Factor inducible por retinoides novedoso y usos del mismo.

Método in vitro para el diagnóstico de mielodisplasia del 5q (MDS),

leucemia mieloide aguda (ALM), cáncer de mama y melanoma, que comprende la etapa de detección del nivel de expresión de un ácido nucleico que comprende la secuencia de SEQ ID NO 1 o SEQ ID NO 2 o el nivel de expresión para una proteína que comprende la secuencia de SEQ ID NO 3.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un método in vitro según la reivindicación 1.

Antecedentes de la invención

Los retinoides tienen propiedades anticancerígenas en muchos tejidos humanos. Estos agentes han demostrado particularmente su eficiencia en el tratamiento de leucemia promielocítica aguda (APL), una enfermedad neoplásica que puede usarse como modelo de capacidad de respuesta a estos agentes. De manera importante, aunque se han identificado bien receptores de retinoides (RAR, RXR, PML-RAR) y estudiado extensamente en las dos últimas décadas, aún no se han identificado la mayor parte de sus genes diana responsables de sus propiedades antiproliferativas y anticancerígenas. Mediante un enfoque de microlineamientos, se ha identificado un nuevo gen de retinoides diana, CXXC5, que codifica para un factor nuclear que se ha caracterizado funcionalmente por primera vez y denominado RINF (Retinoid-lnducible Nuclear Factor, factor nuclear inducible por retinoides).

Parece requerirse la expresión de RINF para la diferenciación terminal de células leucémicas desencadenada por retinoides. En efecto, la expresión de RINF no sólo se correlaciona con la diferenciación inducida por retinoides de células leucémicas y con mielopoyesis inducida por citocinas de células progenitoras CD34+ normales, sino que además, interferencias de ARN de horquilla corta (ARNhc) sugieren para este gen una función reguladora tanto en mielopoyesis normal como tumoral. Además, RINF podría desempeñar un papel importante en el cáncer. De manera interesante, el gen de RINF se localiza en 5q31.3, una región pequeña delecionada a menudo en la leucemia mieloide (leucemia mieloide aguda [AML]/m¡elodisplasia [MDS]).

Se conoce CXXC55 / RINF a partir de Katoh Masuko et al., Internat. J. Oncol. vol. 25, 24, pág. 1193-1199. Este documento menciona que CXXC5 es un parálogo de CXXC4, y perteneciente a una familia de proteínas implicadas en carcinogénesis y diferenciación. Sin embargo, no se da a conocer el uso de CXXC5 en el diagnóstico de cáncer.

También se conocen ejemplos para el uso de un gen marcador de diagnóstico para cáncer. Por ejemplo, Rochefort et al., Cáncer Meatastasis, vol. 9, 199, págs. 321-331 dan a conocer catepsina D como marcador de diagnóstico para cáncer de mama. Sin embargo, de nuevo no se da a conocer el uso de CXXC5 en el diagnóstico de cáncer.

La diferenciación de células madre hematopoyéticas para dar granulocitos terminalmente maduros es un proceso de múltiples fases que requiere la expresión coordinada de genes orquestados por factores de transcripción limitados por linaje. Hasta el momento, se ha demostrado que un número relativamente pequeño de factores de transcripción es esencial para la hematopoyesis. La desregulación o mutaciones de estos factores pueden cambiar el destino celular de diferenciación a proliferación y contribuyen a la leucemia mieloide aguda (ALM), un grupo de hemopatías malignas caracterizadas por una detención de la maduración y una acumulación de blastos inmaduros en la médula ósea, la sangre y otros tejidos.

El subtipo ALM-M3 (según la clasificación franco-americano-británica (FAB)) también conocido como leucemia promielocítica aguda (APL), corresponde a la expansión clonal de blastos leucémicos bloqueados en la fase promielocítica de la diferenciación granulocítica. Esta patología cuyo distintivo genético es la translocación t(15;17), representa el primer cáncer tratado mediante una terapia basada en transcripción que restablece la diferenciación terminal. En efecto, en esta patología, las dosis farmacológicas de ácido todo-frans-retinoico (ATRA) desencadenan la maduración terminal de blastos leucémicos. A nivel molecular, se sabe que ATRA actúa como ligando para receptores del ácido retinoico (RARa, PML-RARa...) en células de APL y regula la activación transcripcional de genes diana posteriores. A pesar de extensos estudios que usan un modelo experimental, la línea celular NB4, sólo unos pocos genes diana que codifican para factores de transcripción han mostrado hasta el momento que son realmente esenciales para la diferenciación inducida por retinoides de células promielocíticas.

Sumario de la invención

Al usar un enfoque de microalineamientos, se han identificado varios genes novedosos inducidos de manera temprana por retinoides en células NB4 y que codifican para factores de transcripción implicados potencialmente en el restablecimiento de la diferenciación terminal por ATRA. Uno de estos genes inducidos mediante tratamiento con retinoides codifica para un factor nuclear que se denominó RINF (factor nuclear inducible por retinoides). La invalidación de RINF mediante interferencia de ARN suprime la acción de diferenciación de ATRA en células NB4 imponiendo un fenotipo de resistencia a retinoides y retarda la diferenciación granulocítica inducida por citocinas de células progenitoras mieloides CD34+ normales, sugiriendo de ese modo un papel regulador general y clave para RINF en la diferenciación mieloide.

Descripción detallada de la invención

En el presente documento, se describe ácido nucleico de respuesta a retinoides, caracterizado porque comprende la secuencia de SEQ ID NO 1 y SEQ ID NO 2 o un fragmento funcional o variante del mismo, o una secuencia de ADN aislada funcionalmente equivalente que puede hibridarse al mismo, o un ARNm correspondiente del mismo.

Además, se describe una proteína o un derivado de proteína, caracterizado porque comprende la secuencia de SEQ ID NO 3 (CXXC5) o un fragmento funcional o variante del mismo.

Se describe el uso de dicha proteína o una secuencia de proteína, o dicho ácido nucleico, para la fabricación de una composición farmacéutica para la prevención y/o el tratamiento de diversas enfermedades.

Además, se describe la prevención y/o el tratamiento de una enfermedad hematopoyética, o mejora de la diferenciación de una célula hematopoyética en un mamífero. Una realización adicional se refiere al deterioro o bloqueo de la diferenciación y/o a la mejora de la proliferación de una célula hematopoyética in vitro o en un mamífero.

La célula hematopoyética puede ser una célula de médula ósea, una célula de sangre periférica, una célula de sangre de cordón umbilical, y la célula puede ser o bien tumoral o bien no tumoral.

Un uso preferido es para restablecer la diferenciación en células, tales como células linfoides o células de leucemia mieloide aguda.

La enfermedad hematopoyética puede ser mielodisplasia (MDS, síndrome mielodisplásico), leucemia mieloide aguda (ALM), leucemia linfoide aguda (LLA), síndrome mieloproliferativo (MPS), leucemia mieloide crónica (CML) o leucemia linfoide crónica (CLL).

Dicho cáncer puede ser uno de los tipos de cáncer seleccionados del grupo que comprende leucemia, (mielodisplasia (MDS, síndrome mielodisplásico), leucemia mieloide aguda (ALM), leucemia linfoide aguda (ALL), síndrome mieloproliferativo (MPS), leucemia mieloide crónica (CML), leucemia linfoide crónica (CLL) y tumores sólidos (cáncer de mama, melanoma, cáncer de pulmón, cáncer de tiroides, cáncer de próstata, neuroblastoma y carcinoma renal).

Un aspecto adicional se refiere al uso de un retlnoide para activar la expresión de dicho ácido nucleico, y/o para potenciar la expresión de dicha proteína o secuencia de proteína en un mamífero que lo necesita. Una realización preferida es ATRA.

Un aspecto adicional se refiere a un método de regulación de la expresión de CXXC5 mediante vectores retrovirales o lentivirales (sobreexpresión) o mediante moléculas de ARNhc (represión).

La Invención se refiere a un método para el diagnóstico de una enfermedad neoplásica o una enfermedad hematopoyética tal como se define en la reivindicación 1. Una realización se refiere al diagnóstico de estas enfermedades, usando un anticuerpo para el diagnóstico.

Definiciones

Hematopoyesis:

Hematopoyesis (del griego antiguo: halma, sangre; poyesis, producir), algunas veces también denominada hemopoyesls, es la formación de componentes celulares de la sangre (eritrocitos, trombocitos, granulocitos (neutróflíos, basófilos, eosinófilos), monocltos, macrófagos y linfocitos (B, T y NK). Todos los componentes de la sangre celulares se derivan de células madre hematopoyéticas.

Célula hematopoyética:

Cualquier célula del tejido hematopoyético (Incluyendo célula mieloide, linfoide). Esta célula puede ser una célula madre (HSC), una célula progenitora (célula progenitora común para mieloide o linfoide), una célula comprometida o una célula de la sangre terminalmente diferenciada.

Mlelopoyesls:... [Seguir leyendo]

1. Método in vitro para el diagnóstico de mlelodlsplasla del 5q (MDS), leucemia mlelolde aguda (ALM), cáncer de mama y melanoma, que comprende la etapa de detección del nivel de expresión de un ácido nucleico

que comprende la secuencia de SEQ ID NO 1 o SEQ ID NO 2 o el nivel de expresión para una proteína que

comprende la secuencia de SEQ ID NO 3.

2. Método según la reivindicación 1, en el que se determina el nivel de expresión de dicha proteína mediante el uso de un anticuerpo.