Procedimiento para el diagnóstico diferencial de demencias.

Un procedimiento ex vivo para ayudar en el diagnóstico diferencial de degeneraciones del lóbulo frontotemporal,

que comprende la etapa de determinar, en un fluido corporal obtenido de un paciente, al menos una concentración relativa seleccionada del grupo que consiste en

- la relación de la concentración absoluta de Aβ1-38 con respecto a la concentración de β amiloide total (Aβ1- 38 %),

- la relación de la concentración absoluta de Aβ1-38 con respecto a la concentración absoluta de especies de β amiloide Aβ1-40 (Aβ1-38/Aβ1-40), y

- la relación de la concentración absoluta de Aβ1-38 con respecto a la concentración absoluta de especies de β amiloide Aβ1-42 (Aβ1-38/Aβ1-42).

Procedimiento para el diagnóstico diferencial de demencias Campo de la invención

La invención se refiere a un procedimiento ex vivo para el diagnóstico diferencial de degeneraciones del lóbulo frontotemporal que comprenden las características del preámbulo de la reivindicación 1 independiente. Particularmente, la presente invención se refiere a un procedimiento tal que es adecuado para discriminar degeneraciones del lóbulo frontotemporal de demencias relevantes del diagnóstico diferencial, tales como enfermedad de Alzheimer, y trastornos demenciales, tales como depresión. La invención también se refiere a diferenciar entre degeneraciones del lóbulo frontotemporal y demencias vasculares. Además, la invención se refiere a un uso de ciertos componentes para el diagnóstico diferencial de demencias.

Abreviaturas usadas

En esta descripción se usan las siguientes abreviaturas: péptidos A(3 = péptidos beta amiloides; Ap-SDS- PAGE/inmunotransferencia = electroforesis en gel de dodecilsulfato de sodio-poliacrilamida de amiloide beta con inmunotransferencia Western; EA = enfermedad de Alzheimer; PPA = proteína precursora de beta-amiloide; cámara CCD = cámara con dispositivo de carga acoplada; LCR = líquido cefalorraquídeo; CD = control depresivo; DGN = Deutsche Gesellschaft für Neurologie; DFT = demencia frontotemporal; DLFT = degeneración del lóbulo frontotemporal; MMSE = miniexamen del estado mental; NINCDS-ADRDA = Instituto Nacional de Trastornos Neurológicos y de la Comunicación y Accidente cerebrovascular-Asociación de la Enfermedad de Alzheimer y Trastornos relacionados; SDS = dodecilsulfato de sodio; %T = porcentaje de acrilamida; DV = demencia vascular.

Técnica anterior

El diagnóstico diferencial entre las dos formas más comunes de demencias, la enfermedad de Alzheimer (EA) y las demencias vasculares (DV), es crucial, ya que influye en la estrategia terapéutica. Hasta ahora, los diagnósticos de demencia neuroquímicos basados en LCR multiparamétricos (LCR-DDN) pueden respaldar el diagnóstico diferencial de EA y DV midiendo A(31 -42, tau total y fosfo-tau.

Van Oijen y col., 2006, informaron que los péptidos Ap en plasma pueden tener valor diagnóstico en EA incipiente.

Gurol y col., 2006, informaron que la concentración en plasma de las especies de péptidos Ap Ap1-40 mostraron relación con la carga de lesiones vasculares en deterioro cognitivo leve, EA y angiopatía amiloide cerebral. Particularmente, se ha encontrado que la concentración en plasma de Api-40 se asocia a lesiones de la sustancia blanca cerebral independientemente de posibles factores de confusión.

Un quinteto de especies de péptidos Ap, es decir, Ap 1-37/38/39/40/42, se ha caracterizado como constituyentes regulares de LCR humano (Wiltfang y col., 2002; Lewczuk y col., 2004).

En seres humanos por debajo de la edad de 65 años, la DLFT es la segunda causa más común de demencia después de la enfermedad de Alzheimer.

La EA es una enfermedad degenerativa progresiva del cerebro que produce deterioro de la memoria y demencia manifestada por confusión, desorientación visuoespacial, incapacidad para calcular, deterioro del criterio, trastornos del pensamiento y alucinaciones. Esta enfermedad cerebral degenerativa más común constituye el 70 % de todos los casos de demencia en seres humanos. La aparición es normalmente en la edad madura tardía, y la muerte normalmente se produce en 5 a 10 años.

El grupo heterogéneo de DLFT y EA comparten rasgos neuroquímicos y clínicos, aunque el aspecto temporal de los síntomas durante la evolución de la enfermedad y hallazgos neuropatológicos se diferencian sorprendentemente entre estos dos síndromes de demencia.

La deposición extracelular de péptidos beta amiloides (Ap) agregados, principalmente Ap1-42 total, como placas de amiloide es un distintivo neuropatológico de enfermedad de Alzheimer (Glenner y Wong, 1984), mientras que las placas de amiloide se encuentran raramente en DLFT (Arnold y col., 2000). Los niveles de Ap1-42 en fluidos corporales tales como líquido cefalorraquídeo (LCR) son significativamente reducidos en EA y a un menor grado en DLFT (Hulstaert y col., 1999).

Los péptidos Ap se derivan de una proteína precursora de amiloide (PPA) transmembrana, después de la escisión por dos enzimas, p- y p-secretasa (Haas y Selkoe, 1993). Ap consiste predominantemente de Api-38, Ap1-40 y Api-42. Se supone que las distintas actividades de p-secretasa son responsables de la generación de tanto péptidos Ap truncados del extremo carboxi (truncados en Ct) como alargados (alargados en Ct) como se refiere a Ap1-40 (Citrón y col., 1984). Así, puede asumirse que la medición de las diferentes especies de péptidos Ap en fluidos

corporales representa más adecuadamente cambios específicos de enfermedad del metabolismo de PPA en vez de los simples niveles de Ap-42 absolutos (Wiltfang y col., 2001, Bibl y col., 2006).

Hasta la fecha se han documentado tres conjuntos de criterios clínicos para el diagnóstico diferencial de DLFT. El conjunto de criterios más reciente se sugirió por McKhann y colaboradores (McKhann y col., 2001), principalmente como una ayuda al diagnóstico clínico rutinario. Los criterios clínicos de Neary y colaboradores (Neary y col., 1998) son más útiles cuando se basan en los tres subtipos prototípicos de DLFT, demencia frontotemporal (DFT), afasia progresiva primaria (APP) y demencia semántica (DS). Sin embargo, el diagnóstico clínico frecuentemente sigue siendo crucial en un caso determinado y biomarcadores para pruebas de diagnóstico aplicables están todavía en intensa investigación. La constelación de A(3i-42 reducidos en fluidos corporales, acompañado de una elevación de niveles de proteína tau, puede encontrarse en tanto DFT como EA (Blennow, 2004). Hasta la fecha se han publicado datos incoherentes sobre el rendimiento de estas proteínas como biomarcador aplicable para el diagnóstico diferencial de DFT y EA (Sjógren y col., 2000; Riemenschneider y col., 2002). El diagnóstico clínico de enfermedades neurodegenerativas es todavía muy difícil, específicamente con respecto a la diferenciación de EA de DFT y DFT de APP.

Se ha sugerido que las formas de A(3 pueden usarse conjuntamente con diagnóstico clínico para respaldar un diagnóstico diferencial. Los biomarcadores para ayudaren el diagnóstico clínico, tales como beta amiloide 1-42 (A(3i- 42), tau y tau fosforilada se han investigado sistemáticamente en DFT, pero no en APP.

El documento WO 2004/001421 A2 desvela un método para el diagnóstico diferencial en un mamífero de enfermedad de Alzheimer, demencia frontotemporal, demencia con cuerpos de Lewy, demencia vascular y/o depresión. El procedimiento conocido incluye detectar, en dicho mamífero, el nivel de al menos una de las siguientes proteínas: Apo-E, a-1-antitripsina, a-1-(3-glucoproteína, antitrombina III, Apo A-I, Apo A-IV, Apo J, gelsolina, haptoglobina, hemopexina, región C de la cadena de Ig a-1 (pesada), quininógeno, prostaglandina-H2 D-isomerasa, transtiretina, proteína de unión a vitamina D, Zn-a-2-glucoproteína, o de una isoforma de las mismas como biomarcador.

El documento EP 1 270 592 A1 desvela un anticuerpo monoclonal llamado mAb 1E8 que es específico para los dos primeros aminoácidos del extremo N de péptidos (3 amiloide y que es útil para determinar péptidos p amiloide Ap1-x o Ap2-x o sAPPa en una muestra del cuerpo seleccionada de líquido, homogeneizados de cerebro y plasma. Por ejemplo, el anticuerpo mAb 1E8 puede usarse para determinar una relación entre una concentración de Api-38 y una concentración de Api-40 en una muestra de líquido corporal tal. Se informa que los pacientes con enfermedad de Alzheimer se caracterizaron por un enorme aumento de Ap1-42 y Ap2-42 en comparación con controles no dementes y pacientes con degeneraciones del lóbulo frontotemporal.

Vitali y col.: Soluble amyloid p-protein is increased in frontotemporal dementia with tau gene mutations, Journal of Alzheimer's Disease 6 (2004), 45-51, informan de un aumento de Ap42 y Ap40 soluble en casos con demencia frontotemporal con parkinsonismo producido por mutaciones del gen tau (FTDP-17) en comparación con normales y cerebros en casos de demencia frontotemporal que carecen de histopatología distintiva (DLDH), ambos de los cuales tuvieron niveles comparables de especies Ap. Además, la inmunorreactividad de Ap42 intracelular aumentó significativamente en las neuronas corticales de sujetos afectados con FTDP-17.

Problema de la invención

Es el problema de la presente invención proporcionar un procedimiento ex vivo de ayuda para el diagnóstico diferencial de demencias, que incluyen demencias vasculares y/o degeneraciones del lóbulo... [Seguir leyendo]

1. Un procedimiento ex vivo para ayudar en el diagnóstico diferencial de degeneraciones del lóbulo frontotemporal, que comprende la etapa de determinar, en un fluido corporal obtenido de un paciente, al menos una concentración relativa seleccionada del grupo que consiste en

- la relación de la concentración absoluta de A(31 -38 con respecto a la concentración de (3 amiloide total (Ap1- 38 %),

- la relación de la concentración absoluta de A(31 -38 con respecto a la concentración absoluta de especies de (3 amiloide A(31 -40 (A(31-38/A(31-40), y

- la relación de la concentración absoluta de A(31 -38 con respecto a la concentración absoluta de especies de (3 amiloide A(31 -42 (A(31-38/A(31-42).

2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que dicho fluido corporal es una muestra de sangre.

3. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que dicha muestra de sangre es una muestra de plasma sanguíneo.

4. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, que comprende además la etapa de enriquecer péptidos (3 amiloides del fluido corporal usando un anticuerpo para péptido (3 amiloide.

5. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que dicha concentración relativa de A(31 -38 seleccionada del grupo que consiste en

- A(31 -38 %, y

- A(31 -38/A(31 -40,

que es superior a un valor umbral, es indicativa de no degeneración del lóbulo frontotemporal en el paciente.

6. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que

- A(31 -38 % que es inferior a un valor umbral o A(31 -38/A(31 -40 que es inferior a un valor umbral, y

- la concentración absoluta de A(31 -38 que es inferior a un valor umbral, o Api-38/Ap1-42 que es inferior a un valor umbral, o la relación de la concentración absoluta de Ap1-40 con respecto a la concentración absoluta de especies de p amiloide Api-42 (Ap1-40/Api-42) que es inferior a un valor umbral, o la relación de la concentración absoluta de Api-42 con respecto a la concentración total de p amiloide (Api-42 %) que es superior a un valor umbral,

es indicativo de degeneración del lóbulo frontotemporal en el paciente.

7. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en el que

- Ap1 -38/Ap1 -42 que es inferior a un valor umbral, y

- Ap1-40 % que es superior a un valor umbral, o Api-37 % que es inferior a un valor umbral, o Ap1-37/Ap1-42 que es inferior a un valor umbral, o Ap1-37/Api-40 que es inferior a un valor umbral, o la concentración absoluta de Api -37 que es inferior a un valor umbral,

es indicativo de degeneración del lóbulo frontotemporal en el paciente.

8. Un uso de componentes para determinar la concentración de Ap1-38 en un fluido corporal para ayudar en el diagnóstico diferencial ex vivo de degeneraciones del lóbulo frontotemporal.

9. El uso según la reivindicación 8, en el que dichos componentes para determinar la concentración de Ap1-38 son anticuerpos.

10. El uso según las reivindicaciones 8 o 9, que comprende además el uso de un anticuerpo para péptidos p amiloides para enriquecer péptidos p amiloides del fluido corporal.

11. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10, en el que dichos componentes para determinar la concentración de Api-38 permiten determinar la concentración de Api-38 como una concentración relativa.

12. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 8 a 11, en el que dichos componentes para determinar la concentración de Api-38 permiten determinar al menos un concentración relativa de Ap1-38 seleccionada del grupo que consiste en

- la relación de la concentración absoluta de Api-38 con respecto a la concentración de péptido p amiloide total en el fluido corporal (Ap1-38 %),

- la relación de la concentración absoluta de Api-38 con respecto a la concentración absoluta de las especies de péptido p amiloide Ap1-40 en el fluido corporal (Api -38/Api -40), y

- la relación de la concentración absoluta de Api-38 con respecto a la concentración absoluta de las especies

de péptido (3 amiloide Ap1-42 en el fluido corporal (A|31 -38/A(31 -42).

13. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 12, que comprende el uso de componentes para determinar al menos una concentración adicional seleccionada del grupo que consiste en:

- la concentración absoluta de A(31 -37,

- la concentración absoluta de A(31 -38,

- la concentración absoluta de A(31 -40,

- la concentración absoluta de A(31 -42,

- la relación de la concentración absoluta de A|31 -37 con respecto a la concentración total de p amiloide (Ap1-

37 %),

- la relación de la concentración absoluta de Ap1-40 con respecto a la concentración total de p amiloide (Ap1- 40 %),

- la relación de la concentración absoluta de Api-42 con respecto a la concentración total de p amiloide (Ap1- 42 %)

- la relación de la concentración absoluta de Api-37 con respecto a la concentración absoluta de especies de p amiloide Ap1-40 (Api-37/Api-40),

- la relación de la concentración absoluta de Api-37 con respecto a la concentración absoluta de especies de p amiloide Ap1-42 (Ap1 -37/Api -42), y

- la relación de la concentración absoluta de Ap1-40 con respecto a la concentración absoluta de especies de p amiloide Ap1-42 (Ap1-40/Api-42).

14. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 13, que comprende el uso de componentes para indicar que la concentración seleccionada del grupo que consiste en:

- la concentración absoluta de Ap1 -38,

- la relación de la concentración absoluta de Ap1-38 con respecto a la concentración total de p amiloide (Api- 38%),

- la relación de la concentración absoluta de Api-38 con respecto a la concentración absoluta de especies de p amiloide Api -40 (Api -38/Api -40),

- la relación de la concentración absoluta de Api-38 con respecto a la concentración absoluta de especies de p amiloide Api-42 (Api-38/Api-42),

- la concentración absoluta de Ap1 -37,

- la relación de la concentración absoluta de Api-37 con respecto a la concentración total de p amiloide (Api-

37 %),

- la relación de la concentración absoluta de Ap1-37 con respecto a la concentración absoluta de especies de p amiloide Api -40 (Api -37/Api -40),

- la relación de la concentración absoluta de Ap1-37 con respecto a la concentración absoluta de especies de p amiloide Api-42 (Api -37/Api -42),

- la relación de la concentración absoluta de Api-40 con respecto a la concentración total de p amiloide (Api- 40 %), y

- la relación de la concentración absoluta de Ap1-40 con respecto a la concentración absoluta de especies de p amiloide Api-42 (Api -40/Api -42),

es superior o inferior a un valor umbral.

15. El uso según las reivindicaciones 13 o 14, en el que dichos componentes para determinar al menos una concentración adicional son anticuerpos.