Vacunas contra la malaria.

El uso de un antígeno de Plasmodium o un fragmento inmunogénico o fragmentos inmunogénicos del mismo y un adyuvante que comprende 3D-MPL y QS21 en una formulación de liposoma,

en la fabricación de un medicamento para inmunizar viajeros a regiones endémicas contra infección productiva por malaria, en el que el antígeno de Plasmodium es la proteína circumsporozoíto (CS) o un fragmento inmunogénico o fragmentos inmunogénicos de la misma capaces de provocar una respuesta inmunitaria contra Plasmodium y en el que la proteína CS o un fragmento de la misma está fusionada con el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg).

Vacunas contra la malaria

La presente invención se refiere a un nuevo uso del antígeno de la malaria para inmunizar contra infección y enfermedad por malaria. La invención se refiere, en particular, al uso de antígenos esporozoítos, en particular proteína circumsporozofto (CS) o fragmentos inmunogénicos o derivados de la misma, combinados con adyuvantes adecuados, para inmunizar individuos sin tratamiento previo frente a la malaria que esperan viajar a regiones endémicas, contra infección por malaria.

La malaria es uno de los principales problemas de salud en el mundo. Durante el siglo 2, el desarrollo económico y social, junto con las campañas contra la malaria, han provocado la erradicación de la malaria de grandes áreas del mundo, reduciendo el área afectada de la superficie de la región terrestre del 5 % al 27 %. Sin embargo, dado el crecimiento de la población esperado se prevé que en 21 la mitad de la población mundial, cerca de 3,5 mil millones de personas, estén viviendo en áreas en las que se transmite la malaria (Hay, 24). Las estimaciones actuales sugieren que hay más de 1 millón de muertes debidas a la malaria cada año, y los costes económicos solo para África son abrumadores (Bremen, 24).

Estas cifras ponen de relieve la crisis por malaria global y los problemas que tiene para la comunidad sanitaria internacional. Las razones de esta crisis son múltiples y varían desde la aparición de resistencia generalizada a fármacos disponibles, asequibles y previamente con alta eficacia, hasta el fracaso y deficiencia de sistemas sanitarios y la ausencia de recursos. Á menos que se descubran medios para controlar esta enfermedad, fallarán los esfuerzos globales para mejorar la salud y supervivencia infantil, reducir la pobreza, aumentar la seguridad y reforzar las sociedades más vulnerables.

La malaria también tiene riesgos para los que viajan a o trabajan en regiones endémicas que normalmente viven en países libres de malaria. Los riesgos pueden ser superiores para esta población viajera, ya que no tienen ninguna inmunidad espontánea frente a la malaria de una exposición natural. Otro aspecto del riesgo adquirido por un viajero en una región endémica de malaria es que la enfermedad a menudo se diagnostica de forma incorrecta en sus fases tempranas debido a los síntomas tipo gripe. Cuando la gravedad aumenta y la malaria finalmente se diagnostica, puede ser demasiado tarde. A los pocos días de los síntomas en aumento, se puede producir la muerte, por ejemplo, por malaria cerebral, o a veces insuficiencia orgánica (por ejemplo, hígado o riñón).

Una de las formas más agudas de la enfermedad está causada por el parásito protozoario Plasmodium falciparum que es responsable de la mayoría de la mortalidad atribuible a la malaria. Otra forma de la enfermedad está causada por Plasmodium vivax. P. vivax es la más extendida de todas las malarias. Además de estar presente en regiones tropicales y subtropicales, la capacidad del parásito para completar su ciclo en mosquitos a temperaturas tan bajas como 15 grados Celsius, le ha permitido extenderse en climas templados. Sin embargo, debido al hecho de que la infección por P. vivax es raramente mortal, los esfuerzos para controlar la malaria por P. vivax (mediante el desarrollo de vacunas) están quedando por detrás de los de aquellos para P. falciparum.

Una observación hecha hace 3 años proporciona un fuerte apoyo para la creencia de que finalmente se desarrollará una vacuna eficaz contra la malaria. Los ratones y los seres humanos pueden protegerse contra la malaria por inmunización con esporozoítos de la malaria vivos, atenuados por radiación. La persistencia de una fase intrahepática in vivo es necesaria para producir y mantener una inmunidad protectora, pero los mecanismos subyacentes aún no se han definido completamente. Los anticuerpos, células T CD8 y CD4 (Hoffman, 1996) se han implicado como mediadores inmunes efectores críticos.

El ciclo de vida de Plasmodium sp (por ejemplo, P. falciparum o P. vivax) es complejo, requiriendo dos huéspedes, el hombre y el mosquito para completarlo. La infección del hombre se inicia por la inoculación de esporozoítos en la saliva de un mosquito infectado. Los esporozoítos migran al hígado y allí infectan los hepatocitos (fase del hígado) donde se diferencian, mediante la fase intracelular exoeritrocítica, en la fase merozoíto que infecta glóbulos rojos (RBC) para iniciar la replicación cíclica en la fase sanguínea asexual. El ciclo se completa por la diferenciación de varios merozoítos en los RBC en gametocitos en fase sexual que el mosquito ingiere, donde se desarrollan a través de una serie de fases en el intestino medio para producir esporozoítos que migran a la glándula salivar.

La fase esporozoíto de Plasmodium sp (por ejemplo, P. falciparum o P. vivax) se ha identificado como una diana potencial de una vacuna contra la malaria. La proteína de superficie principal del esporozoíto se conoce como proteína circumsporozofto (proteína CS). Esta proteína se ha clonado, expresado y secuenciado para una diversidad de cepas, por ejemplo para P. falciparum la cepa NF54, clon 3D7 (Caspers, 1989). La proteína de la cepa 3D7 está caracterizada por tener una región repetida inmunodominante central que comprende un tetrapéptido Asn-Ala-Asn-Pro repetido 4 veces pero intercalada con cuatro repeticiones minoritarias del tetrapéptido Asn-Val-Asp-Pro. En otras cepas la cantidad de repeticiones mayoritarias y minoritarias varía así como su posición relativa. Esta porción central está flanqueada por una porción N y C-terminal compuesta por secuencias de aminoácidos no repetitivas denominadas como porción sin repeticiones de la proteína CS.

La vacuna contra la malaria RTS,S de GlaxoSmithKIine Biologicals basada en la proteína CS ha estado en desarrollo desde 1987 y actualmente es la vacuna candidata contra la malaria más avanzada en estudio (Ballou, 24). Esta vacuna tiene como diana específica la fase pre-eritrocítica de P. falciparum.

RTS.S/AS2A (RTS,S más adyuvante AS2A que contiene inmunoestimulantes QS21 y 3D-MPL en una emulsión de aceite en agua) se usó en estudios en Fase I consecutivos emprendidos en Gambia que implicó a adultos (Doherty, 1999) niños de edades 6-11 y 1-5 años (Bojang, 21), que confirmó que la vacuna era segura, bien tolerada e ¡nmunogénica. Posteriormente, se seleccionó una dosis de vacuna pediátrica y se estudió en un estudio en Fase I que implicó a niños mozambiqueños de edades 1-4 años donde se descubrió que era segura, bien tolerada e ¡nmunogénica (Mácete).

La vacuna RTS.S/AS2A también ha mostrado evidencias de eficacia en ensayos clínicos en los Estados Unidos y en el campo en África occidental. RTS.S/AS2A induce respuestas de anticuerpos IgG significativas contra la proteína circumsporozoíto de P. falciparum e inmunidad sustancial de células T (Lalvani, 1999; Sun, 23). Se ha estimado que la eficacia contra una estimulación experimental con P. falciparum en voluntarios sin tratamiento previo frente a la malaria en los Estados Unidos es de aproximadamente el 3-5 % de media (Stoute, 1997; Stoute 1998; Kester, 21). El primero de estos estudios (Stoute, 1997) tuvo una eficacia del 86 % en un ensayo a pequeña escala en el que fueron protegidos 6 de 7 individuos inmunizados con RTS,S/AS2A. Además, un estudio de campo de adultos semi-inmunes en Gambia (precedido por un estudio de seguridad en adultos gambianos (Doherty, 1999)) mostró una eficacia global del 34 % en un periodo de una temporada de transmisión de 15 semanas, con una eficacia del 71 % en las primeras nueve semanas de seguimiento y una eficacia del % después de ello (Bojang, 21). Estos estudios (Stoute, 1997; Stoute, 1998; Bojang, 21; Kester, 21) muestran eficacia contra la infección.

Se presentaron recientemente resultados de un ensayo usando RTS.S/AS2A en niños africanos jóvenes. Se descubrió que la vacuna RTS,S basada en la proteína CS puede proporcionar no sólo protección contra infección en exposición natural sino también protección contra un amplio espectro de enfermedades clínicas causadas por P. falciparum. Los niños que recibieron la vacuna RTS,S experimentaron menos acontecimientos adversos graves, hospitalizaciones, y complicaciones graves por malaria, incluyendo muerte, que los del grupo de control (Alonso, 24).

Además, la eficacia de la vacuna RTS,S, tanto contra infecciones nuevas como episodios clínicos parece no disminuir o lo hace lentamente. Al final de los 6 meses de seguimiento en el ensayo, la vacuna permaneció eficaz ya que hubo una diferencia significativa en el predominio de la infección. Esto está en contra de ensayos previos en voluntarios sin tratamiento previo frente a la malaria o adultos gambianos... [Seguir leyendo]

1. El uso de un antfgeno de Plasmodium o un fragmento inmunogénico o fragmentos inmunogénicos del mismo y un adyuvante que comprende 3D-MPL y QS21 en una formulación de liposoma, en la fabricación de un medicamento para inmunizar viajeros a regiones endémicas contra infección productiva por malaria, en el que el antígeno de Plasmodium es la protema circumsporozoíto (CS) o un fragmento inmunogénico o fragmentos inmunogénicos de la misma capaces de provocar una respuesta inmunitaria contra Plasmodium y en el que la proteína CS o un fragmento de la misma está fusionada con el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg).

2. El uso según la reivindicación 1, en el que la proteína CS o fragmento o fragmentos de la misma está en forma de una proteína híbrida que comprende toda la porción C-terminal de la proteína CS de Plasmodium, cuatro o más repeticiones en tándem de la región ¡nmunodominante de la proteína CS, y el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg).

3. El uso según la reivindicación 1 o 2, en el que la proteína híbrida comprende una secuencia de la proteína CS de P. falciparum que corresponde a los aminoácidos 27-395 de la proteína CS del clon 3D7 de la cepa NF54 de P. falciparum fusionada en trama mediante un engarce lineal al extremo N-terminal de HBsAg.

4. El uso según la reivindicación 3, en el que la proteína híbrida es RTS.

5. El uso según la reivindicación 4, en el que la RTS está en forma de partículas RTS,S mixtas.

6. El uso según la reivindicación 5, en el que la cantidad de RTS,S es 25 o 5 pg por dosis.

7. El uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en el que el QS21 está inactivado en liposomas que contienen colesterol.

8. El uso según la reivindicación 7, junto con un polinucleótido que codifica el antígeno de Plasmodium o un fragmento inmunogénico o fragmentos inmunogénicos del mismo, en el que la mezcla antígeno/adyuvante y el polinucleótido son para su uso secuencial en cualquier orden.

9. El uso según la reivindicación 8, en el que el polinucleótido es usado primero.

1. Una formulación que comprende un antígeno de Plasmodium o un fragmento Inmunogénico o fragmentos inmunogénicos del mismo y un adyuvante, que comprende 3D-MPL y QS21 en una formulación de liposoma, para su uso en la Inmunización de viajeros a reglones endémicas contra Infección productiva por malaria, en la que el antígeno de Plasmodium es la proteína circumsporozoíto (CS) o un fragmento Inmunogénico o fragmentos Inmunogénicos de la misma capaces de provocar una respuesta Inmunitaria contra Plasmodium y en la que la proteína CS o un fragmento de la misma está fusionada con el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg).

11. La formulación para su uso según la reivindicación 1, en la que la proteína CS o fragmento o fragmentos de la misma está en forma de una proteína híbrida que comprende toda la porción C-terminal de la proteína CS de Plasmodium, cuatro o más repeticiones en tándem de la región ¡nmunodominante de la proteína CS, y el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg).

12. La formulación para su uso según la reivindicación 1 u 11, en la que la proteína híbrida comprende una secuencia de la proteína CS de P. falciparum que corresponde a los aminoácidos 27-395 de la proteína CS del clon 3D7 de la cepa NF54 de P. falciparum fusionada en trama mediante un engarce lineal al extremo N-terminal de HBsAg.

13. La formulación para su uso según la reivindicación 12, en la que la proteína híbrida es RTS.

14. La formulación para su uso según la reivindicación 13, en la que la RTS está en forma de partículas RTS,S mixtas.

15. La formulación para su uso según la reivindicación 14, en la que la cantidad de RTS,S es 25 o 5 pg por dosis.

16. La formulación para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en la que el QS21 está ¡nactlvado

en liposomas que contienen colesterol.

17. La formulación para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 16, para su uso como parte de un régimen de sensibilización/refuerzo, en la que una parte adicional comprende un polinucleótido que codifica el antígeno de Plasmodium o un fragmento inmunogénico o fragmentos inmunogénicos del mismo, en la que la mezcla antígeno/adyuvante y el polinucleótido son para su uso secuencial en cualquier orden.

18. La formulación para su uso según la reivindicación 17, en la que el polinucleótido es usada primero.

19. El uso de un antígeno de Plasmodium o un fragmento inmunogénico o fragmentos inmunogénicos del mismo y un adyuvante que comprende 3D-MPL y QS21 en una formulación de liposoma, en la fabricación de un kit para inmunizar viajeros a regiones endémicas contra infección por malaria, en el que el antígeno es proporcionada en forma liofilizada y el antígeno y el adyuvante son mezclados antes de la administración, en el que el antígeno de Plasmodium es la

proteína circumsporozoíto (CS) o un fragmento inmunogénico o fragmentos inmunogénicos de la misma capaces de provocar una respuesta inmunitaria contra Plasmodium y en la que la proteína CS o un fragmento de la misma está fusionada con el antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg).

células positivas a dos cito ciñas por 1` células

MALG27 : Respuesta tíe células T CD4 contra CSP

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Adyuvante B

células T (JCD4+/millón de células T CD4+

células positivas a dos citocinas por 1` células

células T dCD4+ímillón de cé ulas T CD4+