Carbonato de calcio amorfo estable que comprende aminoácidos fosforilados, péptidos fosforilados sintéticos y proteínas gastrolíticas.

Un péptido que estabiliza la forma amorfa del carbonato cálcico,

en el que dicho péptido es uno de los siguientes:

i) un péptido que comprende una secuencia aminoacídica representada por SEC ID Nº: 1,

ii) un homólogo, variante o derivado que comprende una secuencia aminoacídica que tiene al menos un 90% de homología con respecto a dicha SEC ID Nº: 1, y

iii) un péptido que comprende un fragmento que tiene una subsecuencia de al menos diez aminoácidos de SEC ID Nº: 1.

Carbonato de calcio amorfo estable que comprende aminoácidos fosforilados, péptidos fosforilados sintéticos y proteínas gastrolíticas.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a péptidos que estabilizan la forma amoría del carbonato de calcio, ADN para codificarlo, composiciones que comprenden carbonato cálcico amorfo y péptidos fosforilados, y a procedimientos de preparar los mismos. Se proporcionan composiciones farmacéuticas y nutracéuticas que comprenden carbonato de 10 calcio amorfo y aminoácidos o péptidos fosforilados.

Antecedentes de la invención

El calcio juega uno de los papeles centrales en la transducción de señales y adicionalmente es un elemento estructural 15 importante en sistemas biológicos. De los protozoos a los vertebrados, los depósitos de calcio ayudan a mantener rígidas las formas corporales de los animales, siendo el fosfato de calcio el componente principal de los endoesqueletos en los vertebrados y el carbonato de calcio en los exoesqueletos en los invertebrados. Los exoesqueletos calcificados con minerales de carbonato de calcio como los constituyentes principales están extendidos entre equinodermos, moluscos y artrópodos, proporcionando protección y sirviendo como almacenamiento de calcio. 20 Algunos crustáceos almacenan carbonato de calcio temporalmente, en un estado amorfo, que los hace mejor disponibles, particularmente para movilización rápida durante la mineralización de sus nuevas estructuras exoesqueléticas después de muda. La formación de carbonato de calcio en los cuerpos vivientes de, por ejemplo, cangrejo de río es bastante intrigante, dado que los materiales amorfos son usualmente termodinámicamente inestables. El carbonato de calcio amorfo (ACC) tiende a transformarse en sus polimorfos cristalinos, principalmente 25 calcita y aragonita. El documento WO 2005/115414 emplea órganos de crustáceos para proporcionar composiciones con ACC estable que está fácilmente disponible para consumo humano. Sugawara y col. Angew. Chem. Int. ED. 2006, 45, 2876 describen los efectos del péptido recombinante rCap-1 sobre las morfologías del carbonato cálcico. En vista de la importancia metabólica general y biomecánica del calcio y dado que ACC es una forma potencialmente más soluble y absorbible de carbonato de calcio como suplementos dietéticos, es un objeto de la invención proporcionar 30 nuevos procedimientos para preparar carbonato de calcio amorfo.

Es otro objeto de esta invención proporcionar composiciones farmacéuticas y nutracéuticas que comprenden ACC estable.

Otros objetos y ventajas de la presente invención aparecerán según se desarrolla la descripción.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a una composición que comprende carbonato de calcio amorfo (ACC) y al menos un 40 péptido fosforilado como se define en la reivindicación 1. Dicho péptido fosforilado puede comprender fosfo-serina o fosfo-treonina o ambas. Dichos péptidos fosforilados estabilizan la forma amoría de dicho carbonato de calcio en la composición de la invención. En un aspecto de la invención, dicho péptido fosforilado procede de gastrolito de crustáceos. En una realización, la composición de la invención comprende ACC, al menos un péptido fosforilado de la invención y quitina o quitosana. 45

En otro aspecto, la presente invención se refiere a péptidos de crustáceos y su uso al afectar al estado cristalino del carbonato cálcico y en la preparación de formulación. La invención también se refiere a fragmentos funcionales de dichos péptidos. Las proteínas aisladas relacionadas a continuación incluyen GAP65 (donde GAP representa una proteína gastrolítica) ; en el presente documento se proporcionan secuencias aminoacídicas deducidas de dichas 50 nuevas proteínas, y se representan como SEC. ID. Nº : 1. La invención proporciona un péptido de crustáceo aislado y purificado que tiene básicamente una secuencia seleccionada entre el grupo que consiste en la SEC. ID. Nº : 1, y homólogos del mismo. Un homólogo de secuencia de acuerdo con la invención es un péptido con cualquier inserción, eliminación y sustitución, se conserva hasta al menos un 90% de la secuencia. La invención incluye adicionalmente un péptido aislado y purificado que comprende en su secuencia una subsecuencia, siendo dicha subsecuencia un 55 fragmento de dichos péptidos GAP de crustáceos anteriores, que tiene al menos diez aminoácidos de longitud. Dicha subsecuencia puede tener una secuencia seleccionada entre, por ejemplo, las SEC. ID Nº : 2 a 8, u otros fragmentos de secuencias SEC. ID. Nº : 1. La invención proporciona una composición que comprende uno o más péptidos como se ha definido anteriormente, o mezclas de los mismos, junto con carbonato cálcico amorfo (ACC) . Dicho péptido estabiliza la forma amoría de dicho carbonato cálcico en dicha composición. La expresión "fragmento, derivado o 60 variante funcionalmente equivalente" como se usa en el presente documento, incluye péptidos con modificaciones que no interfieren en su capacidad para inhibir la cristalización de carbonato cálcico.

La invención se refiere a un péptido que tiene una secuencia aminoacídica SEC. ID. Nº : 1, y a péptidos que son su secuencia homóloga que tiene, preferiblemente, al menos un 90% de homología. Una secuencia de ADN que codifica 65 un péptido de acuerdo con la invención también forma parte de la invención. En la invención se proporciona una preparación de carbonato cálcico que contiene un péptido de la invención.

En una realización preferida de la invención, se proporciona una preparación de carbonato cálcico que comprende ACC, siendo dicha preparación estable al menos durante un mes. Se desvela un procedimiento de preparación de carbonato cálcico amorfo estable, que comprende mezclar en fase acuosa en cualquier orden una sal soluble que 5 comprende calcio, una fuente de carbonate, y un péptido fosforilado de la invención. Dicha fuente puede comprender, por ejemplo, una sal carbonato disuelta en la fase líquida, o dicha fuente puede comprender dióxido de carbono gaseoso.

La invención proporciona una formulación farmacéutica que comprende la composición citada anteriormente, que 10 contiene uno o más péptidos fosforilados como se define en el presente documento o mezclas de los mismos, junto con ACC. La composición anteriormente citada, en otro aspecto de la invención, se usa ventajosamente como una formulación nutracéutica, por ejemplo como un aditivo alimentario. Dicha formulación farmacéutica se administra preferentemente oralmente y puede comprender cargas o disolventes o aditivos. Dicha formulación farmacéutica se usa preferentemente para su uso en el tratamiento de afecciones seleccionadas del grupo constituido por dolor, 15 enfermedades proliferativas, trastornos neurológicos, trastornos inmunológicos, enfermedades cardiovasculares, enfermedades pulmonares, trastornos nutricionales, trastornos reproductivos, trastornos musculoesqueléticos y problemas dentales. Dicho tratamiento puede conducir a desaparición de factores causantes o a mitigar los síntomas. Dicha enfermedad proliferativa puede ser, por ejemplo, carcinoma de mama o carcinoma broncogénico. Dicho tratamiento puede comprender ralentizar o inhibir la proliferación celular en un tumor. En lo que respecta a dicho dolor, 20 puede ser dolor postoperatorio, dolor después de herida, dolor asociado con cáncer y dolor neuropático. El trastorno neurológico mencionado se selecciona, por ejemplo, a partir de enfermedades desmielinizantes, demencias y trastornos del movimiento. Dicha afección puede ser una enfermedad degenerativa seleccionada a partir de esclerosis múltiple, enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Parkinson. Dicha afección puede comprender un trastorno de hueso o de médula ósea, que puede ser, por ejemplo fractura u osteoporosis. Dicha afección puede ser un trastorno 25 neurodegenerativo.

Dicho nuevo péptido GAP65, o sus derivados, se usan, en un aspecto de la invención, en la fabricación de medicamentos.

El término "derivados" como se usa en el presente documento, incluye también productos peptídicos obtenidos por alquilación, esterificación, neutralización, ciclación u oligomerización.

La invención proporciona un procedimiento de inhibición de la cristalización de carbonato de calcio en una mezcla que comprende un carbonato y una sal de calcio, que comprende mezclar en dicha mezcla una cantidad de un péptido 35 fosforilado de la invención. Dicho péptido fosforilado comprende preferentemente fosfo-serina o fosfo-treonina. La invención propone, en una realización, un procedimiento de inhibición de la cristalización de carbonato cálcico, que comprende mezclar... [Seguir leyendo]

1. Un péptido que estabiliza la forma amoría del carbonato cálcico, en el que dicho péptido es uno de los siguientes:

i) un péptido que comprende una secuencia aminoacídica representada por SEC ID Nº : 1, 5

ii) un homólogo, variante o derivado que comprende una secuencia aminoacídica que tiene al menos un 90% de homología con respecto a dicha SEC ID Nº : 1, y

iii) un péptido que comprende un fragmento que tiene una subsecuencia de al menos diez aminoácidos de SEC ID Nº : 1.

2. Un péptido aislado y purificado de gastrolito de crustáceo o cutícula que estabiliza la forma amoría de carbonato cálcico, en el que dicho péptido es uno de los siguientes

i) un péptido que tiene una secuencia representada por SEC ID Nº : 1,

ii) un homólogo que comprende una secuencia aminoacídica que tiene al menos un 90% de homología con respecto a 15 dicha SEC ID Nº : 1, y

iii) un péptido que comprende un fragmento que tiene una subsecuencia de al menos diez aminoácidos de SEC ID Nº : 1.

3. Una composición que comprende carbonato cálcico amorfo (ACC) y un péptido fosforilado seleccionado entre 20

i) un péptido que comprende una secuencia aminoacídica representada por SEC ID Nº : 1,

ii) un homólogo, variante o derivado que comprende una secuencia aminoacídica que tiene al menos un 90% de homología con respecto a dicha SEC ID Nº : 1; y

iii) un péptido que comprende un fragmento que tiene una subsecuencia de al menos diez aminoácidos de SEC ID Nº : 25 1.

4. Un ADN que codifica un péptido de acuerdo con la reivindicación 2.

5. Un procedimiento de preparación de carbonato cálcico amorfo estable, que comprende mezclar en fase acuosa en 30 cualquier orden una sal soluble que comprende calcio, una fuente de carbonato, y un péptido fosforilado seleccionado entre

i) un péptido que comprende una secuencia aminoacídica representada por SEC ID Nº : 1,

ii) un homólogo, variante o derivado que comprende una secuencia aminoacídica que tiene al menos un 90% de 35 homología con respecto a dicha SEC ID Nº : 1; y

iii) un péptido que comprende un fragmento que tiene una subsecuencia de al menos diez aminoácidos de SEC ID Nº : 1.

6. Una formulación farmacéutica o una formulación nutricional o un aditivo alimentario o un alimento funcional o un 40 complemento dietético que comprende la composición de la reivindicación 3.

7. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 6, para su uso en el tratamiento de afecciones seleccionadas del grupo constituido por dolor, enfermedades proliferativas, trastornos neurológicos, trastornos inmunológicos, enfermedades cardiovasculares, enfermedades pulmonares, trastornos nutricionales, trastornos 45 reproductivos, trastornos musculoesqueléticos y problemas dentales.

8. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, en la que dicha enfermedad proliferativa es carcinoma de mama o carcinoma broncogénico.

9. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, en la que dicho dolor está seleccionado de dolor postoperatorio, dolor después de herida, dolor asociado con cáncer y dolor neuropático.

10. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, en la que dicho trastorno neurológico se selecciona de enfermedades desmielinizantes, demencias y trastornos del movimiento. 55

11. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, en la que dicha afección es una enfermedad degenerativa o un trastorno neurodegenerativo seleccionado de esclerosis múltiple, enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Parkinson.

12. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, en la que dicha afección comprende un trastorno óseo o un trastorno de la médula ósea.

13. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7, en la que dicho trastorno comprende fractura u osteoporosis. 65

14. Una formulación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 3, en la que dicho carbonato de calcio amorfo está estable al menos durante 1 mes.

Fig. 12

REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN

Esta lista de referencias citadas por el solicitante solo es para la conveniencia del lector. La misma no forma parte del documento de Patente Europa. Aunque se ha observado sumo cuidado en la recopilación de las referencias, no pueden ser excluida la existencia de errores u omisiones y la Ofician Europea de Patentes se exime de cualquier 5 responsabilidad a este respecto.

Documentos de patente citados en al descripción

WO 2005115414 A [0002] [0032] 10

Literatura que no es de patentes citadas en la descripción

SUGAWARA et al. Angew. Chem., 2006, vol.45, 2876 [0002]