Medio de suspensión de hematíes.
Utilización del medio de suspensión para hematíes reactivos caracterizada por comprender una combinación de aminoácidos de cualquier grupo,
en técnicas de análisis que requieren hematíes reactivos.
Tipo: Patente Europea. Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: E07380137.
Solicitante: GRIFOLS, S.A.
Nacionalidad solicitante: España.
Inventor/es: MARTORELL PENA,DANIEL, FARRE LEON,JORDI, CASTELLS PARERA,JOSEFINA, TRAVÉS POLO,Mª DEL CARMEN.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- A01N1/02 NECESIDADES CORRIENTES DE LA VIDA. › A01 AGRICULTURA; SILVICULTURA; CRIA; CAZA; CAPTURA; PESCA. › A01N CONSERVACION DE CUERPOS HUMANOS O ANIMALES O DE VEGETALES O DE PARTES DE ELLOS (conservación de alimentos o productos alimenticios A23 ); BIOCIDAS, p. ej. EN TANTO QUE SEAN DESINFECTANTES, PESTICIDAS O HERBICIDAS (preparaciones de uso médico, dental o para el aseo que eliminan o previenen el crecimiento o la proliferación de organismos no deseados A61K ); PRODUCTOS QUE ATRAEN O REPELEN A LOS ANIMALES; REGULADORES DEL CRECIMIENTO DE LOS VEGETALES. › A01N 1/00 Conservación de cuerpos humanos o animales, o partes de ellos. › Conservación de partes vivas.
- A61K35/14 A […] › A61 CIENCIAS MEDICAS O VETERINARIAS; HIGIENE. › A61K PREPARACIONES DE USO MEDICO, DENTAL O PARA EL ASEO (dispositivos o métodos especialmente concebidos para conferir a los productos farmacéuticos una forma física o de administración particular A61J 3/00; aspectos químicos o utilización de substancias químicas para, la desodorización del aire, la desinfección o la esterilización, vendas, apósitos, almohadillas absorbentes o de los artículos para su realización A61L; composiciones a base de jabón C11D). › A61K 35/00 Preparaciones medicinales que contienen sustancias de constitución indeterminada o sus productos de reacción. › Sangre; Sangre artificial (perfluorocarbonos A61K 31/02; sangre del cordón umbilical A61K 35/51; hemoglobina A61K 38/42).
- A61K35/18 A61K 35/00 […] › Eritrocitos (hemoglobina A61K 38/42).
- G01N33/80 FISICA. › G01 METROLOGIA; ENSAYOS. › G01N INVESTIGACION O ANALISIS DE MATERIALES POR DETERMINACION DE SUS PROPIEDADES QUIMICAS O FISICAS (procedimientos de medida, de investigación o de análisis diferentes de los ensayos inmunológicos, en los que intervienen enzimas o microorganismos C12M, C12Q). › G01N 33/00 Investigación o análisis de materiales por métodos específicos no cubiertos por los grupos G01N 1/00 - G01N 31/00. › en los que intervienen grupos o tipos sanguíneos.
- G01N33/96 G01N 33/00 […] › en los que interviene un patrón de control de la sangre o del suero.
PDF original: ES-2541135_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Medio de suspensión de hematíes Sector al que pertenece la invención La presente invención concierne a nuevo medio de suspensión de hematíes para la realización de las principales pruebas inmunohematológicas de aglutinación que requieren de eritrocitos que se llevan a cabo en los hospitales y centros de transfusión sanguínea. La determinación del grupo sérico, la detección e identificación de anticuerpos irregulares, la preparación de controles positivos y negativos, y la necesidad de conservar muestras para la investigación de resultados anómalos, requieren de hematíes resuspendidos en un medio acuoso que mantengan su funcionalidad.
Estado de la técnica
Los Patent abstracts de Japón referente al documento 61012626 dan a conocer un conservante para sangre que contiene una transfusión de aminoácido, que muestra actividad antihemolítica similar a la sacarosa con respecto a la disminución de presión osmótica de eritrocitos, utilizable para transfusiones de sangre directamente, sin eliminar el aminoácido.
El Patent abstract de Japón en el documento 61015838 da a conocer un conservante de la sangre obtenido utilizando un aminoácido acídico y/o una sal del mismo, por ejemplo, una sal de metal alcalino con Na, o una sal con un ácido mineral tal como HCl, como componente principal.
El documento WO 87/04072 da a conocer un procedimiento y aditivos para mejorar la calidad y vida de almacenamiento de la sangre almacenada por manipulación de las actividades de las encimas clave de los eritrocitos incluyendo la utilización de L-aminoácidos u otros productos a añadir a los concentrados de eritrocitos a almacenar para inhibir la actividad de DPG fosfatasa.
El documento WO 02/31122 da a conocer un suplemento del plasma a utilizar en sistemas de ayuda al hígado, para uso clínico, incluyendo concentraciones específicas de aminoácidos y hormonas para fomentar y ampliar la función de los hepatocitos que se desarrollan en el sistema.
El avance clínico que supuso la transfusión sanguínea conllevó un desarrollo de la inmunohematología. Sin ello no hubieran sido posibles el número de transfusiones que se realizan actualmente en víctimas de accidentes, en cirugía o en el tratamiento de leucemia, cáncer y otras enfermedades. En España, se realizaron durante el año 2004 un total de 1, 6 millones de donaciones de sangre (1) , en EE.UU., se valora alrededor de 15 millones las bolsas de sangre donadas por año (2) y la Organización Mundial de la Salud a partir de los datos de 178 países estima en 81 millones las unidades de sangre total donadas anualmente (3) . Este número de donaciones no seria útil sin una determinación inmunohematológica previa. Los principales grupos sanguíneos que se determinan son el sistema ABO y el sistema RH, y particularmente de este segundo sistema, el antígeno D (RH1) .
En una situación de emergencia todos los individuos podemos recibir hematíes o glóbulos rojos del grupo O y los individuos AB pueden recibir glóbulos rojos de cualquier grupo ABO. De ahí que los individuos del grupo O son conocidos como donantes universales y los individuos AB como receptores universales. La aceptación de glóbulos rojos o hematíes procedentes de una persona de un determinado grupo sanguíneo por parte de otra persona, está condicionada por los anticuerpos presentes en el plasma de la persona receptora. Así, los individuos del grupo O tienen anticuerpos contra antígenos A y B, los individuos del grupo A anticuerpos contra B, viceversa por los individuos del grupo B, y no presentan anticuerpos los individuos del grupo AB. En consecuencia, no los hematíes, pero sí el plasma de los individuos AB, puede ser donado a todos los grupos sanguíneos.
La base del análisis inmunológico es pues la determinación del grupo ABO y el grupo RH. El sistema ABO se determina por antígenos y anticuerpos (conocidos como anticuerpos regulares) , mientras que el sistema RH y los otros sistemas solo presentan anticuerpos (conocidos como anticuerpos irregulares) como consecuencia del embarazo y de la practica transfusional. Sin embargo, a pesar de su baja frecuencia en la población, la determinación de anticuerpos irregulares es de cabal importancia y se va implementando en todos los hospitales y centros de transfusión sanguínea para evitar riesgos y lograr transfusiones de alta seguridad. También se han implementado las determinaciones neonatales, tanto para diagnosticar posibles enfermedades hemolíticas del recién nacido, como para profilaxis a realizar a la madre en caso que sea Rh - (carece del antígeno D) y el hijo sea Rh + (presenta en antígeno D) .
En inmunohematología, la introducción de nuevas tecnologías para el tipaje de hematíes, pruebas de compatibilidad y detección de anticuerpos regulares e irregulares, han representado los avances más significativos en esta área. Las mejoras han estado relacionadas con los componentes que favorecen la aglutinación específica (e.g. solución de Coombs, solución LISS [solución de baja fuerza iónica], soluciones con albúmina, soluciones con enzimas proteolíticos u otros potenciadores de la unión antígeno-anticuerpo) , la mejora de anticuerpos reactivos (e.g. anticuerpos monoclonales) , así como aportándose metodologías nuevas o sustancialmente diferentes para visualizar la aglutinación (e.g. microplaca y técnica en gel) . La aparición de la técnica de microtubos en columna, también conocida como técnica
en gel o tarjeta, presenta la base para la modernización de la inmunohematología. Desde su aparición en 1986 la técnica de microtubos en columna (4) no ha dejado de experimentar un crecimiento espectacular. Debido a su facilidad de automatización esta metodología desplazará al resto de técnicas, previéndose como la única que permanecerá para la determinación fenotípica. Conjuntamente con la técnica genotípica que prevalezca formarán la base del análisis inmunológico. Actualmente, la mayoría de metodologías para la determinación genotípica se encuentran en fases preliminares, a unos costes limitados a laboratorios de investigación.
La técnica en gel separa las células aglutinadas de las que no han aglutinado a través de una centrifugación en una matriz de filtración formada por pequeñas bolas de gel (EP 194212, EP 305337) , de vidrio u otro material esférico (EP 485228, EP725276, EP 755719) . En la parte superior del microtubo, cámara de reacción, situada sobre la columna del gel, se dispensan las muestras. En la columna donde está contenido el gel o matriz de filtración, hay una solución tamponada que dependiendo del análisis puede contener anticuerpos específicos (e.g. anti-A, anti-B o anti-D) o antiglobulina humana (anticuerpos anti-IgG o anti-IgM humanos) , conocida como solución de Coombs. La matriz de filtración son partículas esféricas que sedimentan en una solución acuosa tamponada. Para visualizar la aglutinación inmunohematológica se centrifuga, forzando las células (hematíes) a que atraviesen la matriz de filtración. El espacio que queda entre partículas es suficientemente grande para dejar pasar las células que no han aglutinado, es decir células individuales. Mientras que en el caso que haya habido aglutinación las células aglutinadas quedan retenidas entre las bolas. Aunque estrictamente se trata de una técnica cualitativa, el recorrido a través de la matriz de filtración permite distinguir distintos grados de aglutinación. En muestras positivas en la parte superior del gel quedarán retenidos los aglutinados muy fuertes, mientras que aglutinados débiles podrán realizar un cierto recorrido a través de la matriz, quedándose por ejemplo a mitad de camino. La ausencia de aglutinación hará que todas las células alcancen la base del microtubo (reacción negativa) . Tal y como ocurre en inmunohematología clásica, debido al intenso color rojo de los hematíes, la técnica no requiere de ningún marcador o amplificador de la unión antígeno (hematíes) -anticuerpos.
La técnica en gel ha permitido separar físicamente los resultados positivos de los negativos, i.e. los positivos en la parte superior del gel (aglutinado de alta intensidad) , a lo largo de la columna (aglutinados medios o débiles) , y en la parte inferior de la columna los resultados negativos (hematíes no aglutinados) .
En las pruebas de inmunohematología para la detección de anticuerpos regulares e irregulares en plasma o suero, se utilizan hematíes reactivo. Dichos hematíes se preparan en una solución con la finalidad de mantener su funcionalidad e integridad durante un cierto periodo de tiempo, habitualmente entre 1 y 4 semanas. En los laboratorios de banco de sangre o responsables de transfusiones sanguíneas se seleccionan los hematíes con antígenos... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Utilización del medio de suspensión para hematíes reactivos caracterizada por comprender una combinación de aminoácidos de cualquier grupo, en técnicas de análisis que requieren hematíes reactivos. 5
2. Utilización de un medio de suspensión de hematíes reactivo, según la reivindicación 1, en el que el medio de suspensión contiene además tampón fosfato, cloruro sódico, glucosa, adenina, conservantes, EDTA y glicina.
3. Utilización de un medio de suspensión de hematíes reactivo, según las reivindicaciones 1 y 2, caracterizado porque el 10 medio de suspensión comprende además inosina, citrato, ácido cítrico y bicarbonato.
4. Utilización de un medio de suspensión de hematíes reactivo, según la reivindicación 1, caracterizado porque las concentraciones de los aminoácidos en el medio de suspensión son superiores a las necesarias para disminuir la fuerza iónica.
5. Utilización de un medio de suspensión de hematíes reactivo, según la reivindicación 1, caracterizado porque el medio de suspensión comprende una combinación de aminoácidos alifáticos.
6. Utilización de un medio de suspensión de hematíes reactivo, según la reivindicación 5, caracterizado porque el medio
de suspensión comprende una combinación de los aminoácidos alifáticos: Glicina, L-Alanina, L-Valina, L-Leucina y L-Isoleucina.
7. Utilización de un medio de suspensión de hematíes reactivo, según la reivindicación 1, caracterizado porque el medio de suspensión comprende una combinación de aminoácidos alifáticos, aminoácidos aromáticos y aminoácidos que 25 contienen azufre.
8. Utilización de un medio de suspensión de hematíes reactivo, según la reivindicación 7, caracterizado porque el medio de suspensión comprende una combinación de aminoácidos alifáticos y de los aminoácidos: L-Fenilalanina, L-Tirosina, L-Triptófano, L-Metionina y L-Cisteína.
9. Utilización de un medio de suspensión de hematíes reactivo, según la reivindicación 1, caracterizado porque el medio de suspensión comprende una combinación de los aminoácidos: L-Valina, L-Metionina, L-Leucina, L-Isoleucina.
10. Utilización de un medio de suspensión de hematíes reactivo, según la reivindicación 1, caracterizado porque el medio 35 de suspensión comprende una combinación de aminoácidos hidrofóbicos y hidorofílicos.
11. Utilización de un medio de suspensión de hematíes reactivo, según la reivindicación 1, caracterizado porque el medio de suspensión comprende una combinación de aminoácidos alifáticos y de aminoácidos polares sin carga, cargados positivamente y cargados negativamente.
12. Utilización de un medio de suspensión de hematíes reactivo, según la reivindicación 11, caracterizado porque el medio de suspensión comprende una combinación de aminoácidos alifáticos y de los aminoácidos: L-Serina, L-Treonina, L-Cisteína, L-Metionina, L-Asparagina, L-Glutamina, L-Lisina, L-Arginina, L-Histidina, L-Aspártico y L-Glutámico.
13. Utilización de un medio de suspensión de hematíes reactivo, según la reivindicación 1, caracterizado porque el medio de suspensión comprende una combinación de aminoácidos alifáticos, polares neutros o con carga (positiva y/o negativa) y aromáticos.
14. Utilización de un medio de suspensión de hematíes reactivo, según la reivindicación 1, caracterizado porque el medio 50 de suspensión comprende una combinación de aminoácidos no polares y polares.
15. Utilización, según las reivindicaciones 1-14, en la que la técnica del análisis que requiere hematíes reactivos es una técnica de análisis inmunohematológico en gel o microtubos en columna.
16. Utilización, según las reivindicaciones 1-14, en la que la técnica de análisis que requiere hematíes reactivos es una técnica inmunohematológica que requiere hematíes reactivo.
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