Un ligando peptídico para alterar la migración de células cancerígenas.

Un péptido seleccionado a partir del grupo que consiste en:

LGTQGRLCNKTSEGMDGC  

EL SEQ. ID. NO: 1

GTQGRLCNKTSEGMDGC    EL SEQ. ID. NO: 2

TQGRLCNKTSEGMDGC    EL SEQ. ID. NO: 3

QGRLCNKTSEGMDGC    EL SEQ. ID. NO: 4

GRLCNKTSEGMDGC    EL SEQ. ID. NO: 5

RLCNKTSEGMDGC      EL SEQ. ID. NO: 6

LCNKTSEGMDGC      EL SEQ. ID. NO: 7

CNKTSEGMDGC      EL SEQ. ID. NO: 8

NKTSEGMDGC      EL SEQ. ID. NO: 9

KTSEGMDGC      EL SEQ. ID. NO: 10

TSEGMDGC      EL SEQ. ID. NO: 11

SEGMDGC      EL SEQ. ID. NO: 12

EGMDGC      EL SEQ. ID. NO: 13.

Un ligando peptídico para alterar la migración de células cancerígenas Campo técnico La presente invención se refiere a un nuevo ligando peptídico, utilizado por lo general para alterar la migración de células cancerígenas, en particular de cáncer de mama y de colon, y para actuar como supresor tumoral en el carcinoma de tiroides y el neurocarcinoma. En particular se refiere a un ligando hexapéptido.

Introducción Las proteínas Wnt son una familia de glicoproteínas secretadas, con un peso molecular de 39-46 kDa que participan en el desarrollo y la génesis tumoral a través de rutas autocrinas o paracrinas (para una revisión, véase (1-3) ) . Las proteínas Wnt secretadas se unen y activan los receptores acoplados a proteína G de la familia Frizzled (Frz) (4, 5) . Las proteínas relacionadas con el receptor LDL, LRP5 o LRP6, se presume que actúan como correceptores en este contexto (6, 7) . Basándose en la capacidad de diferentes proteínas Wnt para transformar células epiteliales mamarias de ratón, se pueden dividir en tres clases diferentes. Wnt-1, Wnt-3a y Wnt-7a tienen la mayor capacidad de transformación; Wnt-2, Wnt-5b y Wnt-7b tienen una capacidad de transformación intermedia; y Wnt-4, Wnt-5a y Wnt6 no son transformadoras (8) .

Se ha descrito previamente que un nivel bajo de expresión de la proteína Wnt-5a en un carcinoma de mama invasivo primario, está asociado con un mayor grado histológico (diferenciación deficiente) y una supervivencia acortada exenta de recurrencia, debido a un desarrollo más rápido de metástasis distantes (9) . Esta asociación no se debe a un efecto de Wnt-5a sobre la proliferación, ya que no se ha detectado una correlación entre la pérdida de expresión de la proteína Wnt-5a y el marcador de proliferación Ki67 (9) . La única explicación actualmente disponible de cómo la presencia de Wnt-5a puede reducir la capacidad metastásica del cáncer de mama invasivo, es su capacidad para permitir el aumento de la adhesión, presumiblemente a través del receptor 1 del dominio discoidina, activado con colágeno (DDR1) , sin embargo es posible que mecanismos todavía sin definir también pudieran contribuir al efecto clínico descrito de Wnt-5a sobre la progresión tumoral. A pesar de esto, una activación dependiente de Wnt-5a, de DDR1 se traduce en una disminución de la motilidad y del potencial invasivo de las células cancerígenas epiteliales de mama (10) . En las células epiteliales de mama que normalmente son muy adhesivas, una disminución de la expresión de Wnt-5a y, por lo tanto, una disminución de la adhesión, aumentará su motilidad. En consecuencia, se ha observado que era necesaria la introducción estable de un vector de expresión de Wnt-5a en una línea celular de cáncer de mama MCF-7 con una expresión endógena reducida de Wnt-5a, para la activación inducida con colágeno del receptor de adhesión DDR1 (10) . De forma recíproca, la transfección de la línea celular epitelial mamaria humana normal HB2 (11) transfectada de forma estable con Wnt-5a o Wnt-5a antisentido, causó un aumento o disminución respectiva de la adhesión de estas células al colágeno I (12) . En células mamarias humanas aún no se ha establecido a través de cuál de los diferentes receptores Frz, en los que media Wnt-5a, se lleva a cabo. Sin embargo, en sinoviocitos similares a fibroblastos y en células de melanoma maligno, se ha observado claramente con un Ac que bloquea específicamente, que el receptor responsable de los efectos inducidos por Wnt-5a es Frz-5 (13, 14) .

Para desarrollar un tratamiento específico para la metástasis del cáncer de mama, basado en el papel funcional de Wnt-5a, es importante entender los eventos celulares y moleculares responsables de sus efectos sobre este tumor epitelial. Uno de los eventos decisivos e iniciales en la metástasis del cáncer, es la capacidad de las células transformadas para dejar de estar adheridas entre sí y también de los componentes de la ECM (matriz extracelular) de la membrana basal (15) . En presencia de Wnt-5a, el receptor DDR1 de adhesión puede ser activado por colágeno en las células epiteliales de mama y, por lo tanto, es un posible candidato que podría mediar en el aumento de la adhesión al colágeno inducida por Wnt-5a de estas células (10) . Una posible explicación de la actividad metastásica elevada observada en los carcinomas de mama que carecen de Wnt-5a, podría ser una adhesión reducida y un aumento posterior de la actividad móvil en estas células tumorales. Por lo tanto, una metodología para reducir la actividad metastásica en carcinomas de mama que carecen de expresión de la proteína Wnt-5a, podría ser encontrar una manera de superar el defecto de la traducción, responsable de la pérdida de expresión de la proteína Wnt-5a (16) y otra, reconstituir la activación de las células inducida por Wnt-5a. Experimentalmente, la adición de Wnt-5a recombinante a carcinomas de tiroides diferenciados, ha mostrado que tiene actividad supresora tumoral (17) . Sin embargo, la adición de una proteína Wnt-5a grande de 43 kDa a un paciente, lo más probable a lo largo de un período de tiempo prolongado, no se materializa como una metodología muy atractiva.

Un trabajo previo de Andersen y sus colaboradores (18) en plaquetas ha identificado dos fragmentos hexapéptidos diferentes que pueden activar específicamente los receptores activados por proteasas acoplados a la proteína G, PAR1 y PAR4, respectivamente. Otros pequeños péptidos bien estudiados que se pueden unir específicamente y activan los receptores acoplados a la proteína G en células de mamífero con una potencia elevada, son los péptidos formilados obtenidos a partir de bacterias que se unen y activan el receptor peptídico quimiotáctico sobre los leucocitos (19) . En esta situación, se ha observado que el grupo formilo aumenta mucho las afinidades de unión de los péptidos hacia el receptor y, por consiguiente, también la amplificación de la activación de las células (19) . Curiosamente, estos péptidos son funcionalmente activos incluso a un pH bajo, tal como el que se encuentra en los sitios de inflamación. El pH en los sitios de inflamación es más probable que sea más bajo que el pH estimado en un tumor

sólido (20, 21) .

Compendio de la presente invención La presente invención se refiere a nuevos ligandos peptídicos obtenidos a partir de Wnt-5a que muestran una reducción de la motilidad de las células cancerígenas y un aumento de la adhesión, con lo que perjudican la migración de las células cancerígenas. En el presente estudio se han identificado e investigado 14 fragmentos peptídicos, basándose en el análisis de la secuencia de Wnt-5a, por su capacidad para imitar los efectos de la proteína Wnt-5a sobre la adhesión de las células mamarias y la locomoción, con el fin de identificar una sustancia potencial para el tratamiento antimetastásico de carcinomas de mama y de colon que tienen una expresión endógena reducida de Wnt-5a. Los ligandos peptídicos también actuarán como un supresor tumoral en el carcinoma de tiroides y el neurocarcinoma. En particular, la invención se refiere a un ligando hexapéptido.

Descripción detallada de la presente invención La invención se describirá y explicará a continuación, haciendo referencia a la descripción técnica siguiente, así como a las figuras y los gráficos adjuntos que muestran detalles de las pruebas realizadas.

La presente invención se refiere a nuevas estructuras peptídicas que tienen las secuencias de aminoácidos LGTQGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO. 1

GTQGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO. 2

TQGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO. 3

QGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO. 4

GRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO. 5

RLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO. 6

LCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO. 7

CNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO. 8

NKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO. 9

KTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO. 10

TSEGMDGCEL SEQ. ID. NO. 11

SEGMDGCEL SEQ. ID. NO. 12

EGMDGCEL SEQ. ID. NO. 13

En el estudio que conduce a la presente invención también se utilizaron los siguientes péptidos:

GMDGCEL SEQ. ID. NO. 14

MDGCEL SEQ. ID. NO. 15

así como derivados formilados.

Una realización preferida de la invención, se refiere a las estructuras peptídicas de SEQ. ID. NO. 9 a SEQ. ID. NO.

13.

Un aspecto adicional de la invención, se refiere al uso de uno o varios de los aminoácidos codificados por las secuencias LGTQGRLCNKTSEGMDGCEL GTQGRLCNKTSEGMDGCEL TQGRLCNKTSEGMDGCEL QGRLCNKTSEGMDGCEL GRLCNKTSEGMDGCEL RLCNKTSEGMDGCEL LCNKTSEGMDGCEL CNKTSEGMDGCEL NKTSEGMDGCEL KTSEGMDGCEL TSEGMDGCEL SEGMDGCEL EGMDGCEL

en la preparación de una composición farmacéutica utilizada... [Seguir leyendo]

1. Un péptido seleccionado a partir del grupo que consiste en:

LGTQGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 1 GTQGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 2 TQGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 3 QGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 4 GRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 5 RLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 6 LCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 7 CNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 8 NKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 9 KTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 10 TSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 11 SEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 12 EGMDGCEL SEQ. ID. NO: 13.

2. Un péptido según la reivindicación 1, en el que el péptido es NKTSEGMDGCEL (SEQ. ID. NO: 9) y en don5 de la cisteína situada entre la glicina y el ácido glutámico en el péptido ha sido sustituida con alanina.

3. El uso de un péptido seleccionado a partir del grupo que consiste en:

LGTQGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 1 GTQGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 2 TQGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 3 QGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 4 GRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 5 RLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 6 LCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 7 CNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 8 NKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 9 KTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 10 TSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 11 SEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 12 EGMDGCEL SEQ. ID. NO: 13

en la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento del cáncer mediante una alteración de la motilidad de las células cancerígenas.

4. El uso según la reivindicación 3, en el que el péptido es NKTSEGMDGCEL (SEQ. ID. NO: 9) y en donde la 10 cisteína situada entre la glicina y el ácido glutámico en el péptido ha sido sustituida con alanina.

5. El uso según la reivindicación 3 o 4, en el que la composición farmacéutica es para el tratamiento del cáncer de mama.

6. El uso según la reivindicación 3 o 4, en el que la composición farmacéutica es para el tratamiento del cáncer de colon.

7. Una composición farmacéutica que contiene una cantidad terapéuticamente activa de un péptido activo que altera la motilidad de las células cancerígenas seleccionado a partir del grupo que consiste en:

LGTQGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 1 GTQGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 2

TQGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 3 QGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 4 GRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 5 RLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 6 LCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 7 CNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 8 NKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 9 KTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 10 TSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 11 SEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 12 EGMDGCEL SEQ. ID. NO: 13

opcionalmente en combinación con un vehículo o un excipiente inerte.

8. Una composición farmacéutica según la reivindicación 7, en la que el péptido es NKTSEGMDGCEL (SEQ. ID. NO: 9) y en donde la cisteína situada entre la glicina y el ácido glutámico en el péptido se ha sustituido por alanina.

9. Un péptido seleccionado a partir del grupo que consiste en:

LGTQGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 1 GTQGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 2 TQGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 3 QGRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 4 GRLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 5 RLCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 6 LCNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 7 CNKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 8 NKTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 9 KTSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 10 TSEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 11 SEGMDGCEL SEQ. ID. NO: 12 EGMDGCEL SEQ. ID. NO: 13

para uso en el tratamiento del cáncer.

10. Un péptido para uso según la reivindicación 9, en el que el péptido es NKTSEGMDGCEL (SEQ. ID. NO: 9) y en donde la cisteína situada entre la glicina y el ácido glutámico en el péptido ha sido reemplazada por alanina.

11. Un péptido para uso según la reivindicación 9 o 10, en el que dicho cáncer es cáncer de mama.

12. Un péptido para uso según la reivindicación 9 o 10, en el que dicho cáncer es cáncer de colon.