Método para diagnóstico.

Un metodo para identificar si un individuo tiene o no Enfermedad de Parkinson (PD) en lugar de una enfermedad neurodegenerativa que no es PD seleccionada entre Enfermedad de Alzheimer (AD),

Demencia con cuerpos de Lewy (DLB) y Demencia Frontotemporal (FTD), comprendiendo dicho metodo:

(i) medir la concentracion de α-sinucleina (α-sin) en una muestra de fluido cefalorraquideo (CSF) obtenida del individuo;

(ii) medir la concentracion de tau sin fosforilar (tau) y / o fosforilada (p-tau) presente en la muestra; y

(iii) calcular la relacion de:**Fórmula**

en la que la concentracion total de tau es la concentracion acumulativa de p-tau y tau medida en la muestra; y

(iv) determinar de ese modo si el individuo tiene PD o no.

Método para diagnóstico Campo de ¡a invención

La presente invención se refiere a un método para identificar si un paciente tiene o no la enfermedad de Parkinson (PD). En particular, la invención se refiere a un método para identificar si un individuo tiene o no PD en lugar de un trastorno neurodegenerativo diferente que no es PD.

Antecedentes de la invención

Los trastornos neurodegenerativos a menudo se clasifican en base a anomalías en la a-sinucleína (a-sin) o proteína tau, identificándose por lo general dichas anomalías durante un análisis patológico. Como resultado, un trastorno neurodegenerativo por lo general se clasifica como una sinucleinopatía o una tauopatía, con las dos categorías a menudo visualizándose como dos tipos distintos de entidad clínica y patológica.

Esta visión es coherente con las manifestaciones clínicas más evidentes de trastornos comunes en cada categoría. Por ejemplo, el trastorno más común clasificado como una sinucleinopatía, la Enfermedad de Parkinson (PD), se caracteriza por disfunción motora extrapiramidal, mientras que la tauopatía más común, la Enfermedad de Alzheimer (AD) se define por demencia, al igual que otra tauopatía relativamente común, la Demencia Frontotemporal (FTD).

A pesar de ésto, existen coincidencias considerables en los síntomas clínicos de las sinucleinopatías y las tauopatías. Por ejemplo, los pacientes con PD frecuentemente tienen demencia, y los pacientes con AD y FTD a menudo manifiestan parkinsonismo. La Demencia con cuerpos de Lewy (DLB), aunque se define como una sinucleinopatía, ejemplifica la existencia de un continuo entre los síntomas clínicos de las sinucleinopatías y de las tauopatías. Este continuo conduce a dificultades cuando se intenta diagnosticar a un paciente de forma precisa, en particular en un estadio inicial de su enfermedad.

Por consiguiente, existe una necesidad de desarrollo de un ensayo de diagnóstico fiable que pueda diferenciar entre trastornos neurológicos diferentes.

El documento de patente WO 2009/152607 desvela métodos para diagnosticar enfermedades neurodegenerativas. Sumario de la Invención

Existen evidencia creciente que apoya una coincidencia funcional y morfológica entre las sinucleinopatías y las tauopatías. Por ejemplo:

(i) se han encontrado tau y a-sinucleína fosforiladas en fracciones enriquecidas de forma sinóptica en varias sinucleinopatías;

(ii) se ha descrito una colocalización específica de ovillos neurofibrilares y cuerpos de Lewy en una familia con afasia progresiva;

(iii) en el cerebro de algunos pacientes que portan mutación c.709-2A>G de la progranulina, se ha documentado una patología a-sin difusa;

(iv) se ha descrito un caso de degeneración lobular frontotemporal con inclusiones tau-negativas ubiquitinadas y patología a-sin cortical difusa;

(v) miembros de la familia A de San Francisco, afectados con FTD unida a 17q y esclerosis lateral amiotrófica sin mutaciones tau, mostraron en sus cerebros inclusiones tau ir a-sin, combinando de este modo las características de una a-sinucleinopatía y de una tauopatía.

Además, mutaciones en LRRK2 conocidas porque causan Parkinsonismo están asociados no solamente con degeneración neuronal dopaminérgica, sino también con la acumulación de a-sin, tau, o ambas proteínas. También existen otras características genéticas compartidas entre tauopatías y sinucleinopatías. La coincidencia en las características clínicas y patológicas de tauopatías y sinucleinopatías plantea la posibilidad de que la proteína tau pueda ser importante en la patogénesis de la PD. Recientemente, se ha informado que la variabilidad genética en el gen tau (MAPT) confiere susceptibilidad a la PD.

Como un biomarcador candidato de sinucleinopatías, en particular PD y demencia con cuerpos de Lewy (DLB), la determinación de a-sin en el fluido cefalorraquídeo (CSF) podría mejorar la precisión del diagnóstico clínico para estas afecciones neurodegenerativas. Sin embargo, dado que el desarrollo de ensayos para la medida de a-sin en el CSF es bastante reciente, solamente están disponibles unos pocos estudios sobre este tema y todos ellos son retroactivos. Un estudio informó que los pacientes con PD muestran niveles de a-sin en el CSF significativamente menores en comparación con los controles y que tal reducción se correlaciona con la gravedad de la enfermedad. Otro estudio encontró niveles de a-sinucleína en el CSF inferiores en un grupo de sinucleinopatía primaria (DLB y PD) en comparación con AD o sujetos de control no neurodegenerativos. Por el contrario, otros informes posteriores

no pudieron demostrar ninguna diferencia en los niveles de a-sin en ei CSF entre PD y controies y entre DLB y enfermedad de Alzheimer (AD). Un estudio adicional tampoco pudo mostrar diferencias significativas entre DLB y AD, y encontró una asociación inversa entre niveles de a-sin en ei CSF y duración de !a enfermedad soiamente en pacientes con DLB.

Por el contrario, varios estudios han mostrado que los biomarcadores ciásicos en e! CSF (por ejempio, [3 amüoidei-42, tau, tau fosforilada) pueden ser útiles para el diagnóstico precoz de ia AD. Estos biomarcadores pueden representar la expresión /n v/vo del proceso neurodegenerativo que se produce en ei cerebro de pacientes con AD inciuso antes del inicio clínico de la demencia. Por consiguiente, ios presentes inventores consideraron que, aunque estos biomarcadores no contribuyen directamente al diagnóstico de demencias no AD, podrían proporcionar información adicional sobre la fisiopatología de enfermedades neurodegenerativas asociadas con deterioro cognitivo. De hecho, el fenotipo clínico de la mayoría de los trastornos neurodegenerativos, caracterizado por déficits de movimiento y/o cognitivos, puede ser la consecuencia de patologías simuitáneas, es decir patoiogía de cuerpos de Lewy y Alzheimer, que resulta de la interacción mutua entre a-sin, [3-amüoide 1, 42 y tau, durante e) transcurso de ia enfermedad.

Por lo tanto, los inventores presentaron la hipótesis de que una combinación de diferentes biomarcadores de! CSF podría ayudar a diferenciar entre estos trastornos neurodegenerativos, especiaimente en ia fase inicia!, cuando e! diagnóstico clínico es más difícil y su precisión es cruda!, en vista de tratamiento farmacoiógico apropiado y oportuno. Los inventores han encontrado que, a pesar de ias incoherencias informadas anteriormente en niveies informados de a-sin en el CSF, la evaluación de la reiación de ia concentración tota! de tau en una muestra con respecto a la concentración de a-sin mostró niveles significativamente más bajos para esta reiación en pacientes con PD en comparación con otros grupos patológicos (P < 0,002), induyendo AD, FTD y DLB. Se obtuvieron resuitados similares para la relación de la concentración de tau fosforiiada (p-tau) en una muestra con respecto a ia concentración de a-sin.

Por consiguiente la presente invención proporciona:

Un método para identificar si un individuo tiene enfermedad de Parkinson (PD) o no en tugar de una enfermedad neurodegenerativa que no es PD seleccionada entre AD, DLB y FTD, comprendiendo dicho método:

(i) medir la concentración de a-sinucleína (a-sin) en una muestra de fiuido cefaiorraquídeo (CSF) obtenida de! individuo;

(ii) medir la concentración de tau sin fosforilar (tau) y / o fosforilada ([rho]-tau) presente en ia muestra; y

(iii) calcular la relación de:

concentración tota! de tau o concentración de p-tau concentración de a-sin concentración de a-sin

en la que la concentración total de tau es la concentración acumulativa de p-tau y tau medida en la muestra; y

(iv) determinar de ese modo si el individuo tiene PD o no.

también se describe un método para retrasar o prevenir el inicio de los síntomas de la PD en un individuo, que comprende;

(i) determinar si un individuo tiene PD o no usando un método de acuerdo con la invención; y (¡i) administrar a un individuo identificado en (i) como que tiene PD, una concentración terapéuticamente eficaz de un agente que directa o indirectamente inhibe la agregación y/o toxicidad de a-sin, un agente que reduce la expresión de la proteína a-sin, un agente que directa o indirectamente aumenta o estimula la degradación de agregados de a-sin, o un agente neuroprotector.

También se describe un kit para uso en un método para determinar si un individuo tiene PD o no, kit que comprende medios para la detección de a-sinucleína, tau y /o p-tau en una muestra de CSF. La invención también proporciona el uso de dicho kit en un método de la invención.

Sumario de ias figuras

La Figura 1... [Seguir leyendo]

1. Un método para identificar si un individuo tiene o no Enfermedad de Parkinson (PD) en iugar de una enfermedad neurodegenerativa que no es PD seieccionada entre Enfermedad de Aizheimer (AD), Demencia con cuerpos de Lewy (DLB) y Demencia Frontotemporai (FTD), comprendiendo dicho método:

(i) medir la concentración de a-sinucleína (a-sin) en una muestra de fluido cefalorraquídeo (CSF) obtenida del individuo;

(ii) medir la concentración de tau sin fosforilar (tau) y / o fosforilada (p-tau) presente en la muestra; y

(iii) calcular la relación de:

concentración tota! de tau o concentración de o-tau concentración de a-sin concentración de a-sin

en la que la concentración total de tau es la concentración acumulativa de p-tau y tau medida en la muestra;

y

(iv) determinar de ese modo si el individuo tiene PD o no.

2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1 en el que una relación de tau total a a-sin de 19,5:1 o inferior es indicativo de que el individuo tiene PD.

3. Un método de acuerdo con la reivindicación 1 en el que una relación de p-tau a a-sin de 3,1:1 o inferior es indicativo de que el individuo tiene PD.

4. Un método de acuerdo con la reivindicación 1 en el que la determinación de si el individuo tiene PD o no en lugar de una enfermedad neurodegenerativa que no es PD comprende determinar si, o no, la relación de tau total a a-sin o de p-tau a a-sin disminuye con respecto a la relación correspondiente en una muestra tomada de un individuo que tiene una enfermedad neurodegenerativa que no es PD.

5. Un método de acuerdo con la reivindicación 4 en el que se determina que el individuo tiene PD cuando ia reiación de tau total a a-sin o de p-tau a a-sin disminuye en al menos 3 veces con respecto a ia reiación correspondiente en una muestra tomada de un individuo que tiene una enfermedad neurodegenerativa que no es PD.

6. Un método de acuerdo con la reivindicación 1 en el que la determinación de si ei individuo tiene PD o no en iugar de una enfermedad neurodegenerativa que no es PD comprende determinar si, o no, ia reiación de tau totai a a-sin o de p-tau a a-sin no es significativamente diferente a la relación correspondiente en una muestra tomada de un individuo normal.

7. Un método de acuerdo con la reivindicación 6 en el que la reiación de tau totai a a-sin o de p-tau a a-sin difiere en no más de un 25 % con respecto a la relación correspondiente en una muestra tomada de un individuo normai.

8. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en ei que se sospecha que ei individuo está en riesgo de desarrollar un trastorno neurodegenerativo.

9. Un método de acuerdo con la reivindicación 8, en el que el individuo tiene una historia famiiiar de un trastorno neurodegenerativo.

10. Un método de acuerdo con la reivindicación 8 o 9, en el que el individuo tiene o ha sido diagnosticado con un síntoma clínico asociado con un diagnóstico de un trastorno neurodegenerativo.

11. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, en el que el trastorno neurodegenerativo es PD, AD, DLB o FTD.

12. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, en el que el individuo se clasifica como Hoehn-Yahr de grado 3 o inferior.

13. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, en el que se clasifica al individuo como que tiene una puntuación de examen de estado Mini-mental (MMSE) de 19 a 26.

14. Uso en un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13 de un kit que comprenden medios para la detección de a-sinucleína, tau y /o p-tau en una muestra de CSF.