Procedimiento de diagnóstico de una esclerodermia sistémica o de una hipertensión arterial pulmonar.

Procedimiento in vitro de detección de una esclerodermia sistémica (ScS) o de una hipertensión arterial pulmonar asociada a una esclerodermia (HTAP-ScS) o de una hipertensión arterial pulmonar idiopática (HTAPi) en un sujeto,

que comprende la determinación de la presencia y/o de la cantidad de al menos un anticuerpo elegido del grupo constituido por los anticuerpos anti-galectina-1, anti-proteína FAM10A4, anti-fosfoproteína 1 inducida por el estrés, y anti-precursor de la proteína de 78 kDa regulada por la glucosa, en una muestra biológica procedente de un paciente,

siendo indicativa de una ScS o de una HTAPi, la presencia de un anticuerpo anti-precursor de la proteína de 78 kDa regulada por la glucosa;

siendo indicativa de una HTAP-ScS o de una HTAPi, la presencia de un anticuerpo anti-proteína FAM10A4;

siendo indicativa de una ScS, la presencia de un anticuerpo anti-galectina-1;

o siendo indicativa de una ScS, de una HTAP-ScS o de una HTAPi, la presencia de una cantidad superior a un valor control de un anticuerpo anti-fosfoproteína 1 inducida por el estrés.

Procedimiento de diagnóstico de una esclerodermia sistémica o de una hipertensión arterial pulmonar La invención se refiere a un procedimiento in vitro de detección de una esclerodermia sistémica (ScS) o de una hipertensión arterial pulmonar asociada a una esclerodermia (HTAP-ScS) , o de una hipertensión arterial pulmonar idiopática (HTAPi) en un sujeto, que comprende la determinación de la presencia y/o de la cantidad de anticuerpos 5 en una muestra biológica procedente de un paciente, como se describe en las reivindicaciones.

Estado de la técnica La esclerodermia sistémica (ScS) es una enfermedad rara que se caracteriza por la aparición de lesiones fibrosas que afectan a la piel y a ciertas vísceras como el pulmón, el tubo digestivo y el corazón, así como una hiperreactividad vascular que es causa de un fenómeno de Raynaud y de manifestaciones severas como la crisis 10 renal y la hipertensión arterial pulmonar (HTAP) . La fisiología de la ScS es compleja y parcialmente comprendida. La aparición de una ScS resulta de la disfunción de tres tipos de células, los linfocitos B y T responsables de una desregulación inmunitaria, las células endoteliales responsables de anomalías vasculares y los fibroblastos responsables de lesiones fibrosas.

El noventa por ciento de los pacientes esclerodérmicos tienen anticuerpos antinucleares (AAN) en su suero. Ciertos 15 auto-anticuerpos son muy específicos de la ScS y mutuamente excluyentes, como los anticuerpos anti-topoisomerasa I (anti-SCI-70) (ATA) (Tamby et al., 2007) , presentes con mayor frecuencia en las formas difusas de la enfermedad, los anticuerpos anti-centrómero (ACA) , asociados en general a las formas cutáneas limitadas (Moroi et al., 1980) , o los anticuerpos anti-ARN polimerasa III asociados a las formas cutáneas difusas y a la aparición de una crisis renal (Bunn et al., 1998) . Los AAN no tienen ningún papel patógeno demostrado en el curso de la ScS 20 pero su detección constituye una ayuda para el diagnóstico precoz de la ScS. Otros auto-anticuerpos no específicos de la ScS como los anticuerpos anti-ribonucleoproteína, anti-SSA y anti-SSB, los anticuerpos anti-cardiolipina o el factor reumatoide se encuentran algunas veces en el curso de la ScS. Los anticuerpos anti-células endoteliales (AECA) se pueden detectar en el 28 a 54 % de los pacientes esclerodérmicos. Estos autoanticuerpos son capaces de inducir la expresión de moléculas de adhesión y de provocar una apoptosis de las células endoteliales en 25 presencia de células citotóxicas naturales (" natural killer ") (Bordron et al., 1998) . Las dianas de los AECA en el curso de la ScS todavía son mal conocidas y a fecha de hoy no se ha identificado el antígeno específico de la célula endotelial. En cambio, la ADN topoisomerasa 1 (Garcia de la Pena-Lefebvre et. al., 2004) y la proteína centromérica B (Servettaz et al., 2006) han sido identificadas como las dianas de los AECA en los enfermos esclerodérmicos. Los anticuerpos anti-fibroblastos (AFA) han sido identificados en los pacientes esclerodérmicos. Estos anticuerpos son 30 capaces de activar los fibroblastos, de aumentar la expresión de moléculas de adhesión como la molécula-1 de adhesión inter-celular (ICAM) y pro-inflamatorios (aumento de los niveles de ARNm, de IL-1α, de IL-1β y de IL-6) así como la síntesis de colágeno (Chizzolini et al., 2002) . Se ha demostrado recientemente que los AFA se pueden fijar sobre la topoisomerasa 1 adsorbida en la superficie de los fibroblastos (Henault et al., 2006) . En el ensayo ELISA (ensayo de inmunoabsorbente ligado a enzimas) , los AFA se han encontrado en el 30 % de los pacientes que 35 presentan una HTAP asociada a una ScS (Tamby et al., 2006) .

La hipertensión arterial pulmonar (HTAP) es una patología rara responsable de la aparición de una descompensación cardíaca derecha que puede llevar a la muerte. El diagnóstico de HTAP se establece mediante un cateterismo derecho que permite la medida de la presión arterial pulmonar media superior o igual a 25 mm de Hg en reposo en ausencia de elevación de la presión capilar pulmonar (Rubin, 1997) . La aparición de una HTAP es la 40 consecuencia de una obstrucción crónica de las pequeñas arterias pulmonares secundaria a la proliferación de células endoteliales, de células musculares lisas vasculares y de fibroblastos (Dorfmuller et al, 2003) . En particular, la neo-muscularización de las pequeñas arterias pulmonares periféricas normalmente no musculares es una característica común a todas las formas de remodelado asociadas a la HTAP.

La HTAP puede ser idiopática, es decir esporádica, pero también familiar, asociada a la toma de anorexígenos 45 (dexfenfluramina) , o asociada a un cierto número de patologías incluyendo la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) . La HTAP puede estar asociada también a colagenosis como la ScS (Hachulla et al, 2005) , el síndrome de Sharp (o conectivitis mixta) , o más raramente el lupus eritematoso sistémico. Aproximadamente 8 a 12 % de los pacientes esclerodérmicos desarrollan una HTAP, causa de una mortalidad elevada. Además, en el curso de la HTAP idiopática, se encuentran de vez en cuando señales de auto-inmunidad, a 50 saber anticuerpos anti-nucleares o anticuerpos anti-tiroglobulina. La presencia de anticuerpos anti-células endoteliales (Tamby et al, 2005) y de anticuerpos anti-fibroblastos (Tamby et al, 2006) ha sido descrita en el curso de la HTAP idiopática o asociada a la ScS. Sin embargo, no ha sido estudiado el valor predictivo de estos anticuerpos en la aparición de la HTAP y el papel potencial de los fenómenos auto-inmunes en la patogenia de la HTAP idiopática permanece incierto (Mouthon et al, 2005) . 55

En la mayor parte de los casos, la HTAP se detecta cuando el paciente presenta una disnea de grado III o IV. Cuando el paciente es atendido por una enfermedad crónica como la ScS, la HTAP se detecta por una ecografía cardíaca anual. La solicitud de patente US 2002/0009749 describe la detección de anticuerpos anti-HMG-1 (proteína 1 del grupo de alta movilidad) y anti-HMG-2 para el diagnóstico de enfermedades auto-inmunes, entre otras la esclerodermia sistémica. Terrier et al., han identificado los antígenos de anticuerpos anti-fibroblastos presentes en los pacientes afectados de hipertensión arterial pulmonar (Terrier et al., 2008) . Sigue haciendo falta un ensayo sencillo y fiable para la detección de una ScS y/o de una HTAP, que sería valioso para un diagnóstico lo más precoz posible y que permitiría poner en marcha rápidamente estrategias terapéuticas para mejorar el estado del paciente y sus posibilidades de sobrevivir. La invención tiene por objeto un ensayo de ese tipo. 5

Resumen de la invención La invención proporciona ahora un procedimiento in vitro de detección de una esclerodermia sistémica (ScS) o de una hipertensión arterial pulmonar asociada a una esclerodermia (HTAP-ScS) o de una hipertensión arterial pulmonar idiopática (HTAPi) en un sujeto, que comprende la determinación de la presencia y/o de la cantidad de al menos un anticuerpo elegido del grupo constituido por los anticuerpos anti-galectina-1, anti-proteína FAM10A4, anti-10 fosfoproteína 1 inducida por el estrés, y anti-precursor de la proteína de 78 kDa regulada por la glucosa, en una muestra biológica procedente de un paciente,

siendo indicativa de una ScS o de una HTAPi, la presencia de un anticuerpo anti-precursor de la proteína de 78 kDa regulada por la glucosa;

siendo indicativa de una HTAP-ScS o de una HTAPi, la presencia de un anticuerpo anti-proteína FAM10A4; 15

siendo indicativa de una ScS, la presencia de un anticuerpo anti-galectina-1;

o siendo indicativa de una ScS, de una HTAP-ScS o de una HTAPi, la presencia de una cantidad superior a un valor control de un anticuerpo anti-fosfoproteína 1 inducida por el estrés.

Descripción detallada de la invención La esclerodermia sistémica (ScS) y la hipertensión arterial pulmonar (HTAP) se caracterizan las dos por la presencia 20 de autoanticuerpos (AAc) en el suero de los pacientes, en particular AAc dirigidos contra las células endoteliales y los fibroblastos. Antes de los trabajos presentados a continuación, ningún AAc dirigido contra las células musculares lisas vasculares (CMLV) había sido puesto en evidencia. La caracterización por los inventores de dichos anticuerpos dirigidos contra las CMLV es de una importancia capital, especialmente teniendo en cuenta el papel clave de estas células en la fisiopatología de la ScS, con o sin HTAP, y de la HTAPi. 25

Los inventores se han propuesto identificar los anticuerpos dirigidos contra las CMLV y caracterizar las dianas antigénicas. Para hacer esto, los inventores han utilizado las CMLV... [Seguir leyendo]

1. Procedimiento in vitro de detección de una esclerodermia sistémica (ScS) o de una hipertensión arterial pulmonar asociada a una esclerodermia (HTAP-ScS) o de una hipertensión arterial pulmonar idiopática (HTAPi) en un sujeto, que comprende la determinación de la presencia y/o de la cantidad de al menos un anticuerpo elegido del grupo constituido por los anticuerpos anti-galectina-1, anti-proteína FAM10A4, anti-fosfoproteína 1 inducida por el estrés, y 5 anti-precursor de la proteína de 78 kDa regulada por la glucosa, en una muestra biológica procedente de un paciente,

siendo indicativa de una ScS o de una HTAPi, la presencia de un anticuerpo anti-precursor de la proteína de 78 kDa regulada por la glucosa;

siendo indicativa de una HTAP-ScS o de una HTAPi, la presencia de un anticuerpo anti-proteína FAM10A4; 10

siendo indicativa de una ScS, la presencia de un anticuerpo anti-galectina-1;

o siendo indicativa de una ScS, de una HTAP-ScS o de una HTAPi, la presencia de una cantidad superior a un valor control de un anticuerpo anti-fosfoproteína 1 inducida por el estrés.

2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el cual la muestra biológica es una muestra de sangre o de suero.

3. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 o 2, en el cual la cantidad de dicho al menos un anticuerpo se 15 determina por un inmunoensayo.

4. Procedimiento según la reivindicación 3, en el cual el inmunoensayo es una valoración ELISA.

5. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 4, en el cual el paciente es un ser humano.

6. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 5, en el cual el paciente sufre de una esclerodermia sistémica, con o sin hipertensión arterial pulmonar asociada. 20

7. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 5, en el cual el paciente sufre de una hipertensión arterial pulmonar idiopática.

8. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, en el cual la hipertensión arterial pulmonar está asociada a una hipertensión portal, a una cardiopatía congénita, o a una infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) , o es una hipertensión pulmonar post-embólica. 25

9. Procedimiento según una de las reivindicaciones 1 a 6, en el cual el paciente es un sujeto predispuesto a desarrollar una esclerodermia sistémica o una hipertensión arterial pulmonar asociada a una esclerodermia o una hipertensión arterial pulmonar idiopática 10. Procedimiento según la reivindicación 9, en el cual el sujeto es portador de una o varias mutaciones en el gen que codifica BMPRII, endoglina o ALK1. 30

11. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, comprendiendo dicho al menos un anticuerpo, un anticuerpo anti-galectina 1.

12. Procedimiento según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, comprendiendo dicho al menos un anticuerpo, un anticuerpo anti-fosfoproteína 1 inducida por el estrés.