Agente de diagnóstico para la enfermedad de Parkinson.

Un método para identificar si es un individuo tiene o no la enfermedad de Parkinson (EP) y/o distinguir entre EP y otro trastorno neurológico que no sea EP,

cuyo método comprende medir la cantidad de oligómeros de α-sinucleína solubles y la cantidad total de α-sinucleína en una muestra de líquido cefalorraquideo (LCR) tomada del individuo, calculando la razón de:

cantidad de oligómeros de α-sinucleína

cantidad total de α-sinucleína

y determinando de este modo si el individuo tiene o no EP.

Agente de diagnóstico para la enfermedad de Parkinson Campo de la invención La presente invención se refiere a método para identificar si una persona tiene o no la enfermedad de Parkinson (PD) . En particular, la invención se refiere a un método para identificar si un individuo tiene EP en la fase de presintomática de la enfermedad.

Antecedentes de la invención La enfermedad de Parkinson (EP) es el segundo trastorno neurodegenerativo más común después de la enfermedad de Alzheimer. Típicamente, las características clínicas más tempranas de la EP se identifican retrospectivamente y no son específicas para la EP. Estos síntomas suelen ser síntomas no motores tales como estreñimiento, depresión, hiposmia, y trastornos del sueño.

Los síntomas reconocidos de manera más general de la EP son los síntomas motores como bradicinesia, temblor muscular, rigidez y problemas de equilibrio. Estos síntomas no aparecen hasta mucho más tarde en la enfermedad, cuando ya se ha producido daños importantes en el cerebro. De hecho, al menos 70% de las neuronas de la sustancia negra del mesencéfalo debe perderse antes de la aparición de síntomas de este tipo. Incluso entonces, la primera manifestación de los síntomasmotores puede ser sutil y puede pasar desapercibida durantemeses o años.

El diagnóstico clínico preciso de la EP durante la vida es muy difícil, siendo correcto en sólo en aproximadamente 85% de los casos. Como consecuencia, ha resultado impedido el descubrimiento de terapias eficaces modificadoras de la enfermedad. Los métodos más avanzados disponibles en la actualidad para el diagnóstico de la EP se basan en la formación de imágenes mediante núclidos radiactivos. Estos métodos son costosos y sigue siendo un tema de debate en qué medida reflejan el proceso patológico subyacente.

Hasta la fecha, no existe una prueba que puede determinar de forma fiable si un individuo tiene EP. En particular, no existe una prueba que pueda determinar si una persona tiene o no EP durante la fase temprana (pre-sintomática) de la enfermedad, antes de que se haya producido demasiado daño al cerebro.

El-Agnaf et al., FASEB Journal (2006) 20 (3) págs. 419-425 describen la detección de formas oligoméricas solubles de -sinucleína en plasma humano ymuestras de líquido cefalorraquídeo post mortem.

Sin embargo, existe una necesidad largamente sentida parael desarrollo de una prueba fiable para la EP que pueda ser utilizada en sujetos vivos. Existe una necesidad concreta de una prueba que pueda determinar si una persona tiene o no EP durantela fasetemprana (pre-sintomática) de la enfermedad.

Compendio de la invención El descubrimiento de mutaciones en el gen que codifica la -sinucleína (SNCA) en los casos familiares de EP sugiere en primer lugar un papel crítico para la proteína -sinucleína (-syn) en la etiología de la EP idiopática. Más recientemente, estudios genéticos han revelado también que eventos raros de triplicación en la SNCA pueden estar asociados con formas graves de EP familiar de aparición temprana que también presentan demencia con cambios de tipo cuerpos de Lewy. Además, las mutaciones de duplicación causan un fenotipo de EP familiar que se asemeja más a la EP idiopática de aparición tardía. Estos estudios colectivos indican que un aumento de la expresión de syn de tipo salvaje aumenta el riesgo de desarrollar EP y que el nivel de proteína de -syn podría ser un determinante importante dela progresión y la gravedad del fenotipo parkinsoniano.

Los datos demográficos también demuestran que la variabilidad genética común en el locus SNCA es un factor de riesgo en la EP esporádica. Además, las lesiones neuropatológicas (cuerpos de Lewy (CL) ) que mejor caracterizan una EP en fase terminal se componen en gran parte de los depósitos de -syn fibrilar. Sin embargo, la -syn es expresada principalmente por las células neuronales, y se consideraba en general que existía como una proteína citoplasmática y asociada a vesículas de lípidos, quetendía a desalentar su uso como un marcador de diagnóstico.

Se ha demostrado recientemente que la -syn es, de hecho, normalmente liberada por las células neuronales, y está presente en el líquido cefalorraquídeo humano (LCR) y plasma periférico, aunque se encontró que los niveles de syn en el LCR tomadas de pacientes con EP disminuían en comparación con los de los controles de lamisma edad.

Hay evidencia que sugiere que los oligómeros solubles de las proteínas amiloidogénicas asociadas con las enfermedades neurodegenerativas son las especies patógenas que causan la muerte celular neuronal, en lugar de las fibrillas amiloides maduras. Se ha demostrado recientemente que los oligómeros de -syn solubles son elevados

en los productos homogeneizados de cerebro de pacientes fallecidos con EP y demencia con Cuerpos de Lewy (CL) , con respecto a los productos homogeneizados de cerebros normales. Además, en contraste con el resultado en el LCR, se ha encontrado recientemente que los niveles de oligómeros de -syn soluble en el plasma eran elevados en pacientes con EP en comparación con los controles. Cabe señalar que los niveles de oligómeros de syn en plasma obtenidos a partir de pacientes con EP variaron ampliamente y se superpusieron considerablemente con los de las muestras de los controles.

No obstante, el autor de la presente invención ha comparado los niveles de oligómeros de -syn solubles en el LCR tomados de pacientes con EP y sujetos de la misma edad, incluyendo pacientes con Parálisis supranuclear progresiva (PSP) y enfermedad de Alzheimer (EA) , así como sujetos control normales. También se midieron los niveles totales de -syn con el fin de medir los niveles de proteínas totales de -syn en las mismas muestras. El autor de la presente invención ha encontrado que la cantidad de oligómeros de -syn solubles y la razón entre la cantidad de dichos oligómeros y la cantidad total de -syn se incrementaron significativamente en las muestras de LCR de pacientes con EP vivos, en comparación con muestras de LCR de controles normales de la misma edad. El autor de la presente invención también ha encontrado que la cantidad de oligómeros de -syn solubles es significativamente mayor en las muestras de LCR de pacientes con EP, en comparación con las muestras de LCR de pacientes dela misma edad con otrostrastornos neurológicos.

Por consiguiente, la presente invención proporciona: Un método para identificar si es un individuo tiene o no la enfermedad de Parkinson (EP) y/o distinguir entre EP y otro trastorno neurológico que no sea EP, cuyo método comprende medir la cantidad de oligómeros de -sinucleína solubles y la cantidad total de -sinucleína en una muestra de líquido cefalorraquídeo (LCR) tomada del individuo, calculando la razón de:

cantidad de oligómeros de -sinucleína cantidad total de -sinucleína y determinando de estemodo si el individuotiene o no EP.

En el método, la determinación de si el individuo tiene o no EP puede comprender la determinación de si la razón de la cantidad de oligómeros de -syn con respecto a la cantidad total de -syn se incrementa o no con respecto a la proporción en la muestra tomada de un individuo normal. Por ejemplo, la razón se puede aumentar por lo menos 3 veces con respecto a la razón en una muestra tomada de unindividuo sin EP.

Alternativamente, la determinación de si el individuo tiene o no EP puede comprender la determinación de si la razón, cuando se expresa como un porcentaje, es o no de al menos 6%, preferiblemente al menos 7%.

En un método de la invención, el sujeto individual puede ser sospechoso de estar en riesgo de desarrollar EP u otro trastorno neurológico tal como PSP o EA. El individuo puede tener una historia familiar de EP. El individuo puede tener o, más generalmente, no tener (o haber sido diagnosticado) de cualquiera de los síntomas clínicos asociados con un diagnóstico de EP o de otro trastorno neurológico tal como PSP o EA. El individuo puede tener o puede no tener (o haber sido diagnosticado) de cualquiera de los síntomas no motores de la enfermedad de Parkinson. El individuo se puede clasificar normalmente como Hoehn-Yahr grado 2 o inferior.

También se describe un método para la detección de oligómeros de -syn en unamuestra de LCR que comprende: incubar la muestra de LCR con un primer reactivo de unión a -syn que está inmovilizado sobre una fase sólida; detectar la unión de -sinucleína utilizando un segundo reactivo de unión a -syn que no está inmovilizado y que se une a lamisma o un sitio de solapamiento en -sinucleína como primer agente.

También se describe un método para la detección de oligómeros de -syn en unamuestra de LCR que comprende:... [Seguir leyendo]

1. Un método para identificar si es un individuo tiene o no la enfermedad de Parkinson (EP) y/o distinguir entre EP y otro trastorno neurológico que no sea EP, cuyo método comprende medir la cantidad de oligómeros de -sinucleína solubles y la cantidad total de -sinucleína en una muestra de líquido cefalorraquideo (LCR) tomada del individuo, calculando la razón de:

cantidad de oligómeros de -sinucleína cantidad total de -sinucleína 10 y determinando de este modo si el individuo tiene o no EP.

2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la determinación de si el individuo tiene o no EP

comprende la determinación de si la razón se incrementa o no con respecto a la razón en una muestra tomada de un 15 individuo sin EP.

3. Un método de acuerdo con la reivindicación 2, en donde se determina que el individuo tiene EP cuando la razón se incrementa al menos 3 veces con respecto a la proporción en la muestra tomada de un individuo sin EP.

4. Un método de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la determinación de si el individuo tiene o no EP comprende la determinación de si la razón, cuando se expresa como un porcentaje, es o no de al menos 6%.

5. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el individuo es sospechoso de estar en riesgo de desarrollar EP u otro trastorno neurológico que no es EP. 25

6. Un método de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el individuo tiene una historia familiar de EP u otro trastorno neurológico que no es EP.

7. Un método de acuerdo con la reivindicación 5 o 6, en donde el individuo (a) no tiene o no ha sido diagnosticado

de cualquiera de los síntomas clínicos asociados con un diagnóstico de EP, o (b) tiene o ha sido diagnosticado con un cualquiera de los síntomas no motores de EP, o (c) tiene o ha sido diagnosticado de uno o más síntomas asociados con otro trastorno neurológico que no es EP.

8. Un método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones en anteriores, en donde el individuo se clasifica 35 como Hoehn-Yahr de grado 2 o inferior.