Biomarcadores lipidómicos para la enfermedad cardiaca estable e inestable.

Un ensayo de estratificación de un sujeto como un sujeto vulnerable o no vulnerable a la ruptura de placa,

comprendiendo el ensayo la determinación, en una muestra de dicho sujeto, de los niveles de al menos dos analitos lipídicos seleccionados de la lista que consiste en:

(i) dos o más analitos lipídicos modificados enumerados en la Tabla 1;

(ii) dos o más analitos lipídicos no modificados enumerados en la Tabla 1; y/o

(iii) dos o más analitos lipídicos, en los que al menos uno es un analito lipídico modificado enumerado en la Tabla 1 y al menos uno es un analito lipídico no modificado enumerado en la Tabla 1;

en el que el nivel de estos analitos lipídicos individuales enumerados en la Tabla 1 es diferente entre los sujetos vulnerables y los sujetos no vulnerables, y en el que el nivel de los analitos lipídicos en el sujeto con respecto a un control identifica al sujeto como vulnerable o no vulnerable.

Biomarcadores lipidómicos para la enfermedad cardiaca estable e inestable

Campo de la invención La presente invención se refiere, en general, al campo de los ensayos de diagnóstico y pronóstico para la enfermedad cardiaca. Más particularmente, la presente invención proporciona un ensayo para la estratificación de un sujeto como vulnerable o no vulnerable a las rupturas de placa. El ensayo de la presente invención también es capaz de integrarse en la arquitectura de la patología para proporcionar un sistema de diagnóstico y elaboración de informes.

Antecedentes Los datos bibliográficos de las referencias proporcionadas en la presente memoria descriptiva se enumeran al final de la misma.

La referencia a cualquier técnica anterior no se toma, ni debe tomarse, como un reconocimiento ni cualquier forma de sugerencia de que esta técnica anterior forme parte del conocimiento general común de ningún país.

La aterosclerosis (AS) es la causa más común de enfermedad cardiaca y es el principal contribuyente al desarrollo de la angina de pecho, los ataques cardíacos y la apoplejía. A pesar de la introducción de la terapia a base de estatinas para reducir los niveles de lipoproteínas de baja densidad (LDL) en plasma, la epidemia de la enfermedad cardiaca se lleva decenas de miles de vidas cada año, especialmente en los países occidentales, y le cuesta al sistema sanitario miles de millones de dólares al año (Encuesta Nacional de Salud: Resumen de los resultados, Australia, 2004-05, Nº de cat. 4364, 0, ABS, Canberra, Vol: Australian Bureau of Statistics, 2006, (AIHW) AIoHaW. “Health system expenditure on disease and injur y in Australia, 2000-01”. Health and Welfare Expenditure Series No. 19, 2004; HWE 26) .

La aterosclerosis se comienza a desarrollar a una edad temprana y va progresando con el tiempo. Sin embargo, la velocidad de progresión es, en gran medida, impredecible y difiere notablemente entre individuos aparentemente comparables. Uno de los primeros hechos que conducen a la aterosclerosis es la formación de "estrías grasas", depósitos de monocitos, macrófagos, células espumosas y lípidos dentro de la íntima de la pared arterial. Existen estrías grasas en la mayoría de los adultos y pueden permanecer como estrías grasas durante años o décadas, con pocos o ningún efecto clínico adverso. Algunas, pero no todas, las estrías grasas progresan a placas de fibriolípidos, que se distinguen por la presencia de células del músculo liso y el aumento de las fibras extracelulares dentro de la íntima. La muerte celular dentro de la placa conduce a la formación de un núcleo necrótico, a la acumulación de material extracelular y a la formación de la placa compleja. En esta etapa, la placa puede restringir gravemente el flujo sanguíneo, conduciendo a una serie de complicaciones clínicas. Sin embargo, muchas personas no serán conscientes del problema y no presentarán síntomas.

Las placas complejas pueden convertirse en inestables (una placa "vulnerable") como resultado del adelgazamiento de la capa de células del músculo liso sobre la placa. Las placas inestables pueden romperse, conduciendo a la trombosis, al infarto de miocardio y a la apoplejía con morbilidad y mortalidad asociadas (el paciente "vulnerable") . Aunque la acumulación y el desarrollo de la placa son progresivos a lo largo de la vida, el cambio de placa estable a placa inestable puede ocurrir antes o después en el proceso patológico. Así pues, una persona de 45 años con niveles relativamente bajos de placa puede volverse inestable, conduciendo a un accidente coronario.

A pesar del conocimiento detallado que existe acerca de la patología y la progresión de la placa, muchas personas no tienen síntomas clínicos y, por lo tanto, no son conscientes del riesgo que corren. En del 30 al 50 % de estas personas, el primer indicador de aterosclerosis es un ataque cardiaco agudo que suele ser fatal (Estadísticas de la enfermedad cardiaca y apoplejía-actualización del 2006, Dallas TX: Asociación Estadounidense del Corazón, 2006, Disponible en http://www.americanheart.org/downloadable/heart/ 1198257493273HS_Stats%202008.pdf)

El documento WO 2008/118413 se refiere a marcadores para detectar la enfermedad de las arterias coronarias. Los niveles de estos marcadores indican si el paciente se encuentra en riesgo de tener o de desarrollar la enfermedad de las arterias coronarias. El documento US 2005/0181386 se refiere a métodos de diagnóstico y evaluación de la enfermedad cardiovascular, particularmente, para el tratamiento de la apoplejía miocárdica y otros daños cardiovasculares, y de la hipertensión. En particular, se analizan muestras de ensayo de pacientes en cuanto a la presencia y la cantidad de miembros de un grupo de marcadores que comprende uno o más marcadores específicos del tratamiento de la enfermedad cardiovascular o de la hipertensión, y uno o más marcadores inespecíficos para el tratamiento de la enfermedad cardiovascular y de la hipertensión. El documento WO 2003/040691 se refiere al nuevo uso de un ensayo de diagnóstico para determinar el riesgo de las enfermedades ateroscleróticas tales como el infarto de miocardio y la apoplejía. Gr∅nholdt et al. describen que el aumento de los niveles de lipoproteínas ricas en triglicéridos en plasma predice la ecolucencia de las placas carótidas, lo que se asocia con el aumento del contenido de lípidos de la placa (Granholdt et al.; “Circulation”; 1998; 97:34-40) .

Se necesita un ensayo no invasivo para identificar y monitorizar las enfermedades cardiacas.

Sumario Cada una de las realizaciones descritas en el presente documento se va a aplicar, mutatis mutandis, a todas y cada una de las realizaciones, a menos que se especifique lo contrario.

En el presente documento, se describe una metodología lipidómica para identificar la presencia, el desarrollo, el estadio o la gravedad de la enfermedad cardiaca o sus diversas manifestaciones.

Por lo tanto, se identifica una asociación entre el nivel de analitos lipidómicos en un sujeto y la enfermedad cardiaca. El término "analito" incluye biomarcador e indicador. "Enfermedad cardiaca" pretende significar una afección individual, así como un conjunto de afecciones dentro del espectro clínico de la enfermedad cardiaca sintomática o asintomática. Los biomarcadores lipidómicos proporcionan una selección de indicadores de riesgo de la gravedad de la enfermedad y la velocidad de progresión, y una clasificación de la enfermedad, tal como estable o inestable en relación con las placas. Este riesgo varía de leve a extremo. El conocimiento del nivel de riesgo permite intervenir para mitigar el posterior desarrollo de la enfermedad cardiaca. La capacidad de monitorizar e identificar marcadores de la enfermedad cardiaca, incluyendo el diagnóstico en sujetos asintomáticos, permite además tomar decisiones sobre el tipo de intervención médica requerida por la modificación de la conducta y los medicamentos para la intervención quirúrgica. Los biomarcadores lipidómicos también proporcionan información sobre el nivel de riesgo de desarrollo en un individuo de la sintomatología más grave asociada con la enfermedad cardiaca. El perfil lipidómico también define un estado deseado de salud en los sujetos. Por lo tanto, la monitorización de los niveles de cambio de los analitos lipídicos es una herramienta útil en los estudios farmacotraduccionales y en el tratamiento clínico de los pacientes.

La referencia a "la enfermedad cardiaca" incluye afecciones tales como la enfermedad cardiaca coronaria (incluyendo la enfermedad de las arterias coronarias, angina de pecho e infarto de miocardio) , aterosclerosis, cardiomiopatía (incluyendo la asociada con la arritmia) , enfermedad cardiovascular, enfermedad cardiaca isquémica, insuficiencia cardiaca (incluyendo cor pulmonale) , enfermedad cardiaca hipertensiva (incluyendo la hipertrofia ventricular izquierda y la insuficiencia cardiaca congestiva) , enfermedad cardiaca inflamatoria (incluyendo endocarditis, cardiomegalia inflamatoria y miocarditis) y la enfermedad cardiaca valvular (incluyendo estenosis de la válvula aórtica y prolapso de la válvula mitral) . El espectro de enfermedades cardiacas también incluye otras afecciones tales como aneurisma aórtico, hipertensión, trombosis y pericarditis. La enfermedad cardiaca es un espectro de manifestaciones clínicas.

La presente invención se basa, en parte, en la determinación de que los sujetos con enfermedad cardiaca o en riesgo de desarrollar la enfermedad cardiaca presentan un metabolismo lipídico alterado. Los niveles de determinados analitos lipidómicos se correlacionan con el estado, el estadio y/o la clasificación de la enfermedad cardiaca,... [Seguir leyendo]

1. Un ensayo de estratificación de un sujeto como un sujeto vulnerable o no vulnerable a la ruptura de placa, comprendiendo el ensayo la determinación, en una muestra de dicho sujeto, de los niveles de al menos dos analitos lipídicos seleccionados de la lista que consiste en:

(i) dos o más analitos lipídicos modificados enumerados en la Tabla 1;

(ii) dos o más analitos lipídicos no modificados enumerados en la Tabla 1; y/o

(iii) dos o más analitos lipídicos, en los que al menos uno es un analito lipídico modificado enumerado en la Tabla 1 y al menos uno es un analito lipídico no modificado enumerado en la Tabla 1;

en el que el nivel de estos analitos lipídicos individuales enumerados en la Tabla 1 es diferente entre los sujetos vulnerables y los sujetos no vulnerables, y en el que el nivel de los analitos lipídicos en el sujeto con respecto a un control identifica al sujeto como vulnerable o no vulnerable.

2. El ensayo de la reivindicación 1, que comprende comparar el nivel de los al menos dos analitos lipídicos del sujeto con los respectivos niveles de los mismos analitos lipídicos en al menos un sujeto de control seleccionado entre un sujeto que es vulnerable a la ruptura de placa y un sujeto que no es vulnerable a la ruptura de placa, en donde una similitud en los respectivos niveles de los al menos dos analitos lipídicos entre el sujeto y el sujeto no vulnerable identifica al sujeto como no vulnerable a la ruptura de placa, y en donde una similitud en los respectivos niveles de las al menos dos analitos lipídicos entre el sujeto y el sujeto vulnerable identifica al sujeto como vulnerable a la ruptura de placa.

3. El ensayo de la reivindicación 2, que comprende además comparar el nivel de los al menos dos analitos lipídicos del sujeto con los respectivos niveles de los mismos analitos lipídicos en al menos un sujeto normal, en donde una similitud en los respectivos niveles de los al menos dos analitos lipídicos entre el sujeto y el sujeto normal identifica al sujeto como normal con respecto a la vulnerabilidad de la ruptura de placa.

4. El ensayo de las reivindicaciones 1 o 2, que comprende determinar o determinar y comparar los niveles de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 analitos lipídicos enumerados en la Tabla 1, en donde el nivel de un analito lipídico individual enumerado en la Tabla 1 es diferente entre los sujetos que son vulnerables a la ruptura de placa y los sujetos que no son vulnerables a la ruptura de placa.

5. El ensayo de las reivindicaciones 1 o 2, que comprende además determinar los niveles de los al menos dos analitos lipídicos seleccionados de la lista que consiste en:

(i) dos o más analitos lipídicos modificados enumerados en la Tabla 1;

(ii) dos o más analitos lipídicos no modificados enumerados en la Tabla 1; y/o

(iii) dos o más analitos lipídicos, en los que al menos uno es un analito lipídico modificado enumerado en la Tabla 1 y al menos uno es un analito lipídico no modificado enumerado en la Tabla 1;

en el que el nivel de estos analitos lipídicos individuales enumerados en la Tabla 1 es diferente entre los sujetos normales y los sujetos con enfermedad cardiaca, y en el que el nivel de los analitos lipídicos en el sujeto con respecto a un control identifica al sujeto como un sujeto normal o un sujeto con enfermedad cardiaca.

6. El ensayo de la reivindicación 5, que comprende comparar el nivel de los al menos dos analitos lipídicos, determinados además como en la reivindicación 5, en el sujeto con los respectivos niveles de los mismos analitos lipídicos en al menos un sujeto de control seleccionado entre un sujeto normal y un sujeto con enfermedad cardiaca, en donde una similitud en los respectivos niveles de los al menos dos analitos lipídicos entre el sujeto y el sujeto con enfermedad cardiaca identifica al sujeto como aquel que tiene enfermedad cardiaca, y en donde una similitud en los respectivos niveles de los al menos dos analitos lipídicos entre el sujeto y el sujeto normal identifica al sujeto como normal con respecto a la enfermedad cardiaca.

7. El ensayo de las reivindicaciones 5 o 6, que comprende determinar o determinar y comparar los niveles de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o 16 analitos lipídicos enumerados en Tabla 1, en donde el nivel de un analito lipídico individual enumerado en la Tabla 1 es diferente entre sujetos normales y sujetos con enfermedad cardiaca.

8. El ensayo de las reivindicaciones 1 o 5, en el que los analitos lipídicos modificados de (i) se seleccionan entre una ceramida modificada (modCER) y una fosfatidilcolina modificada (modPC) .

9. El ensayo de las reivindicaciones 1 o 2, en el que los analitos lipídicos no modificados de (ii) se seleccionan entre una dihexosilceramida (DHC) , una esfingomielina (SM) , un fosfatidilinositol (PI) , una lisofosfatidilcolina (LPC) , una fosfatidilcolina (PC) , una alquilfosfatidilcolina (APC) , un éster de colesterol (CE) , un diacilglicerol (DG) y un triacilglicerol (TG) .

10. El ensayo de las reivindicaciones 1 o 2, en el que el o cada analito lipídico modificado de (iii) se selecciona entre una ceramida modificada (modCER) y una fosfatidilcolina modificada (modPC) , y el o cada lípido no modificado de

(iii) se selecciona entre una dihexosilceramida (DHC) , una esfingomielina (SM) , un fosfatidilinositol (PI) , una lisofosfatidilcolina (LPC) , una alquilfosfatidilcolina (APC) , un éster de colesterol (CE) , un diacilglicerol (DG) y un 5 triacilglicerol (TG) .

11. El ensayo de las reivindicaciones 1 o 2, que comprende determinar los niveles de al menos dos analitos lipídicos seleccionados entre modCer 731, 6, GM3 18:0, PC34:5, DHC 18:1, APC 34:2, SM 18:0, Cer 18:1, PI 36:1, APC 36:0, DG 18:1 20:0, LPC 14:0, LPC 16:1, PC 24:0, Cer 18:0, PI 36:3, PI 38:2, modPC.622, 4/40, LPC 18:2, LPC 24:0, PC

34:3, modPC 752, 6/5, 58, PI 34:0, modCer 703, 6/5, 87 y SM 22:1.

12. El ensayo de la reivindicación 11, que comprende determinar los niveles de al menos cuatro, seis, ocho o dieciséis analitos lipídicos seleccionados del grupo que consiste en modCer 731, 6, GM3 18:0, PC34:5, DHC 18:1, APC 34:2, SM 18:0, Cer 18:1, PI 36:1, APC 36:0, DG 18:1 20:0, LPC 14:0, LPC 16:1, PC 24:0, Cer 18:0, PI 36:3, PI

38:2, modPC.622, 4/40, LPC 18:2 y LPC 24:0, PC 34:3, modPC 752, 6/5, 58, PI 34:0, modCer 703, 6/5, 87 y SM 22:1.

13. El ensayo de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en el que los niveles de analitos lipídicos ensayados se usan en combinación con uno o más factores de riesgo tradicionales seleccionados entre la edad, el sexo, el tabaquismo, la diabetes, la hipertensión, los antecedentes familiares de EAC, el IMC, el colesterol total, LDL, HDL,

triglicéridos, glucosa y hsCRP para identificar así al sujeto como vulnerable o no vulnerable a la ruptura de placa.