Composiciones para aumentar la estabilidad y actividad de polipéptidos, y métodos relacionados.
Tipo: Patente Internacional (Tratado de Cooperación de Patentes). Resumen de patente/invención. Número de Solicitud: PCT/IB2010/003127.
Solicitante: Solis BioDyne OÜ.
Nacionalidad solicitante: Estonia.
Dirección: Riia 185a 51014 Tartu ESTONIA.
Inventor/es: KAHRE,OLEV, ARTMA,KADRI, KAHRE,TIINA.
Fecha de Publicación: .
Clasificación Internacional de Patentes:
- C07K14/00 QUIMICA; METALURGIA. › C07 QUIMICA ORGANICA. › C07K PEPTIDOS (péptidos que contienen β -anillos lactamas C07D; ipéptidos cíclicos que no tienen en su molécula ningún otro enlace peptídico más que los que forman su ciclo, p. ej. piperazina diones-2,5, C07D; alcaloides del cornezuelo del centeno de tipo péptido cíclico C07D 519/02; proteínas monocelulares, enzimas C12N; procedimientos de obtención de péptidos por ingeniería genética C12N 15/00). › Péptidos con más de 20 aminoácidos; Gastrinas; Somatostatinas; Melanotropinas; Sus derivados.
- C12N9/00 C […] › C12 BIOQUIMICA; CERVEZA; BEBIDAS ALCOHOLICAS; VINO; VINAGRE; MICROBIOLOGIA; ENZIMOLOGIA; TECNICAS DE MUTACION O DE GENETICA. › C12N MICROORGANISMOS O ENZIMAS; COMPOSICIONES QUE LOS CONTIENEN; PROPAGACION, CULTIVO O CONSERVACION DE MICROORGANISMOS; TECNICAS DE MUTACION O DE INGENIERIA GENETICA; MEDIOS DE CULTIVO (medios para ensayos microbiológicos C12Q 1/00). › Enzimas, p. ej. ligasas (6.); Proenzimas; Composiciones que las contienen (preparaciones para la limpieza de los dientes que contienen enzimas A61K 8/66, A61Q 11/00; preparaciones de uso médico que contienen enzimas A61K 38/43; composiciones detergentes que contienen enzimas C11D ); Procesos para preparar, activar, inhibir, separar o purificar enzimas.
PDF original: ES-2533536_T3.pdf
Fragmento de la descripción:
Composiciones para aumentar la estabilidad y actividad de polipéptidos, y métodos relacionados Antecedentes de la invención
Existe la necesidad en la técnica de métodos y composiciones que potencien la estabilidad de proteínas. Existe particularmente la necesidad de composiciones que potencien la estabilidad de polimerasas tales como polimerasas Taq de modo que puedan retener la actividad enzimática después de exposición a corto plazo o largo plazo a temperaturas por encima de congelación. Existe también la necesidad en la técnica de composiciones que potencien la fidelidad, sensibilidad, y rendimiento de las polimerasas. Se describen proteínas de fusión estabilizadas que tienen la cola ácida de sinucleína en Lee et al. Pharmaceutical Research 22, 1 (25) 1735-1746.
Sumario de la invención
La invención es como se define en las reivindicaciones.
Esta descripción proporciona péptidos, polipéptidos, polipéptidos de fusión, composiciones, y métodos para posibilitar la retención de la actividad de una enzima (por ejemplo, ADN polimerasa, ARN polimerasa, nucleasa, transcriptasa inversa, ADN desaminasa, ARN desaminasa, proteasa) o una proteína (por ejemplo, eritropoyetina, factor inhibidor de leucemia humana (hLIF), factor estimulador de colonias de granulocitos macrófagos (GM-CSF), insulina, factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF), leptina, bevacizumab) después de exposición a corto plazo o largo plazo a una temperatura de aproximadamente -2 2C a aproximadamente 35 2C. Los péptidos, polipéptidos, polipéptidos de fusión, o composiciones proporcionados en este documento pueden potenciar la estabilidad de una enzima o proteína a temperatura ambiente. Una enzima o proteína proporcionada en este documento puede ser cualquier proteína de unión a ácido nucleico, por ejemplo, una proteína de unión a ADN, una proteína de unión a ARN, un fragmento de las mismas, o cualquier combinación de las mismas. Una enzima o proteína proporcionada en este documento puede unirse a otras proteínas, por ejemplo, receptores de hormonas.
En algunas realizaciones, los polipéptidos, polipéptidos de fusión, o composiciones proporcionados en este documento retienen la actividad a una temperatura entre -2 2C y 5 2C. En algunas realizaciones, los polipéptidos, polipéptidos de fusión, o composiciones retienen la actividad enzimática o actividad hormonal a una temperatura entre -2 2C y 5 2C. En algunas realizaciones, la actividad enzimática o actividad hormonal de los polipéptidos, polipéptidos de fusión, o composiciones después de su exposición a una temperatura entre -2 2C y 5 2C es al menos el 5 % de la actividad enzimática del polipéptido antes de su exposición a dicha temperatura.
Las marcas peptídicas proporcionadas en este documento aumentan la estabilidad de los polipéptidos. En algunas realizaciones, las marcas peptídicas inhiben la pérdida de actividad enzimática de los polipéptidos. En algunas realizaciones, las marcas peptídicas inhiben la degradación de los polipéptidos, polipéptidos de fusión, o composiciones. En algunas realizaciones, las marcas peptídicas aumentan la estabilidad o inhiben la pérdida de actividad enzimática de los polipéptidos durante al menos un día. En algunas realizaciones, las marcas peptídicas aumentan la estabilidad o inhiben la pérdida de actividad enzimática de los polipéptidos durante al menos una semana. En algunas realizaciones, las marcas peptídicas aumentan la estabilidad o inhiben la pérdida de actividad enzimática de los polipéptidos durante al menos un mes.
En algunas realizaciones, los polipéptidos proporcionados en este documento muestran estabilidad, actividad enzimática, o actividad hormonal potenciada en comparación con un polipéptido similar que no comprende una marca peptídica proporcionada en este documento. En algunas realizaciones, los polipéptidos tienen al menos un 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, o 95 % de la actividad enzimática o actividad hormonal de un polipéptido similar que no comprende a marca peptídica proporcionada en este documento. En algunas realizaciones, los polipéptidos tienen al menos un 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, o 95 % de la actividad enzimática o actividad hormonal de un polipéptido similar que no comprende una marca peptídica proporcionada en este documento, después de su exposición a una temperatura entre -2 2C y 5 2C. En algunas realizaciones, los polipéptidos tienen al menos un 5 %, 1 %, 15 %, 2 %, 25 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 1 %, o 2 % mayor actividad enzimática o actividad hormonal que la actividad enzimática o actividad hormonal de un polipéptido similar que no comprende una marca peptídica proporcionada en este documento, después de su exposición a una temperatura entre -2 2C y 5 2C.
Los polipéptidos se unen a una marca peptídica que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 7 % idéntica a la SEC ID N2 1. En algunas realizaciones, la marca peptídica tiene una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N2 1, SEC ID N2 13, o SEC ID N2 14. También se proporcionan en este documento marcas peptídicas que tienen una secuencia de aminoácidos que es al menos un 7 % idéntica a la SEC ID N213 o SEC ID N2 14. En algunas realizaciones, los polipéptidos, unidos a marcas peptídicas proporcionadas en este documento, comprenden una secuencia de aminoácidos que es al menos un 7 % idéntica a la SEC ID N2 6, SEC ID N2 8, o SEC ID N2 11. En algunas realizaciones, los polipéptidos, unidos a marcas peptídicas proporcionadas en este documento, comprenden una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N2 6, SEC ID N2 8, o SEC ID N211. En algunas realizaciones, el polipéptido comprende una secuencia de aminoácidos que es al menos un 7 %
idéntica a la SEC ID N2 1, SEC ID N2 6, SEC ID N2 8, SEC ID N2 11, SEC ID N2 13, SEC ID N2 14, SEC ID N2 16, SEC ID N2 18, SEC ID N2 2, SEC ID N2 22. En algunas realizaciones, los polipéptidos no tienen la secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N2 2, SEC ID N2 6, o SEC ID N211.
En algunas realizaciones, los polipéptidos proporcionados en este documento se unen a una marca peptídica que está codificada por una secuencia de nucleótidos que es al menos un 7 % idéntica a la SEC ID N2 3 o SEC ID N2 15. En algunas realizaciones, los polipéptidos proporcionados en este documento se unen a una marca peptídica que está codificada por una secuencia de nucleótidos mostrada en la SEC ID N2 3 o SEC ID N2 15. También se proporciona en este documento un polipéptido codificado por una secuencia de nucleótidos que es al menos un 7 % idéntica a la SEC ID N2 4, SEC ID N2 5, SEC ID N2 7, o SEC ID N2 12. También se proporciona en este documento un polipéptido codificado por una secuencia de nucleótidos mostrada en la SEC ID N2 4, SEC ID N2 5, SEC ID N2 7, o SEC ID N2 12.
También se proporciona en este documento un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 7 % idéntica a la SEC ID N21. También se proporciona en este documento un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N2 1. También se proporciona en este documento un polipéptido que comprenden un motivo de secuencia que se une a un ADN bicatenario. También se proporciona en este documento un polipéptido que está codificado por una secuencia de nucleótidos que es al menos un 7 % idéntica a la SEC ID N2 9. También se proporciona en este documento un polipéptido que está codificado por una secuencia de nucleótidos mostrada en la SEC ID N2 9. También se proporciona en este documento un polipéptido codificado por la SEC ID N2 3, SEC ID N2 5, SEC ID N2 7, SEC ID N2 12, SEC ID N2 15, SEC ID N2 17, SEC ID N2 19, SEC ID N2 21, o SEC ID N2 23.
Se describen en este documento polipéptidos de fusión que comprenden una marca peptídica que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 7 % a un 98 % idéntica a la SEC ID N21 y al menos un polipéptido, donde la marca peptídica está unida a dicho al menos un polipéptido, y la marca peptídica estabiliza el polipéptido de fusión a una temperatura entre -2 2C y 5 2C. En una realización, la marca peptídica se une covalentemente a ese al menos un polipéptido. En una realización, la marca peptídica se une no covalentemente a ese al menos un polipéptido. En una realización, la marca peptídica se une al extremo amino del al menos un polipéptido. En una realización, la marca peptídica se une al extremo carboxi del al menos un polipéptido. Se describe en este documento un polipéptido de fusión que comprende un primer polipéptido y un segundo polipéptido. El primer polipéptido puede ser una enzima y el segundo polipéptido puede ser una proteína de unión a doble cadena. La marca peptídica puede unirse al extremo amino del primer... [Seguir leyendo]
Reivindicaciones:
1. Un método para aumentar la estabilidad de un polipéptido, que comprende unir dicho polipéptido a una marca peptídica que tiene una secuencia de aminoácidos que es al menos un 7 % idéntica a la SEC ID N21.
2. El método de la reivindicación 1, en el que la marca peptídica tiene una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N2 1, SEC ID N2 13, SEC ID N2 14, SEC ID N2 16, o SEC ID N2 18; o la marca peptídica está codificada por una secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEC ID N2 3, SEC ID N215, SEC ID N217, o SEC ID N219.
3. El método de la reivindicación 1, en el que la marca peptídica comprende al menos uno a seis restos de histidina.
4. El método de la reivindicación 1, en el que la marca peptídica comprende un sitio de escisión por proteasa, opcionalmente en el que el sitio de escisión por proteasa comprende la secuencia de aminoácidos DDDDK.
5. El método de la reivindicación 1, en el que la marca peptídica inhibe la degradación o la desnaturalización o la pérdida de la función proteica del polipéptido a una temperatura de entre -2 2C y 5 2C, opcionalmente en el que la función proteica del polipéptido después de exposición a dicha temperatura es al menos el 5 % de la función proteica del polipéptido antes de su exposición a dicha temperatura.
6. El método de la reivindicación 1, en el que la marca peptídica mantiene la estabilidad del polipéptido durante al menos un día en una temperatura de entre -2 2C y 5 2C.
7. El método de la reivindicación 1, en el que la marca peptídica se une covalentemente o no covalentemente al polipéptido.
8. El método de la reivindicación 1, en el que la marca peptídica se une al extremo amino o al extremo carboxi del polipéptido.
9. El método de la reivindicación 1, en el que el polipéptido es eritropoyetina, factor inhibidor de leucemia humana (hLIF), factor estimulador de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF), insulina, factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF), leptina o bevacizumab, opcionalmente en el que el polipéptido comprende al menos una mutación.
1. El método de la reivindicación 1, en el que el polipéptido unido a la marca peptídica tiene una secuencia de aminoácidos mostrada en la SEC ID N2 6, SEC ID N2 8, SEC ID N2 11, SEC ID N2 2, o SEC ID N2 22; o el polipéptido unido a la marca peptídica está codificado por una secuencia de ácido nucleico mostrada en la SEC ID N2 5, SEC ID N2 7, SEC ID N212, SEC ID N2 21, o SEC ID N2 23.
11. El método de la reivindicación 1, en el que el polipéptido es una proteína o una enzima termoestables, opcionalmente en el que:
(i) dicha proteína termoestable es un péptido o un polipéptido cosméticos; o
(ii) dicha enzima es una polimerasa, transcriptasa inversa, nucleasa, pirofosfatasa, desaminasa o proteasa, opcionalmente en el que:
(1) la polimerasa es una ADN polimerasa I, ADN polimerasa I de Thermus aquaticus (Taq), ADN polimerasa de Thermococcus gorgonarius (Tgo), ADN polimerasa de Thermus thermophilics (Tth), o ADN polimerasa Z5, o
(2) la pirofosfatasa es una pirofosfatasa de Thermoplasma acidophilum (TAPP), o
(3) la desaminasa es una dCTP desaminasa de Pirococcus horikoshii.
12. El método de la reivindicación 11, en el que la enzima es una polimerasa útil en amplificación de ácidos nucleicos.
13. El método de la reivindicación 12, en el que la polimerasa muestra una actividad enzimática después de su exposición a una temperatura de entre -2 2C y 5 2C.
14. El método de la reivindicación 12, que comprende adicionalmente una segunda polimerasa, opcionalmente en el que dicha segunda polimerasa se une a una secuencia peptídica que es al menos un 7 % homologa a la SEC ID N2 1, SEC ID N2 8, SEC ID N213, SEC ID N214, SEC ID N216, o SEC ID N218.
15. El método de la reivindicación 12, en el que la polimerasa muestra una actividad enzimática después de su exposición a una temperatura de entre 2 2C y 3 2C durante al menos un día, opcionalmente en el que la actividad enzimática es al menos el 5 % de la actividad enzimática de la polimerasa antes de su exposición a dicha temperatura durante al menos un día.
Patentes similares o relacionadas:
Polipéptidos de unión específica novedosos y usos de los mismos, del 15 de Julio de 2020, de Pieris Pharmaceuticals GmbH: Muteína de lipocalina lagrimal humana que tiene especificidad de unión para IL-17A, en la que la muteína se une a IL-17A con una KD de aproximadamente 1 nM o menos, en la que […]
Formulaciones liofilizadas para antídoto del factor Xa, del 1 de Julio de 2020, de PORTOLA PHARMACEUTICALS, INC.: Una formulación acuosa, que comprende de 10 mM a 55 mM de arginina, de 1% a 3% de sacarosa (p/v), de 2% a 8% de manitol (p/v), y al menos 5 mg/ml de un polipéptido […]
Péptidos de unión beta amiloide y sus usos para el tratamiento y el diagnóstico de la demencia de Alzheimer, del 17 de Junio de 2020, de Priavoid GmbH: Péptido que contiene al menos una secuencia de aminoácidos que se une a especies beta amiloides y en el que la carga negativa del grupo carboxilo presente […]
Arginina desiminasa con reactividad cruzada reducida hacia anticuerpos para ADI - PEG 20 para el tratamiento del cáncer, del 6 de Mayo de 2020, de TDW Group: Una composición terapéutica que comprende una arginina desiminasa (ADI) aislada y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en donde la ADI aislada comprende la secuencia de […]
Composiciones y métodos utilizando andamios de lisofosfatidilcolina, del 6 de Mayo de 2020, de NATIONAL UNIVERSITY OF SINGAPORE: Un método para seleccionar uno o más compuestos o ácidos grasos para determinar el transporte mediado por lisofosfatidilcolina (LPC) del uno o más compuestos o ácidos […]
Péptidos antimicrobianos y composiciones de los mismos, del 29 de Abril de 2020, de REVANCE THERAPEUTICS, INC: Composición farmacéutica o cosmética que comprende un péptido, en donde dicho péptido consiste en la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO: 3 correspondiente […]
COMPOSICIÓN PARA LA ESTIMULACIÓN DEL SISTEMA INMUNE EN PECES QUE CONTIENE PÉPTIDOS RECOMBINANTES, PÉPTIDOS RECOMBINANTES INMUNOESTIMULANTES Y SECUENCIAS NUCLEOTÍDICAS QUE LOS CODIFICAN, del 23 de Abril de 2020, de UNIVERSIDAD DE CONCEPCION: La presente invención se refiere a una composición, una micropartícula y una formulación alimenticia que comprende péptidos recombinantes que estimulan el sistema inmune […]
Nuevo péptido con cuatro epítopos CTL unidos, del 15 de Abril de 2020, de TAIHO PHARMACEUTICAL CO., LTD.: Un péptido que consiste en 4 epítopos unidos, en el que los 4 péptidos de epítopo se seleccionan del grupo que consiste en los péptidos de epítopo CTL: el péptido como […]