido de estos es el papel de la ubiquitina en la degradación de proteínas, en la que la unión covalente de ubiquitina con una proteína diana permite que la proteína diana se reconozca y se destruya por el proteasoma 26S (véase, Wilkinson, Semin. Cell Devel. Biol. 11 (3) : 141-148 (2000) ) . La regulación de proteína quinasa de diversas de rutas de señalización también se ha correlacionado con ubiquitinación (véase Sun y Chen, Curr. Opin. Cell Biol. 16: 119-126 (2004) ) . Por ejemplo, la fosforilación de MB por IκB quinasa permite la ubiquitinación de IκB y posterior degradación por el proteasoma 26S; debido a que IκB es un inhibidor de NFκB, la degradación de IκB activa NFκB (Ghosh y Karin, (Supl.) : S81-S96 (2002) ; Palombella et al., Cell 78: 773-785 (1994) ) . La ubiquitinación también media en la reparación de ADN (véase Sun y Chen, Curr. Opin. Cell Biol. 16: 119126 (2004) . Después de dañarse el ADN, la monoubiquitinación de antígeno nuclear de células proliferantes (PCNA) activa polimerasas tolerantes a daño que son capaces de sintetizar ADN a pesar de cualquier lesión de ADN (Stelter y Ulrich, Nature 425: 188-191 (2003) ) . Otros procesos fisiológicos en los que se sabe que la ubiquitinación está implicada incluyen división celular, crecimiento celular, movimiento celular y apoptosis/muerte celular (Johnson, Nat. Cell Biol. 4:E295-E298 (2002) ; Pickart, Mol. Cell. 8: 499-504 (2001) ) .

La unión covalente de ubiquitina, una proteína de 76 aminoácidos, con una proteína diana es un proceso enzimático de tres etapas (Pickart, Annu. Rev. Biochem. 70: 503-533 (2001) ) . En primer lugar, la enzima E1 activadora de ubiquitina forma un tioéster de E1-ubiquitina en una reacción dependiente de ATP. La ubiquitina se transfiere del tioéster de E1-ubiquitina a un miembro de la familia de enzima de conjugación de ubiquitina (E2) en la segunda etapa. En la tercera etapa, con la ayuda de una ubiquitina-proteína ligasa (E3) , se forma un enlace isopeptídico entre el extremo carboxilo terminal de ubiquitina y el grupo ε-amino de un resto de lisina en la proteína diana. Las enzimas denominadas desubiquitinasas retiran los restos de ubiquitina de proteínas diana (Guterman y Glickman, Curr. Prot. Pep. Sci. 5: 201-210 (2004) ) . Destacando el papel de la ubiquitina como una molécula reguladora importante, el genoma humano contiene muchas proteínas diferentes implicadas en la ubiquitinación o desubiquitinación: al menos 40 E2 diferentes, 500 E3 diferentes y 80 desubiquitinasas diferentes se han identificado hasta la fecha (Wong et al., Drug. Discov. Today 8: 746-754 (2003) ) .

La ubiquitina contiene siete restos de lisina (Lys6, Lys22, Lys27, Lys33, Lys29, Lys48 y Lys63) , y por lo tanto la ubiquitina en sí misma puede actuar como una proteína diana para ubiquitinación (Peng et al., Nat. Biotechnol. 21: 921-926 (2003) ; Pickart y Fushman, Curr. Opin. Chem. Biol. 8: 610-616 (2004) ) . La molécula producida tras ubiquitinación de una proteína ubiquitina se denomina una molécula de poliubiquitina, y puede comprender dos o más restos de ubiquitina. La ubiquitinación de la ubiquitina puede producirse teóricamente en cualquiera de los siete restos de lisina (Peng et al., Nat. Biotechnol. 21: 921-926 (2003) ) , de modo que existen diferentes especies de poliubiquitinas que tienen enlaces isopeptídicos con diferentes restos de lisina dentro de la ubiquitina. Es posible que una única molécula de poliubiquitina con más de dos restos de ubiquitina pueda tener más de un tipo de enlace de lisina. Los estudios han mostrado que la enzima E2 influye en el tipo de enlace de lisina creado entre una molécula de ubiquitina y otra. (Tenno et al., Genes to Cells 9: 865-875 (2004) ; Deng et al. (2000) ; Hofmann y Pickart (2001) ) . La poliubiquitina y ubiquitina existen tanto como moléculas libres como en unión covalente con una proteína diana.

Como la ubiquitina, se ha descubierto la implicación de la poliubiquitina en muchos procesos celulares, incluyendo tráfico intracelular, endocitosis, expresión/silenciamiento génico, proteólisis, activación de quinasa, traducción y reparación de ADN (Hoege et al., Nature 419:135-141 (2002) ; Spence et al., Mol. Cell. Biol. 15: 1265-1273 (1995) ; Hofmann y Pickart, Cell 96: 645-653 (1999) ) . Sin embargo, la poliubiquitina y poliubiquitinación pueden tener papeles fisiológicos sorprendentemente diferentes de la monoubiquitina y monoubiquitinación en las mismas rutas. Por ejemplo, mientras que la monoubiquitinación de PCNA después de daño a ADN da como resultado la activación de ADN polimerasas propensas a errores, la poliubiquitinación de PCNA en el resto idéntico en el que se observa monoubiquitinación da como resultado activación de reparación de ADN sin errores (Stelter y Ulrich, Nature 425: 188-191 (2003) ; Hoege et al., Nature 419:135-141 (2002) ; Spence et al., Mol. Cell. Biol. 15: 265-1273 (1995) ; y Hofmann y Pickart, Cell 96: 645-653 (1999) ) .

Incluso las poliubiquitinas que tienen diferentes enlaces de lisina parecen desempeñar diferentes papeles fisiológicos. Los dos mejores estudiados son las poliubiquitinas con enlaces Lys48 y con enlaces Lys63, y estudios estructurales de las dos sugieren que diferentes poliubiquitinas con enlaces de lisina pueden adoptar conformaciones notablemente diferentes, lo que permite diferentes interacciones con compañeros de unión

seleccionados (Tenno et al., Genes to Cells 9: 865-875 (2004) ) . La modificación covalente por poliubiquitina con enlaces Lys48 normalmente marca la proteína diana para degradación proteolítica, aunque hay algunas pruebas de que la poliubiquitina con enlaces de Lys48 también puede regular ciertas proteínas por medios no proteolíticos (Chau et al., Science 243: 1576-1583 (1989) ; Finley et al., Mol. Cell. Biol. 14: 5501-5509 (1994) ; Flick et al., Nat. Cell. Biol. 6: 634-641 (2004) ) . Las poliubiquitinas con enlaces Lys63, por el contrario, se han ligado a diversas rutas intracelulares no proteolíticas, incluyendo reparación de ADN (las células de levadura que expresan ubiquitina-K63R son defectuosas en reparación de ADN) , activación de quinasa, tráfico intracelular y traducción (Pickart y Fushman, Curr. Opin. Chem. Biol. 8: 610-616 (2004) ; Hicke y Dunn, Annu Rev. Cell Dev. Biol. 19: 141-172 (2003) ; Spece et al., Mol. Cell Biol. 15: 1265-1273 (1995) ; Ulrich, Eukar y ot. Cell 1: 1-10 (2002) ; Spence et al., Cell 102: 67-76 (2000) ; Seibenhener et al., Mol. Cell. Biol. 24 (18) : 8055-8068 (2004) ) . En un ejemplo específico, la sinfilina-1 se ubiquitina normalmente con poliubiquitina con enlaces de K63 por parkina de una manera independiente de proteasoma, pero la sinfilina-1 puede marcarse como alternativa para destrucción por ubiquitinación con poliubiquitina con enlaces K48 (Lim et al., J. Neurosci. 25 (8) : 2002-9 (2005) ) . Un análisis de sujetos con enfermedad de Parkinson muestra que la poliubiquitinación K63 de sinfilina-1 puede estar implicada en la formación de inclusiones de cuerpos de Lewy asociados con esa enfermedad (Lim et al., J. Neurosci. 25 (8) : 2002-9 (2005) ) .

Otras poliubiquitinas con enlaces de lisina no se han estudiado exhaustivamente, en gran medida debido a la dificultad para distinguirlas. Los estudios hasta la fecha se han basado en células que expresan ubiquitinas mutadas en las que una o más lisinas se han retirado, en poliubiquitinas sintetizadas de forma enzimática de enlaces particulares, o en técnicas tales como espectrometría de masas para distinguir entre un tipo de poliubiquitina y otro. Cada una de estas metodologías está mal adaptada o es incómoda para el análisis del comportamiento fisiológico normal de poliubiquitinas con enlaces de lisina particulares. Aunque existen anticuerpos que son específicos para poliubiquitina a diferencia de monoubiquitina (Fujimoro et al., FEBS Lett. 349: 173-180 (1994) ) , aún no hay anticuerpos que puedan distinguir entre poliubiquitinas de diferentes enlaces de lisina.

No resulta sorprendente que dado sus papeles importantes en diversos procesos celulares, la ubiquitina y las poliubiquitinas también se han implicado en muchas enfermedades, véase (Argiles, Ubiquitin and Disease, R. G. Landes (1998) ) . Se observa desregulación de ubiquitina... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo aislado que se une específicamente a:

(i) poliubiquitina con enlaces de lisina 48, que comprende:

(a) secuencias de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 como se muestran para un clon seleccionado de apu01, apu02, apu03, apu04, apu05, apu06, apu07, apu08, apu09, apu10, apu11, apu12, apu13, apu14 o apu15 mostradas como SEC ID Nº.

26. 279; SEC ID Nº.

28. 295; y SEC ID Nº.

29. 311, respectivamente, y una secuencia de HVR-L1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVR-L3 como se muestra para el clon correspondiente seleccionado de apu01, apu02, apu03, apu04, apu05, apu06, apu07, apu08, apu09, apu10, apu11, apu12, apu13, apu14 o apu15 mostrados como SEC ID Nº.

31. 327; o

(b) secuencias de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 como se muestran para un clon seleccionado de apu2.01. apu2.02, apu2.03, apu2.04, apu2.05, apu2.06, apu2.07, apu2.08, apu2.09 o apu2.10 mostrados como las SEC ID Nº.

69. 704; SEC ID Nº.

70. 715; y SEC ID Nº.

71. 726, respectivamente, y una secuencia de HVR-L1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVR-L3 como se muestra para el clon correspondiente seleccionado de apu2.01, apu2.02, apu2.03, apu2.04, apu2.05, apu2.06, apu2.07, apu2.08, apu2.09 o apu2.10 mostradas como SEC ID Nº.

72. 737;

o (ii) poliubiquitina con enlaces de lisina 63, que comprende:

(a) secuencias de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 como se muestran para un clon seleccionado de apu17, apu18, apu19, apu20, apu21, apu22, apu23 y apu24 mostradas como las SEC ID Nº.

32. 336.

33. 345 .

34. 354, respectivamente, y una secuencia de HVR-L1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVRL3 como se muestra para el clon correspondiente seleccionado de apu17, apu18, apu19, apu20, apu21, apu22, apu23 y apu24 mostrados como las SEC ID Nº.

35. 363; o

(b) secuencias de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 como se muestran para un clon seleccionado de apu2.11, apu2.12, apu2.13, apu2.14, apu2.15, apu2.16, apu2.17, apu2.18, apu2.19 y apu2.20 mostradas como las SEC ID Nº.

73. 748.

75. 759 .

76. 770, respectivamente, y una secuencia de HVR-L1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVR-L3 como se muestra para el clon correspondiente seleccionado de apu2.11, apu2.12. apu2.13. apu2.14, apu2.15, apu2.16, apu2.17, apu2.18, apu2.19 y apu2.20 mostradas como SEC ID Nº.

77. 781: o

(c) secuencias de HVR-H1, HVR-H2 y HVR-H3 como se muestran para un clon seleccionado de apu3.01, apu3.02, apu3.03, apu3.04, apu3.05, apu3.06, apu3.07, apu3.08, apu3.09, apu3.10 y 3.11 mostrados como las SEC ID Nº.

78. 799.

80. 811 .

81. 823, respectivamente, y una secuencia de HVR-L1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVR-L3 mostrada como SEC ID Nº: 777.

2. El anticuerpo de la reivindicación 1 (i) , que comprende:

(a) una secuencia de HVR-H1 mostrada como SEC ID Nº: 269, una secuencia de HVR-H2 mostrada como SEC ID Nº: 285, una secuencia de HVR-H3 mostrada como SEC ID Nº: 301, una secuencia de HVR-L1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVR-L3 mostrada como SEC ID Nº: 317; o

(b) una secuencia de HVR-H1 mostrada como SEC ID Nº: 701, una secuencia de HVR-H2 mostrada como SEC ID Nº: 712, una secuencia de HVR-H3 mostrada como SEC ID Nº; 723, una secuencia de HVR-L1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVR-L3 mostrada como SEC ID Nº: 734.

3. El anticuerpo de la reivindicación 1 (ii) , que comprende:

(a) una secuencia de HVR-H1 mostrada como SEC ID Nº: 330, una secuencia de HVR-H2 mostrada como SEC ID Nº: 339, una secuencia de HVR-H3 mostrada como SEC ID Nº: 348, una secuencia de HVR-L1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVR-L3 mostrada como SEC ID Nº: 357; o

(b) una secuencia de HVR-H1 mostrada como SEC ID Nº: 739, una secuencia de HVR-H2 mostrada como SEC ID Nº: 750, una secuencia de HVR-H3 mostrada como SEC ID Nº: 761, una secuencia de HVR-L1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVR-L3 mostrada como SEC ID Nº: 772; o una secuencia de HVR-H1 mostrada como SEC ID Nº: 740, una secuencia de HVR-H2 mostrada como SEC ID Nº: 751, una secuencia de HVR-H3 mostrada como SEC ID Nº: 762, una secuencia de HVR-L1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVR-L3 mostrada como SEC ID Nº: 773; o

una secuencia de HVR-H1 mostrada como SEC ID Nº: 744, una secuencia de HVR-H2 mostrada como SEC ID Nº: 755, una secuencia de HVR-H3 mostrada como SEC ID Nº: 766, una secuencia de HVR-L1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVR-L3 mostrada como SEC ID Nº: 777; o

(c) una secuencia de HVR-H1 mostrada como SEC ID Nº: 795, una secuencia de HVR-H2 mostrada como SEC ID Nº: 807, una secuencia de HVR-H3 mostrada como SEC ID Nº: 819, una secuencia de HVR-L1 mostrada como SEC ID Nº: 79, una secuencia de HVR-L2 mostrada como SEC ID Nº: 80, y una secuencia de HVR-L3 mostrada como SEC ID Nº: 777.

4. El anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el anticuerpo se une específicamente a una proteína poliubiquitinada.

5. El anticuerpo de la reivindicación 4, en donde el anticuerpo inhibe la degradación de la proteína poliubiquitinada.

6. El anticuerpo de la reivindicación 4, en donde el anticuerpo modula al menos una ruta de señalización mediada por poliubiquitina.

7. El anticuerpo de la reivindicación 4, en donde el anticuerpo inhibe al menos una ruta de señalización mediada por poliubiquitina.

8. El anticuerpo de la reivindicación 4, en donde el anticuerpo estimula al menos una ruta de señalización mediada por poliubiquitina.

9. Una molécula de ácido nucleico que codifica el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

10. Un vector que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 9.

11. Una célula hospedadora que comprende el vector de la reivindicación 10.

12. Una línea celular capaz de producir el anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

13. Un método para producir el anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, que comprende cultivar una célula hospedadora que comprende una molécula de ácido nucleico que codifica el anticuerpo en condiciones en las que se produce el anticuerpo.

14. Una composición que comprende una cantidad eficaz del anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

15. Un método para identificar la presencia de poliubiquitina o una proteína poliubiquitinada en una muestra, que comprende poner contacto la muestra con al menos un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

16. Un anticuerpo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 para uso en terapia.

17. El anticuerpo de la reivindicación 16, para uso en el tratamiento de una enfermedad seleccionada de carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma, leucemia, distrofia muscular, esclerosis múltiple, esclerosis lateral amiotrófica, fibrosis quística, síndrome de Angelman, síndrome de Liddle, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Pick y enfermedad de Paget.

18. Un método para determinar la presencia de una poliubiquitina o una proteína poliubiquitinada en una muestra que se sospecha que contiene una poliubiquitina o una proteína poliubiquitinada, que comprende exponer la muestra a al menos un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y determinar la unión del al menos un anticuerpo con una poliubiquitina o una proteína poliubiquitinada en la muestra.

19. Un método para separar la proteína poliubiquitinada de proteína no poliubiquitinada en una muestra, que comprende poner en contacto la muestra con al menos un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

20. Un método para determinar la función y/o la actividad de poliubiquitina en una célula o muestra que comprende poner en contacto la célula o muestra con al menos un anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y evaluar el efecto de dicha etapa de contacto en la célula o muestra.

21. El anticuerpo aislado de la reivindicación 1 (ii) , en donde el anticuerpo se une con un epítopo en la poliubiquitina con enlaces de lisina 63, y en donde el epítopo incluye restos tanto en una primera subunidad de ubiquitina como en una segunda subunidad de ubiquitina de la poliubiquitina con enlaces de lisina 63.

22. El anticuerpo aislado de la reivindicación 21, en el que (a) el epítopo incluye al menos un resto en una primera subunidad de ubiquitina seleccionado de Glu-18, Pro-19, Ser-20, Asp-21, Thr-55, Leu-56, Ser-57, Asp-58, Asn-60,

Ile-61 y Gln-62 o (b) el epítopo incluye al menos un resto en una segunda subunidad de ubiquitina seleccionada de Leu-8, Thr-9, Glu-34, Gly-35, Ile-36, Pro-37, Asp-39, Gln-40, Leu-71, Arg-72, Leu-73, Arg-74 y Gly-75; o (c) el epítopo incluye al menos un resto en una primera subunidad de ubiquitina seleccionado de Glu-18, Pro-19, Ser-20, Asp-21, Thr-55, Leu-56, Ser-57, Asp-58, Asn-60, Ile-61 y Gln-62, y al menos un resto en una segunda subunidad de ubiquitina seleccionado de Leu-8, Thr-9, Glu-34, Gly-35, Ile-36, Pro-37, Asp-39, Gln-40, Leu-71, Arg-72, Leu-73, Arg74 y Gly-75.

23. Un fragmento de unión a antígeno del anticuerpo de cualquiera de las reivindicaciones 1-8 .

2. 22.