Compuestos de éter de fosfolípido fluorescentes, composiciones y procedimientos de uso.

Un compuesto de éster de fosfolípido fluorescente de acuerdo con la fórmula I:

**Fórmula**

o la fórmula II:**Fórmula**

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; en la que

n es un número entero entre 7 y 23;

Y es H, Me o Et;

Z es un fluoróforo seleccionado del grupo que consiste en:**Fórmula**

en la que

R se selecciona del grupo que consiste en H, Me, Et, Br y I.

Q se selecciona del grupo que consiste en N, CH, C-Me, C-Et, C-CF3, C-Ph;

R1 se selecciona del grupo que consiste en**Fórmula**

L se selecciona del grupo que consiste en O, S, NH y NMe;

R2 se selecciona del grupo que consiste en H, Me, y Et;

R3 se selecciona del grupo que consiste en H, OMe, Oet y NMe2;

R4 se selecciona del grupo que consiste en H, Me, Et, Ph o p-metoxi-fenilo; y

m es un número entero de 1 a 5; y

X se selecciona del grupo que consiste en**Fórmula**

un compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de fórmula:**Fórmula**

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o

un compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de fórmula:**Fórmula**

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Compuestos de éter de fosfolípido fluorescentes, composiciones y procedimientos de uso Campo de la invención

La invención se refiere generalmente a compuestos de éter de fosfolípido fluorescente selectivos de tumor (PLE), a composiciones que comprenden estos compuestos y al uso de estos compuestos y composiciones en diversas aplicaciones de diagnóstico.

Antecedentes

Se sabe que la detección precoz de tumores conduce a la mejora de la supervivencia a largo plazo. Por lo tanto, el desarrollo de técnicas de diagnóstico de tumores más selectivas y no invasivas es una alta prioridad. Las imágenes fluorescentes han probado que son una herramienta eficaz para la investigación del cáncer preclínica, el descubrimiento de fármacos antitumorales y desarrollos farmacológicos al proporcionar imágenes de la biodistribución de los marcadores fluorescentes. Marcando regiones de interés con sondas moleculares fluorescentes específicas de tumor, esta técnica permite la visualización de la ubicación y las geometrías de las zonas malignas.

Las barreras fundamentales a la imagen óptica en el tejido son una dispersión alta de la luz, autofluorescencia y alta absorción por la hemoglobina en la banda de media visible. El uso de la luz roja y en el infrarrojo cercano es la etapa más básica hacia la mejora de la imagen. El desplazamiento a longitudes de onda del infrarrojo cercano (700-1100 nm) confiere otras ventajas para la formación de imágenes de tejidos de mamíferos: se excita menos fluorescencia de fondo, ya que la autofluorescencia en los tejidos se excita principalmente mediante luz en el ultravioleta cercano y luz azul; y menos autofluorescencia interfiere, ya que la fluorescencia de la mayoría de los tejidos de mamíferos alcanza un pico en el amarillo y es muy baja más allá de 650 nm. (Ballou B, Ernst LA, Waggoner AS. Curr. Med. Chem., 2005, 12, 795 - 805; Fabian J, Nakazumi H, Matsuoka M. Chem. Rev., 1992, 92, 1197 - 1226). El uso de la fluorescencia en el IR cercano mejora en muchos aspectos la realización de ensayos biológicos basados en fluorescencia. Por ejemplo, la fluorescencia en el IR cercano proporciona: 1) reducción significativa de la autofluorescencia de fondo; 2) la penetración de la luz más profunda; 3) fotodaño mínimo al tejido biológico; 4) una menor sensibilidad a las propiedades ópticas de los medios. Un buen marcador fluorescente debe tener un gran coeficiente de extinción, rendimiento cuántico fluorescente alto y alta fotoestabilidad.

La endoscopia, en particular, la colonoscopia y la broncoscopia, se utiliza para encontrar un crecimiento anormal y tumores que sobresalen en el lumen. Un dispositivo, llamado endoscopio, se inserta en una cavidad corporal. Tradicionalmente, los endoscopios utilizan un canal de la luz del día, es decir, el observador ve todo hallazgo en la longitud de onda de la luz natural.

Últimamente, los nuevos endoscopios tienen la capacidad de utilizar varios canales, es decir, un canal de luz del día y uno o más canales adicionales en otras longitudes de onda de luz. Estos canales adicionales se utilizan para monitorizar la fluorescencia de origen natural o la fluorescencia de un colorante que se inyectó en el cuerpo o se pulverizó sobre la superficie de la cavidad corporal. Uno de los posibles canales está en el área del NIR (infrarrojo cercano). La ventaja de la zona NIR es que la absorción de la luz de iones de la zona NIR (por lo general 600 - 800 nm) es mínima, y la fluorescencia se puede detectar a una profundidad de unos pocos milímetros a casi un centímetro bajo la superficie de la cavidad corporal. Se cree que esto tiene ventajas de detectar tumores y metástasis en los ganglios linfáticos en órganos tales como el colon y los pulmones.

De acuerdo con lo anterior, existe la necesidad de estudiar más a fondo los usos de la fluorescencia de infrarrojo cercano en la detección de neoplasias malignas durante el proceso endoscópico.

El documento US 2008/075660 se publicó el 27 de marzo de 2008, y se titula: "Fluorescencia en el infrarrojo cercano utilizando colorantes análogos a éter de fosfolípido en aplicaciones endoscópicas".

Hornillos V., et al., Bloorg. Med. Chem. Lett, 18(24):6336 - 6339 (2008) se titular: "Síntesis de alquilfosfocolinas marcadas con BODIPY con actividad lelshmanlcida como análogos fluorescentes de miltefosina".

Sumario de la invención

La Invención se refiere generalmente a compuestos de éter de fosfolípido (PLE) fluorescentes selectivos de tumor (PLE), a composiciones que comprenden estos compuestos y al uso de estos compuestos y/o composiciones en el diagnóstico de diversas neoplasias malignas.

En un aspecto, la invención se refiere a compuestos como se define en las reivindicaciones.

En una forma de realización, la presente Invención se refiere a compuestos fluorescentes de fosfolípido de acuerdo con las fórmulas (l)-(ll):

FORMULA I

FORMULA II

en la que n es un número entero entre 7 y 23; Y es H, Me o Et;

X se selecciona del grupo que consiste en

y

Z es un fluoróforo seleccionado de los siguientes:

y

en la que

R se selecciona del grupo que consiste en H, Me, Et, Br y I.

Q se selecciona del grupo que consiste en N, CH, C-Me, C-Et, C-CF3, C-Ph R1 se selecciona del grupo que consiste en

y

L se selecciona del grupo que consiste en O, S, NH y NMe;

R2 se selecciona del grupo que consiste en H, Me, y Et;

R3 se selecciona del grupo que consiste en H, OMe, Oet y NMe2;

R4 se selecciona del grupo que consiste en H, Me, Et, Ph o p-metoxi-fenilo; y

m es un número entero de 1 a 5,

(u otros fluoróforos de carga positiva) pueden incluir también un contraion de carga negativa, tal como Cl. Los inventores también divulgan compuestos de las fórmulas (III) a (VI).

en la que

R5 se selecciona del grupo que consiste en H, Me, Et, Br y I;

R6 se selecciona del grupo que consiste en H, Me, Et, p-metoxi-fenilo, p-(W,W-dimetilamino)-fenilo y

en la que R7 se selecciona del grupo que consiste en H, Me, OMe, y Me2N.

FÓRMULA IV

en la que

n es un número entero entre 7 y 23; m es un número entero entre 0 y 4;

X se selecciona del grupo que consiste en O, S, CMe2 y C=CH2; Y se selecciona del grupo que consiste en Me, Et, Pr, i-Pr y

en la que

m es un número entero entre 0 y 4;

X se selecciona del grupo que consiste en O, S, CMe2 y C=CH2; Y se selecciona del grupo que consiste en Me, Et, Pr y i-Pr;

R8 se selecciona del grupo que consiste en

en el que n es un número entero entre 7 y 23; y Z se selecciona del grupo que consiste en:

en la que

FÓRMULA VI

n es un número entero entre 7 y 23

R9 se selecciona del grupo constituido por Me, Et y

.O

ii

h(CH2)n-OPOZ

©

Z se selecciona del grupo que consiste en:

© , /-----\ ,Me

i-CH2CH2NMe3, y ( , N ©

'' Me.

En una realización preferida, la invención se refiere a un compuesto que tiene una fórmula:

La invención también se refieren general a composiciones que comprenden los compuestos de la presente

invención.

La invención también se refiere en general a compuestos de la presente invención para su uso en varios procedimientos, incluyendo, ente otros, determinación endoscópica de la presencia de neoplasia maligna interna; determinación visual y microscópica de la presencia de lesiones malignas sobre la piel; ayuda en la selección de tejidos para biopsia en las neoplasias malignas internas y de la piel; determinación de la presencia de neoplasias malignas internas y/o de la piel durante cirugías para ayudar a realizar la biopsia y/o en la resección quirúrgica de dichas neoplasias malignas.

Breve descripción de las figuras

La FIG. 1a representa células de melanoma de piel (A375) tras 24 horas de incubación con CLR1501;

La FIG. 1b representa células de piel normales (A375)tras 24 horas de incubación con CLR1501;

La FIG. 2a representa células de melanoma de piel (A375)tras 0,5 horas de incubación con CLR1501;

La FIG. 2b representa células de melanoma de piel (A375)tras 1 horas de incubación con CLR1501;

La FIG. 2c representa células de adenocarcinoma colorrectal (HCT-116) tras 24 horas de incubación con CLR1501;

La FIG.... [Seguir leyendo]

1. Un compuesto de éster de fosfolípido fluorescente de acuerdo con la fórmula I:

o la fórmula II:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; en la que n es un número entero entre 7 y 23;

Y es H, Me o Et;

Z es un fluoróforo seleccionado del grupo que consiste en:

en la que

R se selecciona del grupo que consiste en H, Me, Et, Br y I.

Q se selecciona del grupo que consiste en N, CH, C-Me, C-Et, C-CF3, C-Ph; R1 se selecciona del grupo que consiste en

y

L se selecciona del grupo que consiste en O, S, NH y NMe;

R2 se selecciona del grupo que consiste en H, Me, y Et;

R3 se selecciona del grupo que consiste en H, OMe, Oet y NMe2;

R4 se selecciona del grupo que consiste en H, Me, Et, Ph o p-metoxi-fenilo; y

m es un número entero de 1 a 5; y

X se selecciona del grupo que consiste en

0,. 0 j\ Me

§-CH2CH2NMe3l ^-CH2CH2CH2NMe3.andj( N®

'/ Me

un compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de fórmula:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o

un compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de fórmula:

u ©

(CH2)18-OPOCH2CH2NMe3

O*

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. El compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el compuesto es de fórmula:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

3. El compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el compuesto es de fórmula:

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

4. El compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el compuesto es de fórmula:

O

ii

©.

(CHjHb- OP OCH2CH2N Más

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

5. Una composición que comprende el compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.

6. Un compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en un procedimiento de diagnóstico mediante endoscopia de una neoplasia maligna, comprendiendo dicho procedimiento:

(a) administrar a un paciente el compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de una cualquiera de las

reivindicaciones 1 a 4;

(b) usar una primera técnica para producir una visualización de la anatomía de la región seleccionada utilizando la primera longitud de onda de un endoscopio;

(c) usar una segunda técnica para producir una visualización de la distribución de la fluorescencia producida por el compuesto de éter de fosfolípido fluorescente; y

(d) comparar la visualización de la anatomía de la región seleccionada por la primera longitud de onda con la visualización de la distribución de la fluorescencia por la segunda longitud de onda producida por el compuesto de éter de fosfolípido fluorescente distinguiendo de este modo un tejido benigno del tejido maligno.

7. Un compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en un procedimiento de selección de un tejido de biopsia en una región que se sospecha que tiene una neoplasia maligna, comprendiendo dicho procedimiento:

(a) administrar a un paciente un compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4;

(b) usar una primera técnica para producir una visualización de la anatomía de dicha región sospechosa de tener dicha neoplasia maligna utilizando la primera longitud de onda de un endoscopio;

(c) usar una segunda técnica para producir una visualización de la distribución de la fluorescencia producida por el compuesto de éter de fosfolípido fluorescente; y

(d) comparar la visualización de la anatomía de dicha región sospechosa de tener dicha neoplasia maligna por la primera longitud de onda con la visualización de la distribución de la fluorescencia por la segunda longitud de onda producida por el compuesto de éter de fosfolípido fluorescente distinguiendo de este modo un tejido benigno del tejido maligno y permitiendo elegir el tejido de biopsia.

8. Un compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso de acuerdo con la reivindicación 6 o la reivindicación 7, en el que dicha neoplasia maligna se determina en un órgano corporal seleccionado del grupo que consiste en colon, recto, intestino delgado, esófago, estómago, duodeno, útero, páncreas y el conducto billar común, bronquios, esófago, boca, senos, pulmón, vejiga urinaria, riñón, cavidad abdominal y cavidad torácica.

9. Un compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en un procedimiento para diagnosticar una neoplasia maligna de la piel, comprendiendo dicho procedimiento (a) administrar a un paciente el compuesto fosfolípido fluorescente de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4; (b) la visualizar la anatomía de la piel; y (c) distinguir un tejido benigno de un tejido maligno, en el que el tejido maligno muestra significativamente más fluorescencia causada por el compuesto de fosfolípido fluorescente.

10. Un compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en un procedimiento para determinar márgenes de tejido maligno durante una resección quirúrgica de dicho tejido maligno, comprendiendo dicho procedimiento (a) administrar a un paciente sometido a dicha resección quirúrgica el compuesto fosfolípido fluorescente de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4; (b) visualizar el tejido maligno; (c) determinar los márgenes de dicho tejido maligno, en el que el tejido maligno muestra significativamente más fluorescencia causada por el compuesto de fosfolípido fluorescente, y en el que los márgenes de la región más altamente fluorescente corresponden a los márgenes de dicho tejido maligno.

11. Un compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en un procedimiento para determinar la presencia de células madre malignas residuales en un paciente sometido, a terapia para el cáncer, comprendiendo dicho procedimiento (a) administrar a un paciente sometido a dicha terapia para el cáncer el compuesto de fosfolípido fluorescente de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4; (b) visualizar el tejido que se determinó que era maligno antes de dicha terapia para el cáncer; y (c) evaluar la acumulación del compuesto de fosfolípido fluorescente en dicho tejido, en el que una acumulación de dicho compuesto fosfolípido fluorescente en dicho tejido indica una posible presencia de células madre malignas residuales.

12. Un compuesto de éter fosfolípido fluorescente de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en un procedimiento para determinar la presencia de células madre malignas residuales en un paciente sometido a terapia para el cáncer, comprendiendo dicho procedimiento (a) la escisión de una muestra patológica de un paciente sometido a dicha terapia para el cáncer; b) incubar dicha muestra patológica con el compuesto de fosfolípido fluorescente de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4; y (c) visualizar la distribución de dicho compuesto fosfolípido fluorescente en dicha muestra patológica; en la que una acumulación de dicho compuesto fosfolípido fluorescente en dicha muestra indica una posible presencia de células madre malignas residuales.

13. Un compuesto de éter fosfolípido fluorescente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en un

procedimiento de vigilancia de la respuesta a una terapia tumoral, comprendiendo dicho procedimiento (a) administrar a un paciente antes de dicha terapia tumoral el compuesto fosfolípido fluorescente de acuerdo con una cualquiera de las las reivindicaciones 1 a 4; (b) proporcionar dicha terapia tumoral; (c) proporcionar el compuesto fosfolípido fluorescente de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 después de la terapia tumoral; y (d) 5 evaluar la diferencia en la acumulación del compuesto fosfolípido fluorescente de la etapa (a) y la etapa (c), en el que una mayor acumulación del compuesto de fosfolípidos en la etapa (a) en comparación con una menor acumulación en la etapa (c) indica una respuesta positiva al tratamiento y / o una metodología de tratamiento eficaz.

14. Uso de un compuesto de éter de fosfolípido fluorescente de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para la fabricación de un medicamento para su uso en un procedimiento como se define en una cualquiera de las 10 reivindicaciones 6 a 13.