Anticuerpos humanos anti-CD38 y usos para ellos.

Un anticuerpo humano o humanizado o fragmento del mismo que contiene una región de unión a antígeno que se une específicamente a un epítopo de CD38,

en el que el epítopo comprende uno o más restos de aminoácidos comprendidos en uno o más de los tramos de aminoácidos tomados de la lista de tramos de aminoácidos 44-66, 82- 94, 142-154, 148-164, 158-170, o 192-206 de CD38 (SEC ID NO: 22).

Anticuerpos humanos anti-CD38 y usos para ellos

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

CD38 es una glicoproteína membránica de tipo II y pertenece a la familia de ectoenzimas, debido a su actividad enzimática como ADP ribosil-ciclasa y cADP-hidrolasa. Durante la ontogenia, CD38 aparece en células madre comprometidas con CD34+ y progenitores de células linfoides, eritroides y mieloides comprometidos con el linaje. Se entiende que la expresión de CD38 persiste solamente en el linaje linfoide, a través de las etapas tempranas de desarrollo de linfocitos T y B.

El aumento de CD38 sirve como un marcador para la activación de linfocitos – en particular la diferenciación de linfocitos B a lo largo de la ruta plasmacitoide. Se postulan funciones (co) receptoras de CD38 que conducen a señalización intracelular o comunicación intercelular vía su ligando, CD31, así como su papel como un regulador intracelular de un segundo mensajero, ADPr cíclica, en una variedad de cascadas de señalización. Sin embargo, todavía está por elucidar su importancia fisiológica, puesto que la genosupresión del análogo murino o los autoanticuerpos anti-CD38 en seres humanos no parece ser perjudicial.

Aparte de observar su expresión en el sistema hematopoyético, los investigadores han observado el aumento de CD38 en diversas estirpes celulares derivadas de tumores de linfocitos B, T, y tumores mieloides/monocíticos, incluyendo la leucemia linfoblástica aguda (ALL) de linfocitos B o T, leucemia mieloide aguda (AML) , linfoma no de Hodgkin (NHL) y mieloma múltiple (MM) . En MM, por ejemplo, la fuerte expresión de CD38 se observa en la mayoría de todas las muestras de pacientes.

Por tanto, la sobreexpresión de CD38 en células neoplásicas proporciona una diana terapéutica atractiva para inmunoterapia. De especial atracción es el hecho de que la mayoría de las células madre pluripotentes primitivas del sistema hematopoyético son CD38-negativas, y que el grado de efectos citotóxicos por ADCC o CDC se correlaciona bien con los niveles de expresión de la diana respectiva.

Los enfoques actuales de terapias anti-CD38 se pueden dividir en dos grupos: enfoques in vivo y ex vivo. En los enfoques in vivo, los anticuerpos anti-CD38 se administran a un sujeto que necesita terapia a fin de provocar el agotamiento, mediado por anticuerpos, de células neoplásicas que sobreexpresan CD38. El agotamiento se puede lograr mediante ADCC mediada por anticuerpos y/o CDC mediante células efectoras, o usando los anticuerpos anti-CD38 como directores para el transporte de sustancias citotóxicas, por ejemplo saporina, a las células diana, e internalización subsiguiente. En el enfoque ex vivo, la población celular, por ejemplo células de médula ósea, que comprende células neoplásicas que sobreexpresan CD38, se eliminan de un individuo que necesite tratamiento y se ponen en contacto con anticuerpos anti-CD38. Las células diana son destruidas mediante sustancias citotóxicas, por ejemplo saporina, como se describe para el enfoque in vivo, o se eliminan poniendo en contacto la población celular con anticuerpos anti-CD38 inmovilizados, eliminando así de la mezcla células diana que sobreexpresan CD38. Después, la población celular agotada se reinserta en el paciente.

Los anticuerpos específicos para CD38 se pueden dividir en grupos diferentes, dependiendo de diversas propiedades. La unión de algunos anticuerpos a la molécula CD38 (predominantemente aa 220-300) puede accionar actividades en la célula diana, tales como la liberación de Ca2+, liberación de citocinas, sucesos de fosforilación y estimulación del crecimiento en base a la especificidad del anticuerpo respectivo (Konopleva et al., 1998; Ausiello et al., 2000) , pero no se ha podido observar ninguna correlación clara entre el sitio de unión de los diversos anticuerpos conocidos y sus propiedades (no) agonistas (Funaro et al., 1990) .

Se sabe relativamente poco sobre la eficacia de anticuerpos anti-CD38 publicados. Lo que se sabe es que todos los anticuerpos conocidos parecen reconocer exclusivamente epítopos (restos de aminoácidos 220 a 300) situados en el parte C-terminal de CD38. No se conocen hasta ahora anticuerpos que sean específicos para epítopos en la parte N-terminal de CD38 distante del sitio activo en la secuencia proteica primaria. Sin embargo, se ha encontrado que OKT10, que ha estado en ensayos clínicos, tiene una afinidad y eficacia relativamente bajas cuando se analiza como constructo quimérico que comprende una parte Fc humana. Además, OKT10 es un anticuerpo murino que lo hace inadecuado para la administración a seres humanos. Recientemente se ha descrito (documento WO 02/06347) un fragmento de anticuerpo scFv anti-CD38 humano. Sin embargo, ese anticuerpo es específico para un epítopo de CD38 expresado selectivamente.

Correspondientemente, a la luz del gran potencial para la terapia con anticuerpos anti-CD38, existe una gran necesidad de anticuerpos anti-CD38 humanos con afinidad elevada y con eficacia elevada a la hora de mediar la muerte mediante ADCC y/o CDC de células neoplásicas que sobreexpresan CD38.

La presente invención satisface estas y otras necesidades al proporcionar anticuerpos anti-CD38 completamente humanos y muy eficaces, como se describen más abajo.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

Es un objeto de la invención proporcionar anticuerpos humanos y humanizados como se definen en las reivindicaciones anejas.

Es otro objeto de la invención proporcionar anticuerpos como se describen en las reivindicaciones anejas que sean seguros para la administración a seres humanos.

También es un objeto de la presente invención proporcionar usos para tratar enfermedades y/o afecciones asociadas con el aumento de CD38 con uno o más anticuerpos de la invención. Estos y otros objetos de la invención se describen de forma más completa aquí.

La invención se refiere generalmente a un anticuerpo aislado o un fragmento de anticuerpo funcional que contiene una región de unión a antígeno que es específica para un epítopo de CD38, en el que el anticuerpo o fragmento funcional del mismo es capaz de mediar el exterminio de una célula diana CD38+ (LP-1 (DSMZ: ACC41) y RPMI8226 (ATCC: CCL-155) ) mediante citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (“ADCC”) con una eficacia al menos dos a cinco veces mejor que el anticuerpo quimérico OKT10 que tiene SEC ID NOS: 23 y 24 (en las mismas

o sustancialmente las mismas condiciones) , cuando se emplea como célula efectora una célula PBMC humana, y cuando la relación de células efectoras a células diana está entre alrededor de 30:1 y alrededor de 50:1. Tal anticuerpo o fragmento funcional del mismo puede contener una región de unión a antígeno que contiene una región H-CDR3 representada en SEC ID NO: 5, 6, 7, u 8; la región de unión a antígeno puede incluir además una región H-CDR2 representada en SEC ID NO: 5, 6, 7, u 8; y la región de unión a antígeno también puede contener una región H-CDR1 representada en SEC ID NO: 5, 6, 7, u 8. Tal anticuerpo de la invención específico de CD38 puede contener una región de unión a antígeno que contiene una región L-CDR3 representada en SEC ID NO: 13, 14, 15,

o 16; la región de unión a antígeno puede incluir además una región L-CDR1 representada en SEC ID NO: 13, 14, 15, o 16; y la región de unión a antígeno también puede contener una región L-CDR2 representada en SEC ID NO: 13, 14, 15, o 16.

La invención se refiere generalmente a un anticuerpo aislado o un fragmento de anticuerpo funcional que contiene una región de unión a antígeno que es específica para un epítopo de CD38, en el que el anticuerpo o fragmento funcional del mismo es capaz de mediar el exterminio de una célula CHO transfectada con CD38 mediante CDC con una eficacia al menos dos veces mejor que OKT10 quimérico (SEC ID NOS: 23 y 24) en las mismas o sustancialmente las mismas condiciones como en el párrafo previo. Un anticuerpo que satisfaga estos criterios puede contener una región de unión a antígeno que contiene una región H-CDR3 representada en SEC ID NO: 5, 6,

o 7; la región de unión a antígeno puede incluir además una región H-CDR2 representada en SEC ID NO: 5, 6, o 7; y la región de unión a antígeno también puede contener una región H-CDR1 representada en SEC ID NO: 5, 6, o 7. Tal anticuerpo de la invención específico de CD38 puede contener una región de unión a antígeno que contiene una región L-CDR3 representada en SEC ID NO: 13, 14, o 15; la región de unión a antígeno puede incluir además una región L-CDR1 representada en SEC ID NO: 13, 14, o 15; y la región de unión a antígeno también puede contener una región L-CDR2 representada en SEC... [Seguir leyendo]

1. Un anticuerpo humano o humanizado o fragmento del mismo que contiene una región de unión a antígeno que se une específicamente a un epítopo de CD38, en el que el epítopo comprende uno o más restos de aminoácidos comprendidos en uno o más de los tramos de aminoácidos tomados de la lista de tramos de aminoácido.

4. 66, 8294.

14. 154.

14. 164.

15. 170, .

19. 206 de CD38 (SEC ID NO: 22) .

2. El anticuerpo o fragmento del mismo según la reivindicación 1, en el que el epítopo comprende uno o más restos de aminoácidos comprendidos en los tramos de aminoácido.

4. 66, .

14. 164 de CD38 (SEC ID NO: 22) .

3. El anticuerpo o fragmento del mismo según la reivindicación 1, en el que el epítopo comprende uno o más restos de aminoácidos comprendidos en el tramo de aminoácido.

19. 206 de CD38 (SEC ID NO: 22) .

4. El anticuerpo o fragmento del mismo según la reivindicación 1, en el que el epítopo comprende uno o más restos de aminoácidos comprendidos en los tramos de aminoácido.

8. 94, .

15. 170 de CD38 (SEC ID NO: 22) .

5. El anticuerpo o fragmento del mismo según la reivindicación 1, en el que el epítopo comprende uno o más restos de aminoácidos comprendidos en los tramos de aminoácido.

8. 94, .

14. 154 de CD38 (SEC ID NO: 22) .

6. El anticuerpo o fragmento del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el epítopo es un epítopo lineal.

7. El anticuerpo o fragmento del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que el epítopo es un epítopo conformacional.

8. El anticuerpo o fragmento del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que el anticuerpo es una IgG.

9. El anticuerpo o fragmento del mismo según la reivindicación 8, en el que el anticuerpo es una IgG1.

10. El anticuerpo o fragmento del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en el que el anticuerpo es un anticuerpo humano sintético.

11. Un ácido nucleico que codifica el anticuerpo o fragmento del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.

12. Un vector que comprende el ácido nucleico según la reivindicación 11.

13. Una célula que comprende el vector según la reivindicación 12.

14. La célula según la reivindicación 13, en la que dicha célula es una célula bacteriana o una célula de mamífero.

15. Una composición farmacéutica que comprende el anticuerpo humano o fragmento funcional del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

16. Uso del anticuerpo humano o fragmento funcional del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad hematológica.

17. Un anticuerpo humano o fragmento funcional del mismo como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para uso en un método de tratamiento de una enfermedad hematológica.

18. El uso según la reivindicación 16 o el anticuerpo humano o fragmento funcional del mismo para uso según la reivindicación 17, en el que la enfermedad hematológica es mieloma múltiple, leucemia linfocítica crónica, leucemia mielogenosa crónica, leucemia mielogenosa aguda, y leucemia linfocítica aguda.

Fig. 14: ADCC con diferentes estirpes celulares

Estirpe celular Colección de cultivo Origen Expresión [MFI] Muerte espec. máx [%] en ADCCa, c

Mab#1 Mab#2 Mab#3 PC

RPMI 8226 ATCC CCL-155 MM 405, 71 56 58 54 46

KMS-12-BM DSMZ ACC551 MM 142, 29 26 32 30 34

NCI-H929 ECACC95050415 MM 45, 01 68 73 38 54

OPM-2 DSMZ ACC50 MM 37, 99 6 13 3 7

U-266 ECACC85051003 MM 26, 14 17 14 12 16

KMS-11 Namba et al., 1989b MM 26, 81d 22 30 26 28

JVM-13 DSMZACC19 CLL 463, 93 11 20 12 15

JVM-2 DSMZACC12 CLL 140, 84 22 28 10 24

CCRF-CEM ECACC85112105 ALL 301, 46 24 29 20 22

Jurkat DSMZ ACC282 ALL 202, 99 7 8 13 12

AML-193 DSMZ ACC549 AML 62, 69d 33 26 39 33

OCI-AML5 DSMZ ACC247 AML 207, 55d 20 21 16 26

NB-4 DSMZ ACC207 AML 164, 7d 36 38 32 37

THP-1 DSMZ ACC16 AML 34, 41 64 59 38 43

HL-60d DSMZ ACC3 AML 18, 43d 29 35 29 29

Raji Linfoma de Burkitt Linfoma de Burkitt n.d. 53 62 48 n.d.

Fig. 15: ADCC con muestras de MM

Anticuerpos Parámetros: Mab#1 Mab#2 Mab#3 PC

Muestras de MM: EC50 [nM]a: 0, 116-0, 202 0, 006-0, 185 0, 027-0, 249 0, 282-0, 356

Muestras de MM: Muerte espec. máx [%] 13, 1-61, 6 16, 2-57, 9 13, 6-36, 0 15, 5-49, 5