Formulaciones de anticuerpos anti-RSV líquidas estabilizadas.

Un proceso para la preparación de una formulación de palivizumab acuosa estable de alta concentración,

que comprende:

(a) concentrar una fracción purificada de palivizumab o un fragmento de unión al antígeno del mismo a una concentración final de aproximadamente 70 mg/ml, aproximadamente 80 mg/ml o aproximadamente 90 mg/ml, aproximadamente 100 mg/ml o 200 mg/ml, usando una membrana semipermeable y diafiltrar el fragmento de unión al antígeno de palivizumab o palivizumab concentrado en un tampón de formulación que comprende 10 mM a 50 mM de histidina y menos de 3 mM de glicina, en el que el fragmento de unión al antígeno de palivizumab o palivizumab está en una fase acuosa durante la preparación de la formulación de palivizumab acuosa estable, y en el que la formulación acuosa de alta concentración es estable a 38 ºC a 42 ºC durante al menos 60 días como se evalúa por cromatografía de exclusión por tamaño de alto rendimiento (HPSEC); o

(b) concentrar una fracción purificada de palivizumab o un fragmento de unión al antígeno del mismo a una concentración final de aproximadamente 150 mg/ml y diafiltrar el fragmento de unión al antígeno de palivizumab o palivizumab concentrado en un tampón de formulación que comprende 25 mM de histidina y 1,6 mM de glicina, en el que el fragmento de unión al antígeno de palivizumab o palivizumab está en una fase acuosa durante la preparación de la formulación de palivizumab acuosa estable, y en el que la formulación acuosa de alta concentración es estable a 2 ºC a 8 ºC durante al menos 15 meses como se evalúa por HPSEC.

Formulaciones de anticuerpos anti-RSV líquidas estabilizadas

1. INTRODUCCIÓN

La presente invención se refiere a procesos para preparar formulaciones líquidas de palivizumab® o un fragmento de unión al antígeno del mismo, formulaciones que presentan estabilidad, niveles de bajos a indetectables de fragmentación de anticuerpos, niveles de bajos a indetectables de agregación, y de muy poca a ninguna pérdida de actividad biológica (por ejemplo, eficacia terapéutica) de palivizumab® o un fragmento de unión al antígeno del mismo, incluso durante o después de largos periodos de almacenamiento. En particular, la presente invención se refiere a procesos para preparar formulaciones líquidas de palivizumab® o un fragmento de unión al antígeno del mismo, formulaciones que están sustancialmente libres de tensioactivo y/o sales inorgánicas. También se desvelan métodos para prevenir, tratar o mejorar síntomas asociados a una infección por el virus respiratorio sincitial (RSV) utilizando formulaciones líquidas de palivizumab® o un fragmento de unión al antígeno del mismo.

2. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

El virus respiratorio sincitial (RSV) es una causa frecuente de la grave enfermedad de las vías respiratorias inferiores en lactantes y niños (Feigen et al., eds., 1987, en: Textbook of Pediatric Infectious Diseases, WB Saunders, Philadelphia en las páginas 1653-1675; New Vaccine Development, Establishing Priorities, Vol. 1, 1985, National Academy Press, Washington DC en las páginas 397-409; y Ruuskanen et al., 1993, Curr. Probl. Pediatr. 23:50-79) . La naturaleza epidémica anual de la infección por el RSV es evidente en el mundo, pero la incidencia y gravedad de la enfermedad del RSV en una estación dada varían por región (Hall, C.B., 1993, Contemp. Pediatr. 10:92-110) . En regiones templadas del hemisferio norte, normalmente empieza a finales del otoño y termina a finales de la primavera (Hall, C.B., 1995, en: Mandell G.L., Bernnett J.E., Dolin R., eds., 1995, Principles and Practice of Infections Diseases. 4th ed., Churchill Livingstone, New York en las páginas 1501-1519) . Se estima que la enfermedad del RSV produce 90.000 hospitalizaciones y produce 4.500 muertes anualmente en los Estados Unidos. La infección por el RSV primaria se produce casi siempre en niños de 6 semanas a 2 años de edad y es poco común en las 4 primeras semanas de vida durante la epidemia nosocomial (Hall et al., 1979, New Engl. J. Med. 300:393396) . Se estima que el RSV produce nada menos que el 75 % de todas las bronquiolitis infantiles y hasta el 40 % de todas las neumonías pediátricas (Cunningham, C.K. et al., 1991, Pediatrics 88:527-532) . Los niños con alto riesgo de infección por el RSV incluyen prematuros (Hall et al., 1979, New Engl. J. Med. 300:393-396) y niños con displasia broncopulmonar (Groothuis et al., 1988, Pediatrics 82:199-203) , enfermedad cardíaca congénita (MacDonald et al., New Engl. J. Med. 307:397-400) , inmunodeficiencia congénita o adquirida (Ogra et al., 1988, Pediatr. Infect. Dis. J. 7:246-249; y Pohl et al., 1992, J. Infect. Dis. 165:166-169) y fibrosis quística (Abman et al., 1988, J. Pediatr. 113:826830) . La tasa de letalidad en lactantes con enfermedad cardíaca o pulmonar que se hospitalizan con infección por el RSV es del 3 %-4 % (Navas et al., 1992, J. Pediatr. 121:348-354) .

El RSV infecta a adultos, además de a lactantes y niños. En adultos sanos, el RSV produce predominantemente enfermedad de las vías respiratorias superiores. Recientemente se ha hecho evidente que algunos adultos, especialmente los ancianos, tienen infecciones sintomáticas por el RSV más frecuentemente de lo que se había informado previamente (Evans, A.S., eds., 1989, Viral Infections of Humans. Epidemiology and Control, 3rd ed., Plenum Medical Book, New York en las páginas 525-544) . También se ha informado de varias epidemias entre pacientes en residencias de ancianos y adultos jóvenes internados (Falsey, A.R., 1991, Infect. Control Hosp. Epidemiol. 12:602-608; y Garvie et al., 1980, Br. Med. J. 281:1253-1254) . Finalmente, el RSV puede producir grave enfermedad en personas inmunodeprimidas, particularmente pacientes con trasplante de médula ósea (Hertz et al., 1989, Medicina 68:269-281) .

Las opciones de tratamiento para la enfermedad por el RSV establecida están limitadas. La enfermedad por el RSV grave de las vías respiratorias inferiores frecuentemente requiere cuidado de apoyo considerable, que incluye administración de oxígeno humidificado y asistencia respiratoria (Fields et al., eds, 1990, Fields Virology, 2nd ed., Vol. 1, Raven Press, New York en las páginas 1045-1072) . El único fármaco autorizado para el tratamiento de infección es el agente antiviral ribavirina (American Academy of Pediatrics Committee on Infectious Diseases, 1993, Pediatrics 92:501-504) . Se ha mostrado que es eficaz en el tratamiento de neumonía y bronquiolitis por el RSV, modificando el curso de la enfermedad por el RSV grave en niños inmunocompetentes (Smith et al., 1991, New Engl. J. Med. 325:24-29) . Sin embargo, la ribavirina tiene varias limitaciones que incluyen alto coste, necesidad de administración prolongada de aerosoles y posible riesgo para mujeres embarazadas, además de para el personal sanitario expuesto. The American Academy of Pediatrics Committee on Infectious Diseases revisó su recomendación para el uso de ribavirina. La presente recomendación es que la decisión de usar ribavirina debe basarse en las circunstancias clínicas particulares y la experiencia del médico (American Academy of Pediatrics. Summaries of Infectious Diseases, en: Pickering L.K., ed., 2000 Red Book: Report of the Committee on Infectious Diseases. 25th ed., Elk Grove Village, IL, American Academy of Pediatrics, 2000, pp. 483-487) .

Aunque una vacuna podría prevenir la infección por el RSV, todavía no se ha autorizado ninguna para esta indicación. Un obstáculo importante para el desarrollo de vacunas es la seguridad. Una vacuna inactivada con

formalina, aunque es inmunogénica, causó inesperadamente una mayor incidencia y más grave de enfermedad de las vías respiratorias inferiores debido a RSV en lactantes inmunizados que en lactantes inmunizados con una vacuna paragripal trivalente similarmente preparada (Kim et al., 1969, Am. J. Epidemiol. 89:422-434; y Kapikian et al., 1969, Am. J. Epidemiol. 89:405-421) . Se han abandonado varios candidatos a vacunas para el RSV y otros están en desarrollo (Murphy et al., 1994, Virus Res. 32:13-36) , pero aunque se resuelven las cuestiones de seguridad, también debe mejorarse la eficacia de las vacunas. Quedan por resolver varios problemas. Se requeriría inmunización en el periodo neonatal inmediato, ya que la incidencia máxima de la enfermedad de las vías respiratorias inferiores se produce a los 2-5 meses de edad. Cabe esperar que la inmadurez de la respuesta inmunitaria neonatal, junto con altos títulos de anticuerpo para RSV maternamente adquiridos, reduzca la inmunogenicidad de la vacuna en el periodo neonatal (Murphy et al., 1988, J. Virol. 62:3907-3910; y Murphy et al., 1991, Vaccine 9:185-189) . Finalmente, la infección y enfermedad primaria por el RSV no protegen bien contra la posterior enfermedad por el RSV (Henderson et al., 1979, New Engl. J. Med. 300:530-534) .

Actualmente, el único enfoque aprobado para la profilaxis de la enfermedad por el RSV es la inmunización pasiva. La prueba inicial que sugiere una función protectora para la IgG se obtuvo de observaciones que implican anticuerpos maternos en hurones (Prince, G.A., Ph.D. diss., University of California, Los Ángeles, 1975) y seres humanos (Lambrecht et al., 1976, J. Infect. Dis. 134:211-217; y Glezen et al., 1981, J. Pediatr. 98:708-715) . Hemming et al. (Morell et al., eds., 1986, Clinical Use of Intravenous Immunoglobulins, Academic Press, London en las páginas 285-294) reconocieron la posible utilidad de anticuerpo para RSV en el tratamiento o prevención de la infección por el RSV durante estudios que involucran la farmacocinética de una inmunoglobulina intravenosa (IVIG) en recién nacidos que se sospecha que tienen septicemia neonatal. Observaron que un lactante, cuyas secreciones respiratorias dieron RSV, se recuperó rápidamente después de la infusión de IVIG. El análisis posterior del grupo de IVIG reveló un título anormalmente alto de anticuerpo neutralizante para RSV. Este mismo grupo de investigadores examinó entonces la capacidad del suero hiperinmune o inmunoglobulina, enriquecida en anticuerpo neutralizante para RSV, para proteger ratas del algodón y primates contra la infección por el RSV (Prince et al., 1985, Virus Res. 3:193-206; Prince et al., 1990, J. Virol. 64:3091-3092; Hemming et al., 1985, J. Infect. Dis. 152:1083-1087; Prince et al., 1983, Infect. Immun. 42:81-87;... [Seguir leyendo]

1. Un proceso para la preparación de una formulación de palivizumab acuosa estable de alta concentración, que comprende: 5

(a) concentrar una fracción purificada de palivizumab o un fragmento de unión al antígeno del mismo a una concentración final de aproximadamente 70 mg/ml, aproximadamente 80 mg/ml o aproximadamente 90 mg/ml, aproximadamente 100 mg/ml o 200 mg/ml, usando una membrana semipermeable y diafiltrar el fragmento de unión al antígeno de palivizumab o palivizumab concentrado en un tampón de formulación que comprende 10

mM a 50 mM de histidina y menos de 3 mM de glicina, en el que el fragmento de unión al antígeno de palivizumab o palivizumab está en una fase acuosa durante la preparación de la formulación de palivizumab acuosa estable, y en el que la formulación acuosa de alta concentración es estable a 38 ºC a 42 ºC durante al menos 60 días como se evalúa por cromatografía de exclusión por tamaño de alto rendimiento (HPSEC) ; o (b) concentrar una fracción purificada de palivizumab o un fragmento de unión al antígeno del mismo a una concentración final de aproximadamente 150 mg/ml y diafiltrar el fragmento de unión al antígeno de palivizumab o palivizumab concentrado en un tampón de formulación que comprende 25 mM de histidina y 1, 6 mM de glicina, en el que el fragmento de unión al antígeno de palivizumab o palivizumab está en una fase acuosa durante la preparación de la formulación de palivizumab acuosa estable, y en el que la formulación acuosa de alta concentración es estable a 2 ºC a 8 ºC durante al menos 15 meses como se evalúa por HPSEC.

2. El proceso de la reivindicación 1a, en el que el tampón de formulación comprende aproximadamente 20 mM a aproximadamente 30 mM de histidina, aproximadamente 23 mM a aproximadamente 27 mM de histidina, o aproximadamente 25 mM de histidina.

3. El proceso de las reivindicaciones 1a o 2, en el que el tampón de formulación comprende menos de 2 mM de glicina o 1, 6 mM de glicina.

4. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la formulación acuosa estable tiene un pH de aproximadamente 5, 0 a aproximadamente 7, 0, un pH de aproximadamente 5, 5 a aproximadamente 6, 5, o 30 un pH de aproximadamente 6, 0.

5. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el proceso comprende además la esterilización de la formulación de palivizumab acuosa estable de alta concentración.

6. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el proceso comprende la purificación del fragmento de unión al antígeno de palivizumab o palivizumab de medio acondicionado antes concentrar el fragmento de unión al antígeno de palivizumab o palivizumab y diafiltrar el fragmento de unión al antígeno de palivizumab o palivizumab concentrado en el tampón de formulación.

7. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la formulación de palivizumab acuosa estable a alta concentración se prepara como una dosificación unitaria que contiene 1 ml.

8. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones 1a o 2 a 6, en el que la formulación de palivizumab acuosa estable a alta concentración comprende al menos 85 mg/ml, al menos 90 mg/ml, al menos 95 mg/ml o al menos 100 45 mg/ml del fragmento de unión al antígeno de palivizumab o palivizumab.

9. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones 1a o 2 a 6, en el que la formulación de palivizumab acuosa estable a alta concentración comprende 95 mg/ml o 100 mg/ml de fragmento de unión al antígeno de palivizumab o palivizumab.

10. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones 1 -6, en el que la formulación de palivizumab acuosa estable a alta concentración comprende 103 ± 3 mg/ml de fragmento de unión al antígeno de palivizumab o palivizumab.

11. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la formulación de palivizumab acuosa estable a alta concentración está sustancialmente libre de tensioactivos y sales inorgánicas.

12. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la formulación de palivizumab

acuosa estable a alta concentración está sustancialmente libre de otros excipientes. 60

13. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la formulación de palivizumab acuosa estable a alta concentración no comprende manitol.

14. El proceso de la reivindicación 1b, en el que la formulación de palivizumab acuosa estable a alta concentración 65 es estable a 2 ºC a 8 ºC durante 15 meses como se evalúa por HPSEC.

15. El proceso de la reivindicación 1 (b) , en el que la formulación de palivizumab acuosa estable a alta concentración es estable .

3. 42 ºC durante 60 días como se evalúa por HPSEC.

16. El proceso de las reivindicaciones 1a .

2. 14, en el que la formulación de palivizumab acuosa estable a alta 5 concentración es estable a 2 ºC a 8 ºC durante al menos 3 años como se evalúa por HPSEC.

17. El proceso de la reivindicación 1a, en el que la formulación de palivizumab acuosa estable a alta concentración es estable a 38 ºC a 42 ºC durante no más de 120 días como se evalúa por HPSEC.

18. El proceso de las reivindicaciones 1a.

2. 13, 16 ó 17, en el que la formulación de palivizumab acuosa estable a alta concentración es estable a 20 ºC a 24 ºC durante al menos 1 año como se evalúa por HPSEC.

19. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la formulación de palivizumab

acuosa estable a alta concentración contiene no más del 3 % de agregación en peso de proteína como se mide por 15 HPSEC.

20. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que la formulación de palivizumab acuosa estable a alta concentración contiene igual o más del 98 % de la proteína total en un pico individual como se ha determinado por HSPEC y no contiene otros picos individuales que tengan más del 2 % de proteína total cada uno.

21. El proceso de una cualquiera de las reivindicaciones precedentes que no implica una etapa de secado.