MÉTODO DE OBTENCIÓN DE UN EXTRACTO RICO EN ÁCIDOS TRITERPÉNICOS DE CORTEZA DE EUCALIPTO.

La presente invención se refiere a un método de obtención de extractos que tienen contenidos muy altos (de hasta el 98%) de ácidos triterpénicos,

principalmente ácido oleanólico y ácido ursólico, de corteza de eucalipto. El método implica la extracción sólido-líquido de la corteza con disolventes orgánicos, preferentemente hexano, y el fraccionamiento del extracto en bruto por medio de un tratamiento sencillo con una solución alcalina, seguido de la separación de la fase acuosa, su filtración, acidificación y, finalmente, el aislamiento de la fracción enriquecida en ácidos triterpénicos por medio de filtración, centrifugación o extracción con un disolvente orgánico, preferentemente hexano, seguida de la eliminación del disolvente. La presente invención tiene aplicación en las industrias farmacéutica, nutracéutica, cosmética y de alimentos funcionales.

MÉTODO DE OBTENCIÓN DE UN EXTRACTO RICO EN ÁCIDOS TRITERPÉNICOS

DE CORTEZA DE EUCALIPTO

Campo de la Invención

La presente invención se refiere a un método de obtención de extractos que tienen contenidos muy altos (de hasta el 98 %) de ácidos triterpénicos, principalmente ácido oleanólico y ácido ursólico, de corteza de eucalipto. El método implica la extracción sólido-líquido de la corteza con disolventes orgánicos, preferentemente hexano, y el fraccionamiento del extracto en bruto por medio de un tratamiento sencillo con una solución alcalina, seguido de la separación de la fase acuosa, su filtración, acidificación y, finalmente, el aislamiento de la fracción enriquecida en ácidos triterpénicos por medio de filtración, centrifugación o extracción con un disolvente orgánico, preferentemente hexano, seguida de la eliminación del disolvente.

Estado de la Técnica

Los ácidos triterpénicos pentacíclicos con esqueletos de lupano, ursano y oleanano, como el ácido betulínico, ácido ursólico, ácido 3-acetilursólico, ácido oleanólico y ácido 3-acetiloleanólico, tienen una amplia selección de actividades farmacológicas y efectos biológicos únicos y potencialmente utilizables (Yogeeswari y Sriram, 25).

Es conocido que el ácido betulínico presenta propiedades contra el VIH, antibacterianas, contra la malaria, antiinflamatorias y antioxidantes (Tolstikova et al., 26, Yogeeswari y Sriram, 25). El ácido oleanólico y el ácido ursólico también son conocidos por tener actividad antimicrobiana (Horiuchi et al., 27, Kuete et al., 27, Sattar et al., 1995) y una importante actividad antitumoral (Li et al., 22), así como propiedades antiinflamatorias (Singh et al., 1992). Además, el ácido oleanólico reveló actividades antialérgicas y contra el VIH (Sultana y Ata, 28), y el ácido ursólico es un compuesto supresor útil para el tratamiento de la artritis reumatoide con bajo riesgo de generar problemas gástricos (Kang et al., 28).

El interés en compuestos naturales bioactivos, para su aplicación en productos farmacéuticos, nutracéuticos, cosméticos y alimentos funcionales, alentó el desarrollo de varios métodos de obtención de extractos vegetales enriquecidos en los ácidos triterpénicos anteriormente mencionados. Se han descrito varias partes morfológicas

de las plantas como posibles fuentes de dichos compuestos naturales como, por ejemplo, agujas o corteza de abeto (RU 21883), hojas de caqui (CN 1153839), piel de manzana (EP 125852, EP 1161879), hojas de olivo (WO 2575614), hojas de níspero japonés (US 29275778) y corteza de abedul (WO 254734). Las metodologías publicadas para la obtención de extractos enriquecidos en ácidos triterpénicos implican la extracción de los sustratos vegetales con un sistema de disolvente orgánico (por ejemplo, alcohol etílico, acetato de etilo, éter de petróleo, acetona, hexano, cloroformo, metilbutiléter, benceno, xilenos, entre otros), seguida de procedimientos complejos de fraccionamiento basados en extracciones líquido-líquido sucesivas (US 674778), procedimientos de cromatografía en columna (WO 311891, CN 1153839, CN 11759756, US 29275778), extracción en columna a contracorriente supercrítica (WO 2575614), cristalización y recristalización (WO 2688385, RO 122244, WO 254734, CN 11759756, EP 1161879) o el tratamiento del extracto orgánico con soluciones alcalinas (RU 2151139, RU 21883, RU 21817). El uso de disolventes orgánicos sumamente peligrosos, en concreto, cloroformo, benceno y xilenos, y de procedimientos de fraccionamiento muy complejos, cuando se desean altas purezas, constituye los principales inconvenientes de algunas de dichas tecnologías.

La corteza exterior de varias especies de eucalipto contiene altas cantidades de varios ácidos triterpénicos, en concreto, ácido betulónico, ácido betulínico, ácido 3- acetilbetulínico, ácido ursólico, ácido 3-acetilursólico, ácido oleanólico y ácido 3- acetiloleanólico, y se puede estudiar para la obtención de dichos compuestos bioactivos (Domingues et al., 21, Domingues et al., 211, Freire et al., 22).

La novedad de la presente invención reside en el uso de residuos de corteza de eucalipto (y, particularmente, de Eucalyptus globulus) para la obtención de extractos con altas cantidades (de hasta el 98 %) de ácidos triterpénicos por medio de la extracción sólido-líquido con un disolvente orgánico, preferentemente n-hexano, seguida del fraccionamiento a través del tratamiento secuencial con soluciones alcalinas/ácidas. El método propuesto tiene la ventaja de ser muy eficaz y de industrializarse fácilmente en comparación con algunas de las tecnologías disponibles.

Resumen de la Invención

El objeto de la presente invención es un método de obtención de extractos ricos en ácidos triterpénicos que comprende las siguientes etapas:

i) secar y moler la corteza de eucalipto;

ii) extraer la corteza con un disolvente orgánico;

iii) fraccionar el extracto en bruto mediante el tratamiento con una solución acuosa alcalina;

iv) separar la fase acuosa;

v) aclarar mediante filtración;

vi) acidificar con un ácido inorgánico u orgánico;

vii) aislar la fracción precipitada de ácidos triterpénicos.

En una realización preferida, el método comprende además una etapa de cristalización.

En otra realización preferida, la corteza de eucalipto se obtiene de especies de eucalipto, en concreto, de E. globulus, E. urograndis, E. grandis x globulus, E. maidenii E. grandis y E. nitens, y la humedad residual y la granulometría de las muestras de corteza es inferior al 15 % y de malla 6, respectivamente.

En otra realización preferida, el disolvente orgánico usado es diclorometano, n- heptano, n-hexano u otro disolvente no polar, y la solución acuosa comprende al menos uno entre: hidróxido de metal (KOH o NaOH) o carbonato de metal (Na2C3 o K2CO3), así como los correspondientes hidrogenocarbonatos, o fosfato (Na3P4 o K3P4), así como los correspondientes hidrogenofosfatos y dihidrogenofosfatos, o hidróxido de amonio (NH4OH), de modo que el pH de la solución acuosa alcalina sea de entre 8 y 14.

En otra realización preferida, la separación se realiza por decantación o centrifugación.

En otra realización preferida, la acidificación de la fase acuosa se realiza con soluciones de ácidos inorgánicos tales como ácido sulfúrico, ácido clorhídrico y ácido nítrico, y soluciones de ácidos orgánicos tales como ácido acético y ácido propiónico, y el pH de la solución de ácido es de entre 1 y 5.

Otro objeto de la presente invención son los extractos obtenidos mediante el método descrito anteriormente, en que el contenido de ácidos triterpénicos está en el intervalo del 93-98 %.

Otro objeto de la presente invención es el uso de los extractos descritos anteriormente, 5 que se usan en las industrias farmacéutica, nutracéutica, cosmética y de alimentos funcionales.

Descripción de las Figuras

Figura 1: etapas del método de obtención de extractos enriquecidos en ácidos triterpénicos de corteza de especies de eucalipto.

Figura 2: cromatograma típico de GC-MS de los extractos enriquecidos en ácidos triterpénicos obtenidos usando la presente metodología. (Pl: patrón interno)

Descripción Detallada de la Invención

La presente invención se refiere a un método de obtención de extractos enriquecidos en ácidos triterpénicos de corteza de especies de eucalipto, explicado resumidamente 15 en la Fig. 1.

El método comprende cuatro etapas principales:

(1) secar y moler la corteza;

(2) realizar la extracción sólido-líquido de los residuos de corteza con un disolvente orgánico, preferentemente con n-hexano;

(3) fraccionar dicho extracto en bruto mediante el tratamiento con una solución acuosa

alcalina, seguido de la separación de la fase acuosa, su filtración y acidificación; y, por último,

(4) aislar la fracción sólida enriquecida en ácidos triterpénicos por medio de filtración, centrifugación o extracción con un disolvente orgánico no polar, preferentemente 25 hexano, seguido de la eliminación del disolvente.

Por último, dicho proceso también puede comprender una etapa de cristalización.

El resultado de dicho proceso es un polvo blanquecino con un contenido de ácidos triterpénicos del aproximadamente 93-98 %.

La corteza usada como materia prima se puede obtener de diferentes especies de eucalipto, en concreto, de E. globulus, E. urograndis, E. grandis x globulus, E. maidenii E. grandis y E. nitens, entre otras. Se puede usar biomasa fresca o en descomposición, pero preferentemente se debe secar y moler...

1.- Método de obtención de extractos ricos en ácidos triterpénicos, caracterizado por que comprende las siguientes etapas:

i) secar y moler la corteza de eucalipto;

ii) extraer la corteza con un disolvente orgánico;

iii) fraccionar el extracto bruto mediante el tratamiento con una solución acuosa alcalina;

iv) separar la fase acuosa;

v) aclarar mediante filtración;

vi) acidificar con un ácido inorgánico u orgánico;

vii) aislar la fracción precipitada de ácidos triterpénicos.

2.- Método según la reivindicación 1, caracterizado por que comprende además una etapa de cristalización.

3.- Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que 15 la corteza de eucalipto se obtiene de especies de eucalipto, en concreto, de E.

globulus, E. urograndis, E. granáis x globulus, E. maidenii E. gradis y E. nitens.

4.- Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que, en la etapa i), la humedad residual y la granulometría de las muestras de corteza es inferior al 15 % y de malla 6, respectivamente.

5.- Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que,

en la etapa ii), el disolvente orgánico es diclorometano, n-heptano, n-hexano u otros disolventes no polares.

6.- Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que la solución alcalina de la etapa iii) es una solución acuosa que comprende al menos 25 una de entre: hidróxido de metal (KOH o NaOH) o carbonato de metal (Na2CC>3 o K2C3), así como los correspondientes hidrogenocarbonatos, o fosfato (Na3P4 o

K3PO4), así como los correspondientes hidrogenofosfatos y dihidrogenofosfatos, o hidróxido de amonio (NH4OH).

7. Método según la reivindicación anterior, caracterizado por que el pH de la solución acuosa alcalina de la etapa iii) es de entre 8 y 14.

8. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que

la separación de la etapa iv) se realiza por decantación o centrifugación.

9. Método según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, caracterizado por que la acidificación de la fase acuosa de la etapa vi) se realiza con soluciones de ácidos inorgánicos, tales como ácido sulfúrico, ácido clorhídrico y ácido nítrico, y soluciones

de ácidos orgánicos tales como ácido acético y ácido propiónico.

1. Método según la reivindicación anterior, caracterizado por que el pH de la solución de ácido es de entre 1 y 5.

11. Extractos obtenidos mediante el método descrito en las reivindicaciones anteriores, caracterizados por que la pureza de la fracción de ácidos triterpénicos purificada está

en el intervalo del 93-98 %.

12. Uso de los extractos descritos en la reivindicación anterior, caracterizados por que se usan en las industrias farmacéutica, nutracéutica, cosmética y de alimentos funcionales.