Métodos de determinación de la respuesta del paciente mediante la medición de Her-3.

Un anticuerpo monoclonal que comprende:

a) una región variable de cadena ligera que comprende CDR1,

CDR2 y CDR3 con las secuencias que se recogen en las SEC. ID. Nº 13,14 y 15, respectivamente, y una región variable de cadena pesada que comprende CDR1, CDR2 y CDR3 con las secuencias que se recogen en las SEC. ID. Nº 16, 17 y 18; y/o

b) una región variable de cadena ligera que comprende CDR1, CDR2 y CDR3 con las secuencias que se recogen en las SEC. ID. Nº 19, 20 y 21, respectivamente, y una región variable de cadena pesada que comprende CDR1, CDR2 y CDR3 con las secuencias que se recogen en las SEC. ID. Nº 22, 23 y 24, respectivamente; y/o

c) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEC. ID. Nº 9 y 11 para las cadenas ligera y pesada, respectivamente; y/o

d) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEC. ID. Nº 10 y 12 para las cadenas ligera y pesada, respectivamente.

Métodos de determinación de la respuesta del paciente mediante la medición de Her-3 Antecedentes de la invención

Por lo general, un biomarcador presenta una característica que se puede medir y evaluar de forma objetiva como un indicador de procesos biológicos normales, procesos patógenos o respuestas farmacológicas a una intervención terapéutica. Véase Atkinson et al, 2001, Clin. Pharmacol. Ther. 69:89-95. Los biomarcadores varían en gran medida por lo que respecta a su naturaleza, facilidad de medición y correlación con estados fisiológicos de interés. Véase, por ejemplo, Frank et al, 2003, Nature Reviews Drug Discovery 2:566-580. En general, se cree que el desarrollo de nuevos biomarcadores validados conducirá tanto a una reducción significativa de los costes de desarrollo de fármacos y sanitarios como a importantes mejoras en el tratamiento de diversas enfermedades y afecciones. Por ello, se ha dedicado un gran esfuerzo al uso de las nuevas tecnologías para encontrar nuevas clases de biomarcadores. Véase, por ejemplo, Petricoin etal., 2002, Nature Reviews Drug Discovery, 1:683-695; y Sidransky, 2002, Nature Reviews Cáncer 2:210-219; Ludwig y Weinstein, 2005, Nature Reviews Cáncer 5:845-856; Lee et al, 2007, Adv. Cáncer. Res., 96:269-298; Dhani y Siu, 2008, Cáncer Metástasis Rev. 27:339-349; Cardenet al., 2009, Clin. Pharmacol. Ther. 85:131-133.

Las interacciones de los componentes de la membrana de la superficie celular desempeñan funciones fundamentales en la transmición de señales extracelulares a una célula, tanto en la fisiología normal como en estados patológicos. En particular, muchos tipos de receptores de superficie celular se someten a dimerización, oligomerización o agrupación en relación con la transducción de una señal o evento extracelular en una respuesta celular, como, por ejemplo, proliferación, aumento o disminución de la expresión genética o similares. Véase, por ejemplo, George et al, 2002, Nature Reviews Drug Discovery 1:808-820; Mellado et al, 2001, Ann. Rev. Immunol. 19:397-421; Schlessinger, 2000, Cell 103:211-225; y Yarden, 2001, Eur. J. Cáncer 37:S3-S8. La función de estos eventos en las enfermedades, como el cáncer, ha sido objeto de una intensa investigación y ha conducido al desarrollo de varios fármacos nuevos y candidatos a fármacos. Véase, por ejemplo, Herbst y Shin, 2002, Cáncer 94:1593-1611; Yarden y Sliwkowski, 2001, Nature Reviews Molecular Cell Biology 2:127-137; McCormick, 1999, Trends ¡n Cell Biology 9:53-56 (1999); y Blume-Jensen y Hunter, 2001, Nature 411:355-365.

Los niveles de expresión de los receptores de superficie celular, tales como Her-2 en el cáncer de mama, se han utilizado como biomarcadores, especialmente para determinar el pronóstico de un paciente o si un paciente responderá o no a determinados tratamientos. Por otra parte, las tirosina quinasas oncogénicas, como miembros de la familia del receptor del factor de crecimiento epidérmico, han proporcionado objetivos para el desarrollo de fármacos. Sin embargo, los inhibidores de la tirosina quinasa dirigidos a EGFR y Her-2 han demostrado una menor eficacia clínica de lo que anticipaban los prometedores estudios preclínicos, lo que ha despertado el interés en otros miembros de la familia de los EGFR, como Her-3, en parte por su valor para el pronóstico como biomarcadores y en parte debido a sus interacciones con otros miembros de la familia, que conduzcan a nuevos objetivos de fármacos potenciales. Véase Menendez y Lupu, 2007, Breast Cáncer Research 9:111; Lee-Hoeflich et al, 2008, Cáncer Res 68:5878-5887; Fuchs et ah, 2006, Anticancer Res. 26:4397-4402; Sergina et al., 2007, Nature 445:437-441; y Tovey et al., 2006, J. Pathol. 210:358-362.

En ocasiones el Her-3 presenta unos niveles de expresión excesivos en los pacientes con cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de pulmón no microcítico, melanoma, cáncer de faringe, cáncer pancreático, cáncer esofágico, glioma, carcinoma del tracto biliar, colangiocarcinoma, cáncer gástrico, cáncer de endometrio, cáncer de vesícula biliar, carcinoma de células escamosas o carcinoma de células básales. Se han utilizado análisis inmunohistoquímicos (IHC) convencionales o por hibridación fluorescente /n s/fu (FISH) para detectar esta sobreexpresión de Her-3. Lamentablemente, los análisis de IHC y FISH presentan ciertas limitaciones como herramientas de diagnóstico, dado que no son necesariamente precisos y se prestan a diferentes interpretaciones por parte de los distintos miembros del personal de laboratorio. En la actualidad no se dispone de ningún método que permita evaluar de forma exacta el nivel de Her-3. La llegada de un método cuantitativo para medir Her-3 facilitaría la capacidad para determinar de forma precisa el pronóstico de un paciente con cáncer o si es probable que el paciente responda a un determinado tratamiento. Véase Mosesson et al., 2004, Semin. Cáncer. Biol. 14:262-270. AN Mukherjee, J. Pannu, L. Cao, S. Gangakhedkar, Y. Tan, R. Dua, H. Tahir, A. Chenna, M. Tang y S. Singh, Proc Amer Assoc Cáncer Res, Volumen 46, 2005, Abstract #3688, divulga correlaciones entre el estado de activación de ErbB y la respuesta clínica en pacientes con cáncer de mama tratados con Herceptin.

Resumen de la Invención

La invención se define mediante las reivindicaciones adjuntas. En el presente se divulga un método para medir y/o cuantificar la presencia y/o la cantidad de Her-3 y/o Her-3 en un complejo en una muestra, de forma que el método consiste en suministrar una muestra y determinar la presencia y/o cantidad de Her-3 y/o Her-3 en un

complejo en la muestra. En determinadas realizaciones, la cantidad de Her-3 se encuentra por encima de un primer umbral, de forma que la muestra es clasificada como una muestra con una cantidad "elevada" de Her-3 (por ejemplo, Her-3 total y/o homodímeros de Her-3 y/o heterodímeros de Her-3). En algunas realizaciones, el valor del primer umbral para Her-3 es un Her-3 total (H3T) de > 0,158 y un valor de Her-3 bajo se encuentra por debajo de este umbral. También se pueden utilizar otros rangos, en función de la cohorte del paciente y/o del evento significativo que se va a controlar. Por tanto, cada uno de los valores de los umbrales y/o rangos de los umbrales que se describen en el presente pueden variar en aproximadamente 0,5 unidades logarítmicas o menos en una escala logarítmica y/o en un 25% o menos en una escala lineal (es decir, ser <25% mayores y/o <25% menores que los rangos específicos divulgados en el presente), o en aproximadamente un 20% o menos, o en aproximadamente un 15% o menos, o en aproximadamente un 10% o menos, o en aproximadamente un 5% o menos.

En una realización preferible, la muestra es una muestra biológica. En una realización preferible, la muestra es una muestra de tejido. En una realización preferible, la muestra es una muestra de tejido fresco, una muestra fijada, una muestra congelada o un Usado. En una realización preferible, la muestra es una muestra de tumor. En una realización preferible, la muestra es una muestra de tejido de tumor congelado. En una realización preferible, la muestra comprende un lisado de tumor de una muestra de tumor fresca o congelada. En una realización preferible, la muestra es una muestra FFPE o FFPE solubilizada. En una realización preferible, la muestra comprende una muestra de cáncer de mama. En determinadas realizaciones, el cáncer de mama es un cáncer de mama en un estadio temprano (es decir, adyuvante) o un cáncer de mama metastásico.

En determinadas realizaciones de cada uno de los métodos y/o aspectos divulgados en el presente, el método comprende la detección de otros biomarcadores en la muestra. Por ejemplo, se pueden medir otros biomarcadores tales como Her-2 y/o p95. O bien, estos otros biomarcadores pueden ser uno de los siguientes: FOXM1, PRAME, Bc12, STK15, CEGP1, K¡-67, GSTM1, CA9, PR, BBC3, NME1, SURV, GAT A3, TFRC, YB- 1, DPYD, GSTM3, RPS6KB1, Src, Chkl, ID1, EstRI, p27, CCNB1, XIAP, Chk2, CDC25B, IGF1R, AK055699, P13KC2A, TGFB3, BAGI1, CYP3A4, EpCAM, VEGFC, pS2, hENT1, WISP1, HNF3A, NFKBp65, BRCA2, EGFR, TK1, VDR, Contig51037, pENT1, EPHX1, IF1A, CDH1, HIFIa, IGFBP3; CTSB, Her3 o DIABLO. En determinadas realizaciones, el otro biomarcador puede ser VEGF, CD31, KDR, p95, o Her-2.

En determinadas realizaciones de cada uno de los métodos y/o aspectos divulgados en el presente, el nivel de expresión de Her-2 en el cáncer de mama es elevado. En determinadas realizaciones, una expresión de Her-2 elevada es un log10H2T > a aproximadamente 1,14 - 1,25. En determinadas realizaciones, la expresión elevada de Her-2 comprende una expresión que es muy elevada y/o moderadamente elevada. En determinadas realizaciones, la expresión muy elevada de Her-2 es un loglOH2T... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo monoclonal que comprende:

a) una región variable de cadena ligera que comprende CDR1, CDR2 y CDR3 con las secuencias que se recogen en las SEC. ID. N° 13,14 y 15, respectivamente, y una región variable de cadena pesada que comprende CDR1, CDR2 y CDR3 con las secuencias que se recogen en las SEC. ID. N° 16, 17 y 18; y/o

b) una región variable de cadena ligera que comprende CDR1, CDR2 y CDR3 con las secuencias que se recogen en las SEC. ID. N° 19, 20 y 21, respectivamente, y una reglón variable de cadena pesada que comprende CDR1, CDR2 y CDR3 con las secuencias que se recogen en las SEC. ID. N° 22, 23 y 24, respectivamente; y/o

c) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEC. ID. N° 9 y 11 para las cadenas ligera y pesada, respectivamente; y/o

d) una secuencia de aminoácidos que comprende las SEC. ID. N° 10 y 12 para las cadenas ligera y pesada, respectivamente.

2. Un método para medir y/o cuantificar la presencia y/o cantidad de Her-3 o Her-3 en un complejo en una muestra de un sujeto. Este método comprende:

mezclar la muestra con un anticuerpo de la reivindicación 1 y determinar la presencia y/o cantidad del anticuerpo unido a Her-3 y/o Her-3 en un complejo.

3. Un método para determinar si un sujeto con cáncer es probable que responda al tratamiento con un agente dirigido a la familia Her, para predecir la evolución de la enfermedad y/o para predecir la probabilidad de que se produzca un evento significativo durante la evolución del cáncer del sujeto, que comprende el método

conforme a la reivindicación 2.

4. El método de la reivindicación 3, donde si el nivel de Her-3 es elevado, es menos probable que el paciente responda al agente dirigido a la familia Her; y si el nivel de Her-3 es bajo, es más probable que el paciente responda al agente dirigido a la familia Her.

5. El método de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 4, donde el método comprende la medición y/o cuantificación de la presencia y/o cantidad de al menos uno de los elementos siguientes: Her-3 total, homodímeros de Her-3 o heterodímeros de Her-3.

6. El método de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 5, que comprende también la medición de p95 en la muestra; y preferiblemente si la cantidad de p95 y la expresión de Her-3 es baja, entonces es probable que el paciente responda al agente dirigido a la familia Her y/o que el paciente tenga una evolución prolongada.

7. El método de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 6, donde la muestra comprende una muestra de tumor; y/o la muestra comprende una muestra de cáncer de mama, una muestra de cáncer colorrectal, una muestra de cáncer de ovario, una muestra de cáncer de pulmón no microcítico, o una muestra de cáncer gástrico.

8. El método de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 7, donde la muestra comprende una muestra de cáncer de mama.

9. El método de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 8, donde la muestra comprende una muestra de cáncer de mama en un estadio temprano o una muestra de cáncer de mama metastásico; y/o la muestra es una muestra FFPE o una muestra FFPE solubilizada.

10. El método de la reivindicación 8, donde la muestra comprende una muestra Her-2 positiva.

11. El método de cualquiera de las reivindicaciones 2 a 10, donde el método consiste en:

a) mezclar i) la muestra del sujeto; ¡i) una sonda de proximidad que es capaz de unirse a Her-3, donde la sonda de proximidad tiene una proximidad efectiva; y ¡ü) al menos un compuesto de unión, de forma que el compuesto o los compuestos de unión son capaces de unirse a Her-3 y de tener una o más moléculas de señalización unidas, donde la unión de la sonda de proximidad y el compuesto de unión dentro de la proximidad efectiva produce una señal de las etiquetas moleculares que se correlaciona con la presencia y/o cantidad de Her-3 y/o Her-3 en un complejo;

b) detectar la señal de las etiquetas moleculares para determinar la presencia y/o cantidad de Her-3 y/o Her-3 en un complejo;

donde la sonda de proximidad y/o el compuesto de unión comprende el anticuerpo de la reivindicación 1.

12. El método de la reivindicación 11, donde la sonda de proximidad comprende una sonda de clivaje que tiene una fracción que induce el clivaje y el compuesto de unión o los compuestos de unión tienen una o más etiquetas moleculares unidas al compuesto de unión mediante un enlace cllvable, donde el enlace clivable se puede olivar dentro de la proximidad efectiva, lo que produce una señal que está correlacionada con la presencia y/o cantidad de Her-3.

13. El método de cualquiera de las reivindicaciones 3 a 12, donde el agente dirigido a la familia Her comprende un agente dirigido a uno o varios objetivos.

14. El método de la reivindicación 13, donde el agente dirigido a la familia Her comprende un inhibidor de quinasas dual o un anticuerpo biespecífico.

5 15. El método de cualquiera de las reivindicaciones 3 o 14, en las que el agente dirigido a la familia Her

comprende trastuzumab, lapatinib, pertuzumab, cetuximab, panitumumab, erlotinib o gefitinib.

16. El método de la reivindicación 15, donde el agente dirigido a la familia Her comprende trastuzumab.

17. El método de cualquiera de la reivindicaciones 3 a 16, donde la probabilidad de responder, la probabilidad de tener una evolución prolongada y/o la probabilidad de que se produzca un evento significativo se mide como

10 al menos uno de los elementos siguientes: índice de supervivencia total, tiempo hasta la progresión, supervivencia libre de enfermedad, supervivencia libre de progresión, tiempo hasta una recurrencia distante, cociente de riesgo y/o respuesta objetiva del tumor o beneficio clínico, utilizando los criterios RECIST.

18. Un anticuerpo conforme a la reivindicación 1, para su uso en cualquiera de los métodos de las reivindicaciones 2 a 17.