Biomarcadores de riñón sano.

Uso de péptido urinario aislado que consiste en las SEC ID Nº 1 a la SEC ID Nº 10 y combinaciones de los mismos como biomarcadores fisiológicos de función renal sana.

Biomarcadores de riñón sano

Campo de la invención

La presente invención se refiere a biomarcadores urinarios para funcionamiento fisiológico renal sano de un riñón nativo o injertado.

Antecedentes de la invención

La búsqueda de biomarcadores urinarios sensibles del rendimiento de riñón ha atraído a esfuerzos importantes por su valor potencial como herramientas clínicas para detectar los primeros signos de diversas enfermedades. La reciente explosión de potentes técnicas proteómicas como ESI-MS, DESI-MS, MALDI-TOF-MS, SELDI-TOF-MS, DIOS-MS o LC-MS que permiten la detección de la muestra a través de una población de pacientes estadísticamente significativa, ha conducido al descubrimiento y la identificación de biomarcadores urinarios distintivos de la disfunción renal (Dihazi y col., Expert Rev Proteomics. 2007 Feb;4 (1) :39 -50)

En esta línea, Jürgens M. y col., (Combinatorial Chemistr y & high Throughput Screening, 2005, 8, 757 -765) divulga una combinación de técnicas denominada globalmente tecnología peptidómica para la caracterización de peptidomas urinarios y la identificación de biomarcadores en orina.

En nefrología clínica, el éxito de la gestión de los pacientes de trasplante requiere la detección precoz y la aplicación de la terapia más apropiada. Los procedimientos de diagnóstico disponibles incluyen parámetros bioquímicos y biopsias, pero el único biomarcador no invasivo de la disfunción del aloinjerto es la creatinina insensible y no específica, que no permite la detección de cambios fibrosantes en una etapa temprana.

Los esfuerzos de investigación se han centrado en los biomarcadores urinarios de enfermedad. En un estudio clásico proteoma urinario se informó de que un enfoque proteómico no sesgado puede detectar picos de proteínas en orina asociados con el rechazo agudo del aloinjerto renal tubulointersticial. La identificación de estos picos de proteínas mediante espectrometría de masas demostró que todos ellos derivan de formas escindidas de beta-2microglobulina, presumiblemente reflejo de las células dañadas de los túbulos proximales renales (Schaub y col., 2005. Am. J.Transplant. 5, 729 -738) . Muchos estudios han seguido esta tendencia, por nombrar algunos: Dihazi y col., Clin Chem. 2007 Sep; 53 (9) : 1636 -45; O'valle y col., Transplant Proc. 2007 Sep; 39 (7) : 2099 -101; Peng y col., J Int Med Res. 2007 Jul-Aug; 35 (4) : 442 -9; documentos WO-07121922-A2 y WO-07104537-A2) . El número de estudios publicados sobre biomarcadores urinarios está aumentando rápidamente, documento WO 2007/000466. En la mayoría de los estudios se ha analizado la fracción de proteína soluble en la orina, centrándose en la identificación de posibles marcadores biológicos en la enfermedad renal y en enfermedades del tracto urogenital. Incluyen estudios de lesión renal aguda, rechazo agudo del aloinjerto renal, enfermedad glomerular y carcinoma del riñón, vejiga y próstata. En muchos casos, los biomarcadores notificados siguen sin estar identificados, aunque en algunos estudios se han identificado algunas proteínas biomarcadores (O'Riordan y col., Am J Transplant 2007;

7:930 -40; Schaub y col., 2005. Am. J.Transplant. 5, 729 -738) .

A pesar de estos esfuerzos, por el momento, las normas para una función renal sana no han sido objeto de ningún estudio. Tradicionalmente, se supone que la función renal es sana cuando un paciente no muestra signos de enfermedad o dolor. La monitorización de la función renal sana puede ayudar a la identificación de trastornos en una etapa temprana, pero, lo más importante es que proporcionaría a los médicos una potente herramienta para el manejo de pacientes con un riñón injertado.

Se conocen unas pocas proteínas urinarias que están presentes en muestras de individuos con función renal sana, pero sometidos a una fuerte reducción en la enfermedad. El ejemplo más destacado es la glicoproteína de Tamm-Horsfall (proteína TH) , también conocida como uromodulina ( (Kidney International, Vol. 16 (1979) , pp. 279 -289; JBC Vol. 265, Nº 34, December 5, pág. 20764 -20789, 1990) . Generalmente, la proteína TH es la proteína más abundante en la orina y su presencia puede interferir con la detección de otras proteínas, si no se elimina (Pisitkun y col., 2004.Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 13368 -13373) . Se puede despolimerizar mediante el uso de agentes reductores y de calentamiento. La proteína TH humana forma agregados de alto peso molecular y pueden disociarse en subunidades de peso molecular más pequeño de aproximadamente 100 kDa mediante varios agentes (Stevenson y col., Biochem J 116:791 -796, 1970) . Kobayashi K. y col., [Archives of Biochemistr y and Biophysics Vol. 388 (1) , 2001:113 -120] describen condiciones para solubilizar agregados de la proteína TH con el fin de mejorar la medición de esta proteína en las muestras de orina. Por lo tanto, es un uso habitual en el ámbito de descubrimiento de biomarcadores urinarios para liberar las muestras de orina de la uromodulina porque no le ha atribuido valor diagnóstico. No obstante, la uromodulina ha atraído cierto interés debido a sus propiedades antiinflamatorias. La solicitud de patente japonesa JP-2002125673-A divulga un nuevo gen humano de la uromodulina y sus usos como agente antiinflamatorio.

Otras proteínas urinarias abundantes son cininas. Mindroiu y col. (J Biol Chem. 1986 Jun 5; 261 (16) :7407 -11) compararon los tipos de cininas excretados en la orina fresca de perros, ratas y seres humanos usando cromatografía líquida de alto rendimiento. Descubrieron que en la orina humana, el contenido de cininas era de aproximadamente un 12 % de la bradicinina, 30 % de Lys-bradicinina, 2 % de des-Arg1-bradicinina, y 41 % de una cinina entonces desconocida que era idéntica a la Lys-bradicinina, pero que tenía una alanina en la posición 4 en lugar de una prolina. La calicreína urinaria humana incubada con cininógeno de peso molecular bajo humano semipurificado liberó un 76 % de las cininas totales como Lys-bradicinina, 7 % como bradicinina, y 17 % como [Ala3] Lys-bradicinina. Por tanto, la lys-bradicinina es el tipo más abundante de cinina en la orina, sin embargo, y a pesar de su aplicación en la fisiopatología cardiovascular, de su presencia en la orina no se ha derivado ningún valor diagnóstico para la fisiopatología renal.

Un patrón que afirmara positivamente la idoneidad de una función renal injertada sería de gran utilidad para los clínicos en la detección precoz de cambios fibrosantes por lo demás no detectables.

Aprovechando las nuevas técnicas de LC-MS y debido a su innovadora estrategia para el descubrimiento de biomarcadores urinarios, los inventores han identificado nuevos péptidos urinarios naturales. Todos ellos muestran concentraciones reducidas en orina en la enfermedad que los hacen aptos como biomarcadores del funcionamiento renal sano. Por lo tanto, la presente invención proporciona al médico una herramienta clínica para diagnosticar, en lugar de suponer, una fisiología renal sana.

Sumario de la invención

La invención se refiere a los biomarcadores urinarios de la fisiología renal sana. Por lo tanto, la invención proporciona una herramienta biomédica para controlar la función renal sana.

De acuerdo con lo anterior, un aspecto de la invención comprende péptidos urinarios aislados seleccionados del grupo que comprende las SEC ID Nº 1 a 9 y combinaciones de los mismos para su uso como un biomarcador fisiológico de la función renal sana.

En otro aspecto, la invención comprende el uso del péptido urinaria aislado que comprende la SEC ID Nº 10 como un biomarcador fisiológico de la función renal sana.

La función renal comprende la función de un riñón injertado. El uso comprende el uso en el pronóstico y / o diagnóstico de una nefropatía que comprende nefropatía crónica del aloinjerto.

En otro aspecto, la invención proporciona un método para el seguimiento, pronóstico y diagnóstico de la fisiología renal, que comprende a) recoger una muestra de un fluido corporal de un sujeto. b) añadir un patrón interno para la cuantificación precisa. c) concentrar y desalar la muestra recogida. d) analizar el contenido peptídico mediante técnicas proteómicas. e) cuantificar el contenido de péptidos que comprenden las SEC ID Nº 1, SEC ID Nº 2, SEC ID Nº 3, SEC ID Nº 4, SEC ID Nº 5, SEC ID Nº 6, SEC ID Nº 7, SEC ID Nº 8, SEC ID Nº 9, SEC ID Nº 10 y combinaciones de los mismos. f) comparar los valores obtenidos en la etapa e) para controlar los valores. g) aplicar los valores comparativos recopilados en la etapa f) en la evaluación o diagnóstico del funcionamiento fisiológico de un riñón.

La... [Seguir leyendo]

1. Uso de péptido urinario aislado que consiste en las SEC ID Nº 1 a la SEC ID Nº 10 y combinaciones de los mismos como biomarcadores fisiológicos de función renal sana.

2. Uso de los péptidos urinarios aislados de la reivindicación 1 y combinaciones de los mismos, como biomarcadores en el control de la función renal de un aloinjerto renal.

3. Uso de los péptidos urinarios aislados de la reivindicación 1 y combinaciones de los mismos, en el pronóstico y / o diagnóstico de una nefropatía.

4. El uso de la reivindicación 3, cuando la nefropatía es nefropatía crónica del aloinjerto.

5. Un procedimiento para el control, pronóstico o diagnóstico de la fisiología renal que comprende a) Obtener una muestra de un sujeto b) Añadir un patrón interno para una cuantificación precisa. c) Concentrar y desalar la muestra obtenida. d) Analizar el contenido en péptidos mediante técnicas proteómicas. e) Cuantificar el contenido de los péptidos seleccionados del grupo que consiste en las SEC ID Nº 1, SEC ID

Nº 2, SEC ID Nº 3, SEC ID Nº 4, SEC ID Nº 5, SEC ID Nº 6, SEC ID Nº 7, SEC ID Nº 8, SEC ID Nº 9, SEC ID Nº 10 y combinaciones de los mismos.

f) Comparar los valores obtenidos en la etapa d) con valores control. g) Aplicar los valores comparativos reunidos en la etapa e) en la evaluación o diagnóstico del funcionamiento fisiológico de un riñón en el que una disminución en presencia de los péptidos es indicativa de una función renal no sana.

6. El procedimiento de la reivindicación 5, en el que el sujeto es un paciente de la terapia de trasplante renal y el riñón es un riñón injertado.

7. El procedimiento de la reivindicación 5, en el que patrón interno es un péptido marcado isotópicamente con la misma secuencia que el péptido analito pero incorporando isótopos estables de carbono, nitrógeno e hidrógeno.

8. El procedimiento de la reivindicación 5, en el que la técnica proteómica comprende ESI-MS, DESI-MS, DIOS-MS, SELDI-MS, MALDI-MS, LC / MS, LC-MS / MS en tándem y cualquier otra técnica basada en la espectrometría de masas de alto rendimiento y / o técnicas basadas en anticuerpos, incluyendo ELISA, matrices de proteínas / péptidos, matrices de anticuerpos o combinaciones de los mismos.

9. Uso del procedimiento de la reivindicación 5 para controlar la eficacia terapéutica del tratamiento de un paciente de una patología renal.