Adyuvante para vacunas, vacunas que comprenden dicho adyuvante y sus usos.

Adyuvante para vacunas que comprende un polipéptido no lipidado de la membrana externa (Omp) de bacterias,

en donde las bacterias pueden ser del género Brucella. El adyuvante puede ser un polipéptido modificado, o puede ser por ejemplo el polipéptido Omp19S o Omp16S, partes del mismo, o mezclas de ambos. En una realización preferida el adyuvante es el polipéptido no lipidado comprendido en la SEQ ID N° 1 o partes de la misma. En otra realización preferida el adyuvante es el polipéptido no lipidado comprendido en la SEQ ID N° 2 o partes de la misma.

[1] La presente solicitud se refiere a un adyuvante para vacunas que comprende un polipéptido no lipidado de la membrana externa (Omp) de bacterias, en donde las bacterias pueden ser del género Brucella. El adyuvante puede ser un polipéptido modificado, puede ser por ejemplo el polipéptido Omp19S o partes del mismo, el polipéptido Omp16S o partes del mismo, o mezclas de ambos. En una realización preferida el adyuvante es el polipéptido no lipidado comprendido en la SEQ ID N° 1 o partes de la misma. En otra realización preferida el adyuvante es el polipéptido no lipidado comprendido en la SEQ ID N° 2 o partes de la misma.

ANTECEDENTES

[2] Los adyuvantes inmunológicos son sustancias que, incorporados al antlgeno (Ag) o administrados simultáneamente con él, hacen más efectiva la respuesta inmune contra el mismo. Pueden utilizarse para mejorar la respuesta inmune hacia un Ag en varios sentidos: pueden mejorar la magnitud de la respuesta inmune contra un Ag débil; pueden usarse para aumentar la velocidad y duración de la respuesta inmune, pueden modular la avidez de los anticuerpos (Acs), isotipos o distribución de subclases; pueden estimular y modular la respuesta inmune celular; pueden promover la inducción de respuesta inmune local (ej.: mucosas); disminuir la cantidad de Ag necesaria y reducir el costo de una vacuna; o pueden ayudar a impedir la competencia de Ag que existe en las vacunas combinadas (Singh and O'Hagan. Advances in vaccine adjuvants. Nat Biotechnol. 17 (11): 175-81. 1999).

[3] A lo largo de la historia de las vacunas, y desde el adyuvante de Freund completo (CFA) basado en una emulsión de micobacterias con agua y aceite, son muchos los preparados que se han ensayado con más o menos éxito. El más utilizado y permitido de uso humano es el aluminio, en sales de hidróxido o de fosfato. Otros adyuvantes consisten en componentes bacterianos como endotoxinas, partículas como liposomas, emulsiones oleosas como saponinas, y otras diferentes moléculas (Petrovsky and Aguilar. Vaccine adjuvants: current state and future trends. Immunol Cell Biol. 82 (5):488-96. 24). La mayoría de los adyuvantes históricamente empleados, como las sales de aluminio, estimulan preferentemente la respuesta linfocitaria de tipo T helper (Th) 2 (Liljeqvist and Stahl. Production of recombinant subunit vaccines: protein immunogens, live delivery systems and nucleic acid vaccines. J Biotechnol. 73 (1):1-33. 1999), incrementando la producción de Acs. Sin embargo, también hay otras, como la vacuna de la BCG y los adyuvantes que incorporan compuestos oleosos, que estimulan la respuesta Th1 (Victoratos, Yiangou, Avramidis and Hadjipetrou. Regulation of cytokine gene expression by adjuvants in vivo. Clin Exp Immunol. 19 (3):569-78. 1997). La elección del adyuvante de una vacuna deberá sopesarse cuidadosamente en el futuro, y no sólo en función de la cantidad de respuesta, sino de dirigirla cualitativamente. Por otro lado, la metodología utilizada tradicionalmente (vacuna por vía intramuscular o intradérmica en hidróxido de aluminio) ha sido útil para inducir respuestas inmunes humorales sistémicas pero generalmente fallan en inducir respuestas inmunes celulares y locales como en mucosas (Moyle, McGeary, Blanchfield and Toth. Mucosal immunisation: adjuvants and delivery systems. Curr Drug Deliv. 1 (4):385-96. 24). Hay una mayor necesidad en el diseño de vacunas capaces de inducir fuertes respuestas inmunes celulares del tipo Th1 y células T citotóxicas (CTL) que puedan prevenir infecciones crónicas virales, infecciones relacionadas con patógenos intracelulares o el cáncer (vacunas terapéuticas) (Seder and Hill. Vaccines against intracellular infections requiring cellular immunity. Nature. 46 (6797):793-8. 2).

[4] Otras consideraciones importantes, (además de promover una respuesta inmune específica eficaz contra el antígeno) están relacionadas con aquellas características importantes para que la sustancia pueda ser empleada en la práctica clínica. Las formulaciones óptimas deben ser seguras, estables, biodegradables, inertes, y de bajos costos de producción. Es corta la lista de sustancias que cumplen con todos estos requisitos, hasta el momento los adyuvantes aprobados para empleo en humanos se restringen a las sales de aluminio, MF59 (una emulsión de aceite en agua), MLP (monofosforil-glicolípido), partículas virales (HBV y HPV), IRIV (proteoliposoma compuesto por fosfolfpidos, hemaglutinina del virus de la influenza y un antígeno blanco determinado); y la subunidad B de la toxina colérica (Reed, Bertholet, Coler and Friede. New horizons in adjuvants for vaccine development. Trends Immunol. 3 (1):23-32. 29). Los adyuvantes no deben inducir reacciones adversas cuando son empleados en vacunas profilácticas, aunque en las terapéuticas se aceptan ciertas reacciones. En el campo de la salud veterinaria, la eficacia es un elemento de gran importancia y se toleran ciertos niveles de efectos colaterales (Sesardic. Regulatory considerations on new adjuvants and delivery systems. Vaccine. 24 Suppl 2 S2-86-7. 26).

[5] Como la puerta de entrada de la mayoría de las infecciones son las mucosas, la habilidad de generar inmunidad de mucosas luego de la administración de un Ag podría proveer una defensa temprana contra estos patógenos. Lamentablemente luego de la administración de Ags por vía oral hay degradación en el tracto gastrointestinal, poca absorción y baja eficacia a largo plazo, necesitándose administraciones repetidas y en grandes cantidades de Ag para estimular y mantener la respuesta inmune. Además se ha observado tolerancia inmunológica a aquellos Ags solubles administrados por vía oral (Moyle et al. Mucosal immunisation: adjuvants and delivery systems. Curr Drug Deliv. 1 (4):385-96. 24). Los adyuvantes orales empleados hasta el momento como la toxina colérica (TC), por ej., tienen serios riesgos luego de la administración (Fujihashi, Koga, van

Ginkel, Hagiwara and McGhee. A dilemma for mucosal vaccination: efficacy versus toxicity using enterotoxin- based adjuvants. Vaccine. 2 (19-2):2431-8. 22), de manera que es muy importante en este campo, desarrollar adyuvantes más seguros que permitan la entrada eficiente de Ags a las superficies de mucosas, con la subsecuente inducción de respuesta inmune en mucosas.

[6] En el nivel internacional, la lista de productos con propiedades adyuvantes, es cada vez mayor; sin embargo, sólo un reducido número se utiliza en la formulación de vacunas veterinarias y humanas (Aucouturier, Dupuis and Ganne. Adjuvants designed for veterinary and human vaccines. Vaccine. 19 (17-19):2666-72. 21; Petrovsky ef al. Vaccine adjuvants: current State and future trends. Immunol Cell Biol. 82 (5):488-96. 24). Por tal razón, es importante desarrollar adyuvantes eficaces y a la vez seguros para vacunas humanas y animales.

[7] WO 224518 A1 (PF MEDICAMENT GOETSCH LILIANE; HAEUW JEAN FRANCOIS) 23 de mayo de 22.

[8] WO 224518 se refiere a una composición farmacéutica que comprende, en un medio farmacéuticamente aceptable, al menos un péptido derivado a partir de un dominio periplásmico de una protema Omp de enterobacteria o un constructo nucleico que codifica para dicho péptido, así como también el uso de tal péptido o de tal constructo, para preparar una vacuna para tratamiento profiláctico o terapéutico de infecciones virales, bacterianas, parasíticas o fúngicas, o para preparar una vacuna diseñada para tratamiento profiláctico o terapéutico de cánceres.

[9] Karina A. Pasquevich et al.; "Immunization with recombinant Brucella species outer membrane protein Ompl6 or Ompl9 in adjuvant induces specific CD4+ and CD8+ T cells as well as systemic and oral protection against Brucella abortus infection".

Infection and Immunity, American society for microbiology, USA; vol. 77, no. 1, January 29 (29-1), pages 436-445, ISSN: 19-9567, DOI: 1.1128/IAI.1151-8.

[1] KARINA A PASQUEVICH ET AL divulga la respuesta inmunogénica de Brucella abortus Omp16 y Omp19 no lipidificada en ratones. D2 divulga la producción de Brucella Omp16 y Omp19 recombinante no lipidada como vacuna. El artículo además muestra que Omp16 no lipidada y Omp19 no lipidada dan lugar a una respuesta inmune superior.

[11] En la actualidad la mayoría de los adyuvantes capaces de inducir fuertes respuestas Th1 son aquellos basados en emulsiones oleosas, como el adyuvante de Freund Incompleto (IFA), sin embargo estos traen aparejado reacciones adversas en el sitio de inyección, como abscesos estériles y granulomas. Por todo lo dicho anteriormente el desarrollo de adyuvantes parenterales y de mucosas que induzcan respuestas Th1 y CTL es muy relevante.

[12] En la presente invención se proveen dos nuevos adyuvantes: Omp16S y Omp19S. Estas sustancias aumentan y/o modulan las respuestas... [Seguir leyendo]

1. Adyuvante para vacunas, caracterizado porque el adyuvante comprende un polipéptido no lipidado de la membrana externa (Omp) de bacterias del género Brucella, seleccionado del polipéptido no lipidado Omp19S y el polipéptido no lipidado Omp16S.

2. El adyuvante de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el polipéptido no lipidado comprende

la SEQ ID N° 1.

3. El adyuvante de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el polipéptido no lipidado comprende la SEQ ID N° 2.

4. Una vacuna, caracterizada porque comprende un adyuvante de acuerdo con una cualquiera de las w reivindicaciones 1 a 3 y al menos un antlgeno.

5. La vacuna de acuerdo con la reivindicación 4, caracterizada porque la vacuna es una vacuna seleccionada del grupo que consiste en vacunas mucosales y parenterales.

6. El adyuvante de la reivindicación 1 para uso como adyuvante para vacunas contra un patógeno.

7. El adyuvante de la reivindicación 6, en donde el patógeno tiene al menos una fase intracelular en su ciclo de 15 vida.

8. El adyuvante de la reivindicación 6, en donde la vacuna es una vacuna antitumoral.

9. El adyuvante de la reivindicación 1 para uso como adyuvante en una composición inmunomoduladora.