Enriquecimiento de lipoproteínas de alta densidad pre-beta.

Un método in vitro para modificar una distribución de proteínas en un fluido,

en el que la distribución de proteínas presenta un primer estado, teniendo el primer estado lipoproteínas de densidad alta alfa y lipoproteínas de densidad alta pre-beta, que comprende las etapas de:

exponer el fluido a un disolvente en el que la exposición modifica la distribución de proteínas del primer estado a un segundo estado, teniendo el segundo estado una concentración aumentada de lipoproteínas de densidad alta prebeta en relación al primer estado y

retirar el disolvente del fluido,

en el que el disolvente comprende sevoflurano, trifluoroetano o isoflurano.

Enriquecimiento de lipoproteínas de alta densidad pre-beta.

Campo de la invención La presente invención se refiere a un método in vitro para modificar una distribución de proteínas en un fluido. Además, la presente invención se refiere a un fluido que se puede obtener por este método in vitro para uso en la mejora de una ruta de ABCA1, que cambia la reología de la sangre de un paciente con circulación sanguínea deficiente y para uso en regresión de ateroesclerosis.

Antecedentes Introducción-Hiperlipidemia y arterioesclerosis.

Las enfermedades cardiovasculares, cerebrovasculares y vasculares periféricas son responsables de una serie significativa de muertes anualmente en muchos países industrializados. Uno de los procesos patológicos más comunes que subyacen estas enfermedades es la arterioesclerosis. La arterioesclerosis se caracteriza por lesiones, que empiezan como engrosamientos grasos localizados en los aspectos internos de los vasos sanguíneos que suministran sangre al corazón, cerebro y otros órganos y tejidos por todo el cuerpo. Con el tiempo, estas lesiones ateroescleróticas pueden ulcerarse, exponiendo depósitos de placa grasos que pueden desprenderse y embolizarse en la circulación. Las lesiones ateroescleróticas obstruyen las luces de los vasos sanguíneos afectados y con frecuencia reducen el flujo sanguíneo dentro de los vasos sanguíneos, que puede dar como resultado isquemia del tejido suministrado por el vaso sanguíneo. La embolización de placas ateroescleróticas puede producir obstrucción aguda e isquemia en vasos sanguíneos distales. Dicha isquemia, prolongada o aguda, puede dar como resultado infarto o apoplejía de la que el paciente puede o no recuperarse. La isquemia similar en una arteria que suministra a una extremidad puede dar como resultado gangrena requiriendo amputación de la extremidad.

Durante algún tiempo, la comunidad médica ha reconocido la relación entre la arterioesclerosis y los niveles de lípidos dietéticos, colesterol en suero y triglicéridos en suero en el torrente circulatorio de un paciente. Se han realizado muchos estudios epidemiológicos que revelan que la cantidad de colesterol en suero en el torrente circulatorio de un paciente es un indicador significativo de enfermedad coronaria. De manera similar, la comunidad médica ha reconocido la relación entre hiperlipidemia y resistencia a la insulina, que puede conducir a diabetes sacarina. Además, se ha identificado que la hiperlipidemia y la arterioesclerosis están relacionadas con otros problemas de salud principales, tales como obesidad e hipertensión.

Transporte de colesterol.

El colesterol que circula en la sangre es soportado por lipoproteínas del plasma que transportan lípidos por toda la sangre. Las lipoproteínas del plasma se clasifican en cinco tipos de acuerdo con el tamaño: quilomicrones (que son las de mayor tamaño y densidad más baja) , lipoproteínas de densidad muy baja (VLDL, por sus siglas en inglés) , lipoproteínas de densidad intermedia (IDL, por sus siglas en inglés) , lipoproteínas de densidad baja (LDL, por sus siglas en inglés) y lipoproteínas de densidad alta (HDL, por sus siglas en inglés) (que son las menos y las más densas) . Estas lipoproteínas en plasma presentan diferencias de tamaño, densidad, diámetro, contenido en proteínas, contenido en fosfolípidos y contenido en triacilglicerol, conocido para un experto en la materia. De éstas, la lipoproteína de densidad baja (LDL) y la lipoproteína de densidad alta (HDL) son principalmente las proteínas portadoras de colesterol principales. El componente proteínico de LDL, la apolipoproteína-B (Apo B) y sus productos comprenden los elementos aterogénicos. Los niveles de LDL en plasma elevados y los niveles de HDL reducidos son reconocidos como la causa principal de enfermedad coronaria debido a que Apo B está en la concentración más alta en las partículas de LDL y no está presente en partículas de HDL. La apolipoproteína A-1 (Apo A-1) y la apolipoproteína A-2 (Apo A-2) se encuentran en HDL. Otras apolipoproteínas, tales como Apo C y sus subtipos (C-1, C-2 y C-3) , Apo D y Apo E también se encuentran en HDL. También se observan Apo C y Apo E en partículas de LDL.

Se han indicado numerosas clases principales de partículas de HDL incluyendo HDL2b, HDL2a, HDI3a, HDL3b y HDL3c (Segrest et al., Curr. Opin. Lipidol. 11: 105-115, 2.000) . Se han descrito diversas formas de partículas de HDL sobre la base de la movilidad electroforética sobre agarosa como dos poblaciones principales, una fracción principal con movilidad de -HDL y una fracción minoritaria con migración similar a VLDL (Barrans et al., Biochemica Biophysica Acta 1.300; 73-85, 1.996) . Esta última fracción se ha denominado pre-ß HDL y se pensó que estas partículas eran la subclase de partículas de HDL más eficaz para inducir eflujo de colesterol celular (Segrest et al., Curr. Opin. Lipidol.

11: 105-115, 2.000) . Las partículas pre-ß HDL se han separado además en pre-ß1 HDL, pre-ß2 HDL y pre-ß3 HDL. Estas partículas de lipoproteínas están constituidas por Apo A-1, fosfolípidos y colesterol libre. Se considera que las partículas pre-ß HDL son los primeros aceptores de colesterol libre celular y son esenciales en la transferencia de manera eventual de colesterol libre y esterificado a -HDL (Barrans et al., Biochemica Biophysica Acta 1300; 73-85, 1.996) . Las partículas pre-ß3 HDL pueden transferir colesterol a -HDL o se pueden convertir en -HDL. Estas partículas pre-ß HDL se han caracterizado en términos de su carga, masa molecular (que oscila desde 40 kDa -420 kDa) , tamaño (radio de Stoke 4 nm -15 nm) , forma (elipsoidal, discoidal o esférica) y composición química (proteína

(incluyendo Apo A-1) , colesterol libre, colesterol esterificado, fosfolípidos y la relación de colesterol libre a fosfolípidos (véase Barrans et al., Biochemica Biophysica Acta 1300; 73-85, 1.996 para detalles adicionales) ) . Los niveles de HDL se correlacionan inversamente con ateroesclerosis y arteriopatía coronaria. De acuerdo con esto, lo que se requiere es un método para disminuir o eliminar el colesterol de estas diversas partículas de HDL, especialmente las partículas pre-ß HDL, a fin de que estén disponibles para eliminar colesterol adicional de las células.

El colesterol se sintetiza por el hígado o se obtiene a partir de fuentes dietéticas. El LDL es responsable de la transferencia de colesterol del hígado a los tejidos en diferentes sitios en el cuerpo. Sin embargo, si el LDL se recoge en las paredes arteriales, experimenta oxidación producida por radicales libres de oxígeno liberados de los procesos químicos corporales e interactúa de manera perjudicial con los vasos sanguíneos. El LDL modificado produce glóbulos blancos en el sistema inmunitario para acumularse en las paredes arteriales, formando una sustancia grasa denominada placa y lesionando las capas celulares que revisten los vasos sanguíneos. El LDL modificado produce glóbulos blancos en el sistema inmunitario para recoger en las paredes arteriales, formando una sustancia grasa denominada placa y lesionando las capas celulares que revisten los vasos sanguíneos. El LDL oxidado modificado también reduce el nivel de óxido nítrico, que es responsable de relajar los vasos sanguíneos y que permite de ese modo que la sangre fluya libremente. A medida que este proceso continúa, las paredes arteriales se constriñen lentamente, dando como resultado un endurecimiento de las arterias y reduciendo de ese modo el flujo sanguíneo. La acumulación gradual de placa puede dar como resultado el bloqueo de un vaso coronario y por último un infarto.

Al contrario que LDL, los niveles de HDL en plasma altos son deseables debido a que desempeñan una función principal en el "transporte de colesterol inverso", donde el exceso de colesterol es transferido desde los sitios de los tejidos al hígado donde es catabolizado y eliminado. Los niveles de colesterol total óptimos son 200 mg/dl o por debajo con un nivel de colesterol LDL de 160 mg/dl o por debajo y un nivel de colesterol HDL de 45 mg/dl para hombres y 50 mg/dl para mujeres. Se recomiendan niveles de LDL inferiores para individuos con un historial de colesterol elevado, ateroesclerosis o arteriopatía coronaria.

Métodos de tratamiento actuales.

La hiperlipidemia se puede tratar cambiando la dieta de un paciente. Sin embargo, la dieta como un modo principal de tratamiento requiere un esfuerzo importante por parte de pacientes, médicos, nutricionistas, dietistas y otros profesionales de asistencia sanitaria y así grava de manera indeseable los recursos de los profesionales sanitarios. Otro aspecto negativo de este tratamiento es que su éxito no descansa exclusivamente en... [Seguir leyendo]

1. Un método in vitro para modificar una distribución de proteínas en un fluido, en el que la distribución de proteínas presenta un primer estado, teniendo el primer estado lipoproteínas de densidad alta alfa y lipoproteínas de densidad alta pre-beta, que comprende las etapas de:

exponer el fluido a un disolvente en el que la exposición modifica la distribución de proteínas del primer estado a un segundo estado, teniendo el segundo estado una concentración aumentada de lipoproteínas de densidad alta prebeta en relación al primer estado y retirar el disolvente del fluido, en el que el disolvente comprende sevoflurano, trifluoroetano o isoflurano.

2. El método in vitro según la reivindicación 1, en el que el disolvente comprende al menos uno de un éter o un alcohol, en particular diisopropil éter o n-butanol.

3. El método in vitro según la reivindicación 1, en el que el disolvente es una mezcla de sevoflurano y n-butanol.

4. El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la exposición del fluido al disolvente aumenta la concentración de lipoproteína de alta densidad pre-beta en relación a proteína total.

5. El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que la exposición del fluido al disolvente crea partículas de lipoproteína de alta densidad modificadas con contenido reducido en colesterol.

6. El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el fluido es sangre, plasma, suero u otra fracción de sangre adecuada.

7. El fluido que se puede obtener por el método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para uso en la mejora de una ruta de ABCA1.

8. El fluido que se puede obtener por el método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para uso en cambiar la reología de la sangre de un paciente con circulación sanguínea deficiente.

9. El fluido que se puede obtener por el método según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, para uso en la regresión de aterosclerosis.

10. El fluido para uso según cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, en el que el fluido se obtiene del mismo paciente o un paciente diferente.

11. El método in vitro según la reivindicación 2, en el que el éter es un éter que contiene C4-C8 o el alcohol es un alcohol que contiene C4-C8.

12. El método in vitro según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 u 11, en el que la mezcla del fluido con un disolvente elimina lípidos asociados a las lipoproteínas de alta densidad sin modificar sustancialmente las lipoproteínas de densidad baja.