Análogos de urocortina 2 y usos de los mismos.

Polipéptido de fórmula (I):

Z1-Z2 (I)

en la que Z1 es

(i) un aminoácido seleccionado del grupo de aminoácidos que consiste en R y K o

(ii) una serie consecutiva de 2-20 aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en R y K;

y

Z2 es SEQ ID NO: 1,

siempre que el extremo carboxi-terminal de Z1 se una covalentemente al extremo N-terminal de SEQ ID NO: 1.

Análogos de urocortina 2 y usos de los mismos Descripción

La presente solicitud reivindica el beneficio de prioridad de la solicitud provisional estadounidense con n.° de serle 61/237.995, presentada el 28 de agosto de 2009.

La presente divulgación se refiere en general a los campos de la química de proteínas, la biología molecular, las composiciones farmacéuticas y los agentes terapéuticos. Más particularmente, la divulgación se refiere a métodos, a composiciones referentes a análogos de urocortlna-2 y a ácidos nucleicos que codifican para análogos de urocortlna-2.

El factor de liberación de cortlcotroplna (CRF) es un péptldo de 41 aminoácidos más conocido por su papel Indispensable en la Iniciación de respuestas hlpoflsarlo-suprarrenales frente al estrés, un efecto mediado por receptores de CRF tipo 1. Además, el factor de liberación de cortlcotroplna está ampliamente distribuido en el cerebro, y participa en la movilización de ajustes conductuales y autónomos complementarlos frente a una variedad de circunstancias amenazantes. El factor de liberación de cortlcotroplna y su familia relacionada de péptldos desempeñan Importantes papeles en la regulación del eje hlpotalámlco-hlpoflsarlo-suprarrenal (FIFIS) en condiciones básales y de estrés. También se cree que el factor de liberación de cortlcotroplna está Implicado también en otras respuestas neuroendocrlnas y paracunas en muchos tejidos. Los miembros de la familia de CRF integran respuestas endocrinas, autónomas y conductuales frente a factores de estrés. Estos péptldos también pueden estar implicados en el control del apetito, la excitación sexual y las funciones cognltlvas. Pueden producirse graves consecuencias psicológicas y fisiológicas como resultado de los efectos del estrés a largo plazo, tales como trastornos de ansiedad, anorexia nerviosa y depresión melancólica.

Los miembros de la familia del factor de liberación de corticotropina median en sus acciones biológicas mediante unión específica a receptores de CRF con altas afinidades. Los receptores de CRF son receptores acoplados a proteínas G que actúan a través de adenilato ciclasa y están relacionados estructuralmente con la familia de la secretlna. Esta familia también incluye GRF, VIP, PTFi y el receptor de calcitonina. El receptor CRF-R1 está distribuido por todo el cerebro y se encuentra en sitios de transmisión sensorial y motora. El CRF-R2a está distribuido en el tabique lateral, hipotálamo ventral medio, núcleo del tracto solitario y el núcleo del rafe dorsal, que son zonas en las que se expresa CRF-R1 muy poco o nada en absoluto. El CRF-R2P se encuentra principalmente en sitios periféricos incluyendo el corazón, los vasos sanguíneos, el tracto gastrointestinal, el epidídimo, los pulmones y la piel. La farmacología de los dos tipos de receptores difiere en que el factor de liberación de corticotropina tiene una baja afinidad por CRF-R2 pero una alta afinidad por CRF-R1. Otros péptidos relacionados tales como urotensina de carpa, sauvagina de rana y urocortina tienen una alta afinidad por CRF-R2. Los ratones deficientes en CRF-R2 demuestran un aumento de un comportamiento similar a la ansiedad provocado por hipersensibilidad a factores de estrés.

Un neuropéptido relacionado con CRF de mamífero, urocortina (Ucn), se une con alta afinidad a ambos tipos conocidos de receptor de CRF, mientras que CRF se une de manera sumamente preferida a CRF-R1. La urocortina administrada de manera central es más potente que CRF en la supresión del apetito pero menos en la generación de efectos similares a la ansiedad agudos y la activación conductual generalizada. Esto se ha tomado como que Indica que la urocortina podría mediar en algunos efectos relacionados con el estrés atribuidos inicialmente a CRF, sirviendo al menos en parte como ligando endógeno para CRF-R2. Se ha propuesto la urocortina como agente terapéutico en cardiopatía (véase, por ejemplo, Raddino ef a/., 2007; Davidson ef a/., 2009).

Se cree que la urocortina 2 (Ucn 2), uno de los miembros de la familia de péptidos de CRF, es un ligando endógeno para el receptor de CRF tipo 2 (CRF-R2). Los papeles de urocortina 2 en el organismo son diversos, e incluyen Implicación en trastornos afectivos, estimulación del sistema inmunitario y cardioprotección (Lawrence y Latchman, 2006). La aplicación terapéutica de urocortina 2 es limitada debido a la solubilidad en agua limitada del péptido de urocortina 2. Por tanto, existe la necesidad de análogos activos de urocortina 2 que tengan solubilidad en agua mejorada.

La invención se refiere a las realizaciones definidas en las reivindicaciones. Por tanto, la invención se refiere a los

siguientes puntos.

1. Un pollpéptldo de fórmula (I):

Zi-Zz(l) en la que Zi es

(I) un aminoácido seleccionado del grupo de aminoácidos que consiste en R y K o

(¡I) una serie consecutiva de 2-20 aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en R y K;

y

Z2es SEQIDNO: 1,

siempre que el extremo carboxi-terminal de Zi se una covalentemente al extremo N-terminal de SEQ ID NO: 1.

2. Un ácido nucleico recombinante que codifica para el polipéptido del punto 1.

3. El polipéptido del punto 1 o el ácido nucleico del punto 2, en el que Zi es arginina (R).

4. El polipéptido del punto 1 ó 3, en el que el polipéptido se define además como que está amidado en el extremo C- terminal.

5. El polipéptido del punto 4, en el que el polipéptido es SEQ ID NO: 6.

6. Un polipéptido quimérico que comprende:

a) una primera secuencia de aminoácidos que es un polipéptido tal como se expone en cualquiera del puntos 1 y 3 a

5; y

b) una segunda secuencia de aminoácidos, en el que la segunda secuencia de aminoácidos es una secuencia de aminoácidos terapéutica.

7. El polipéptido quimérico del punto 6, en el que la segunda secuencia de aminoácidos potencia la biodisponibilidad de la primera secuencia de aminoácidos.

8. El polipéptido quimérico del punto 7, en el que la segunda secuencia de aminoácidos se selecciona del grupo que consiste en un dominio de unión al receptor de lipoproteínas de baja densidad de la apolipoproteína B (SEQ ID NO: 20), una secuencia de aminoácidos de Fe o una toxina.

9. Un polinucleótido que codifica para un polipéptido quimérico tal como se expone en uno cualquiera de los puntos 6 a 8.

10. Una composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y

a) el polipéptido de cualquiera del puntos 1 y 3 a 5 o el ácido nucleico recombinante del punto 2 ó 3; o

b) un polipéptido quimérico de uno cualquiera de los puntos 6 a 8 o un polinucleótido del punto 9.

11. El polipéptido de uno cualquiera de los puntos 1 y 3 a 5 o el ácido nucleico del punto 2 ó 3 para su uso en el tratamiento de un estado fisiopatológico en un sujeto, en el que

a) dicho polipéptido o dicho ácido nucleico; y

b) un portador farmacéutico aceptable va a administrarse al sujeto.

12. El polipéptido o el ácido nucleico para su uso según el punto 11, en el que el sujeto es un mamífero.

13. El polipéptido o el ácido nucleico para su uso según el punto 11 ó 12, en el que el estado fisiopatológico se selecciona del grupo que consiste en temperatura corporal elevada, disfunción del apetito, insuficiencia cardiaca congestiva, estrés, ansiedad y niveles indeseablemente bajos de secreción de ACTH.

14. Un vector que comprende una secuencia de ácido nucleico tal como se expone en el punto 2 ó 3, en el que dicho vector comprende además elementos reguladores necesarios para la expresión de dicha secuencia de ácido nucleico en una célula, preferiblemente un vector viral, seleccionado de un vector adenoviral, un vector lentiviral o un vector de virus adenoasociado.

15. Una célula huésped transfectada con el vector del punto 14, en la que dicha célula se selecciona del grupo que consiste en una célula bacteriana, una célula de mamífero, una célula vegetal o una célula de insecto.

La presente invención se basa en parte en la identificación de análogos de urocortina 2 que tienen la capacidad sorprendente e inesperada para estimular la producción de AMPc intracelular en células de manera similar a urocortina 2, y tienen aún una solubilidad en agua mejorada en comparación con urocortina 2. La solubilidad en agua mejorada conducirá a una mayor aplicación terapéutica de los análogos de urocortina 2 en el tratamiento y la prevención de enfermedades y estados relacionados con la salud que implican el eje hipotalámico-hipofisario- suprarrenal.

Algunas realizaciones de la presente divulgación incluyen análogos... [Seguir leyendo]

1. Polipéptido de fórmula (I):

Zl-Z2(l)

en la que Zi es

5 (i) un aminoácido seleccionado del grupo de aminoácidos que consiste en R y K o

(¡i) una serle consecutiva de 2-20 aminoácidos seleccionados del grupo que consiste en R y K;

y

Zz es SEQIDNO: 1,

siempre que el extremo carboxl-termlnal de Zi se una covalentemente al extremo N-terminal de SEQ ID 10 NO: 1.

2. Ácido nucleico recombinante que codifica para el polipéptido según la reivindicación 1.

3. Polipéptido según la reivindicación 1 o ácido nucleico según la reivindicación 2, en el que Zi es arginina (R).

4. Polipéptido según la reivindicación 1 ó 3, en el que el polipéptido se define además como que está amidado en el extremo C-terminal.

15 5. Polipéptido según la reivindicación 4, en el que el polipéptido es SEQ ID NO: 6.

6. Polipéptido quimérico que comprende:

a) una primera secuencia de aminoácidos que es un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 5; y

b) una segunda secuencia de aminoácidos, en el que la segunda secuencia de aminoácidos es una

20 secuencia de aminoácidos terapéutica.

7. Polipéptido quimérico según la reivindicación 6, en el que la segunda secuencia de aminoácidos potencia la biodisponibilidad de la primera secuencia de aminoácidos.

8. Polipéptido quimérico según la reivindicación 7, en el que la segunda secuencia de aminoácidos se selecciona del grupo que consiste en un dominio de unión al receptor de lipoproteínas de baja densidad de

25 la apolipoproteína B (SEQ ID NO: 20), una secuencia de aminoácidos de Fe o una toxina.

9. Polinucleótido que codifica para un polipéptido quimérico según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8.

10. Composición farmacéutica que comprende un portador farmacéuticamente aceptable y

a) el polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 5 o el ácido nucleico recombinante según

30 la reivindicación 2 ó 3; o

b) un polipéptido quimérico según una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8 o un polinucleótido según la reivindicación 9.

11. Polipéptido según una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 3 a 5 o ácido nucleico según la reivindicación 2 ó 3 para su uso en el tratamiento de un estado fisiopatológico en un sujeto, en el que

35 a) dicho polipéptido o dicho ácido nucleico; y

b) un portador farmacéutico aceptable

va a administrarse al sujeto.

12. Polipéptido o ácido nucleico para su uso según la reivindicación 11, en el que el sujeto es un mamífero.

13. Polipéptido o ácido nucleico para su uso según la reivindicación 11 ó 12, en el que el estado fisiopatológico

40 se selecciona del grupo que consiste en temperatura corporal elevada, disfunción del apetito, insuficiencia

cardiaca congestiva, estrés, ansiedad y niveles indeseablemente bajos de secreción de ACTH.

14. Vector que comprende una secuencia de ácido nucleico según la reivindicación 2 ó 3, en el que dicho vector comprende además elementos reguladores necesarios para la expresión de dicha secuencia de

ácido nucleico en una célula, preferiblemente un vector viral, seleccionado de un vector adenoviral, un vector lentivlral o un vector de virus adenoasoclado.

15. Célula huésped transfectada con el vector según la reivindicación 14, en la que dicha célula se selecciona del grupo que consiste en una célula bacteriana, una célula de mamífero, una célula vegetal o una célula de 5 insecto.