Matriz extracelular que comprende factores plaquetarios.

Matriz tridimensional para reemplazar la dermis compuesta por una membrana monocapa o bicapa,

en la que la parte destinada para reemplazar la dermis es una estructura porosa que comprende factores plaquetarios, estando dicha matriz caracterizada porque:

- dichos poros tienen un diámetro superior a 2 micrómetros;

- dichos factores plaquetarios están contenidos en una preparación compuesta por una mezcla de adhesivo de fibrina, gel plaquetario, trombina;

- dicho gel plaquetario y adhesivo de fibrina se forman en el interior de la matriz "in situ".

Matriz extracelular que comprende factores plaquetarios.

Campo de la invención [0001] La presente invención se refiere al campo de la reparación y/o regeneración tisular.

Estado de la técnica

La necesidad de influir en los procesos de reparación del tejido para facilitar la cicatrización de heridas, así como la inducción de la regeneración real del tejido dañado después de eventos traumáticos o patológicos (tales como lesiones, quemaduras, escisión quirúrgica) , siempre ha sido uno de los principales problemas para aquellos que se ocupan de la reconstrucción tisular.

La ingeniería tisular se originó como un intento de construir tejido y órganos fuera del cuerpo humano, en base al hecho de que casi todas las células animales pueden ser cultivadas en el laboratorio.

Sin embargo, debe recordarse que las células cultivadas proliferan formando únicamente capas bidimensionales, que no pueden equipararse a los tejidos, puesto que estos últimos son estructuras tridimensionales que tienen células dentro o en su superficie superior; por lo tanto, es necesario usar andamios artificiales con el fin de proporcionar un soporte adecuado (matriz extracelular) a las células para la regeneración tisular.

Es obvio que es extremadamente importante desarrollar matrices extracelulares capaces de proporcionar 25 un medio eficaz para la reconstrucción del tejido que se ha destruido después de eventos traumáticos o patológicos.

El documento WO02/43692 describe la fabricación de una composición para tratar lesiones. Dicha composición se forma por la incorporación de una sal de calcio en una matriz polisacarídica porosa. Dicha matriz se pone en contacto con plasma rico en plaquetas.

El documento EP1184040 describe una matriz para la regeneración de la piel que comprende una malla de un material de matriz extracelular, en la que se forma fibrina en los poros de la malla a partir de una composición que comprende fibrinógeno, trombina, calcio y el factor XIII.

Breves descripciones de las figuras

La figura 1 muestra una matriz de acuerdo con la invención, inmediatamente después de la preparación. 40 La figura 2 muestra un ejemplo de una aplicación de una matriz de acuerdo con la invención.

Resumen [0009] En este documento se describen matrices extracelulares que comprenden factores plaquetarios, como se 45 describe en la reivindicación independiente 1, y procedimientos para la preparación de las mismas, como se describe en la reivindicación independiente 6.

Descripción detallada de la invención 50 [0010] La presente invención permite superar los inconvenientes que se han mencionado anteriormente gracias a una matriz extracelular que comprende factores de crecimiento derivados de plaquetas humanas que son capaces de maximizar la eficacia terapéutica mediante la combinación de los beneficios obtenidos de los dos componentes, la matriz y los factores de crecimiento, reduciendo la fase inflamatoria, anticipando así la migración celular y la proliferación, dando como resultado una integración más rápida y eficiente de la matriz hasta que se logra una 55 reconstrucción organizada de forma estructural del tejido neoformado "in vivo".

De acuerdo con la invención, la expresión matriz celular se refiere a una matriz modificada por bioingeniería o heteróloga capaz de permitir enlaces estables entre las células y la matriz (generalmente con el componente proteico y/o polisacarídico) .

Por lo tanto, las matrices extracelulares de acuerdo con la invención deben tener:

- Un nivel de porosidad que permite a las células recrear un microambiente adecuado para el sitio

específico y el tejido específico

- la capacidad de comunicar e intercambiar señales con las células huésped,

- una estructura adecuada para el crecimiento de vasos y células, en caso necesario.

- degradación controlada capaz de metabolizarse y reemplazarse por la matriz extracelular producida por 5 las propias células.

Generalmente, las matrices asignadas para sustitución dérmica de acuerdo con la invención se componen de una membrana de doble capa, la parte destinada a reemplazar la dermis con una estructura porosa.

En general, las matrices modificadas por bioingeniería se componen de cualquier tipo de biomaterial tolerable y biocompatible que comprende un componente proteico y/o polisacarídico tal como, por ejemplo, colágenos, glicosaminoglicanos (como ácido hialurónico) , celulosa y/o combinaciones de estos materiales. Además, existen matrices heterólogas acelulares biológicas humanas, tal como dermis desepidermizada (DED) o que pueden obtenerse a partir de animales, tales como la matriz obtenida de la submucosa del intestino delgado del cerdo.

Es preferible proporcionar matrices tridimensionales con una porosidad que permite que las células se recreen en un microentorno adecuado para el sitio específico y el tipo de tejido.

En particular, es preferible proporcionar matrices con una porosidad adecuada para permitir la adsorción de 20 las plaquetas y las proteínas contenidas en el crioprecipitado con el fin de conseguir una concentración plaquetaria terapéutica de aproximadamente 1-2 x 109 por ml.

Dadas las condiciones que se han mencionado anteriormente, las matrices útiles de acuerdo con la invención deben tener poros con un diámetro superior a 2 micrómetros.

La membrana que forma la matriz dérmica puede revestirse (o no) con una película de un material semipermeable, tal como polisiloxano o un elastómero, que forma la parte que reemplaza la epidermis.

Normalmente, se usan matrices sin película para añadir espesor a la capa de regeneración dérmica, 30 durante el tratamiento de heridas profundas.

La porción dérmica actúa como un andamio para la infiltración de fibroblastos, macrófagos, linfocitos y células endoteliales capilares que forman la red neo-vascular. A medida que mejora la salud, la capa de matriz se reabsorbe y se deposita una nueva matriz extracelular por los fibroblastos para formar la neodermis. Cuando la vascularización de la neodermis es adecuada, y a condición de que esté disponible el autoinjerto, puede eliminarse cualquier película que se use para reemplazar la epidermis, y si es necesario, se pone una fina capa de autoinjerto epidérmico en la neodermis. Las células de injerto epidérmico crecen y forman una epidermis madura que proporciona una dermis y epidermis funcional.

Un ejemplo particular de una matriz extracelular de acuerdo con la invención es la matriz Integra® (Integra Lifesciences Corp., Plainsboro, NJ, Estados Unidos) .

La expresión factores plaquetarios se refiere a los componentes terapéuticos de la sangre que pueden obtenerse a través de gránulos alfa de liberación obtenidos durante la agregación de un concentrado plaquetario 45 situado en contacto con calcio y factores proagregantes biológicos y farmacológicos (trombina) .

Dichos factores plaquetarios pueden ser obviamente autólogos o heterólogos o recombinantes.

En particular, de acuerdo con la invención, así como otros mediadores bioquímicos que se liberan por las 50 propias plaquetas, los propios factores plaquetarios se encuentran en una preparación compuesta por una mezcla de adhesivo de fibrina, gel plaquetario y trombina.

Todos estos componentes están implicados en la reparación/regeneración tisular y pueden ser de origen autólogo o heterólogo.

Para preparar las matrices extracelulares de acuerdo con la invención, el gel plaquetario y el adhesivo de fibrina se forman "in situ" en el interior de la matriz a través de la acción, respectivamente, de la trombina en el concentrado plaquetario (PRP) y en el crioprecipitado (CRIO) usados previamente para impregnar la matriz.

En particular, después de haber preparado la matriz de acuerdo con las instrucciones de usuario impresas en el catálogo ilustrado del fabricante, se aclara con una solución fisiológica que elimina todo el exceso y se deposita en un recipiente de base plana, tal como una bandeja quirúrgica.

Se usa una jeringa para poner gotas del PRP/CRIO en la matriz en una gran cantidad suficiente para asegurar que la matriz se impregna completamente (normalmente en una relación de 2:1 en volumen) , después se agita suavemente y se deja sedimentar, repitiéndose el procedimiento varias veces. Después, usando una jeringa, se ponen gotas de una mezcla de gluconato cálcico y trombina en la matriz, se agita suavemente y después se deja sedimentar hasta que se forma el gel.

La matriz preparada de esta manera puede usarse inmediatamente, o puede mantenerse a una temperatura inferior... [Seguir leyendo]

1. Matriz tridimensional para reemplazar la dermis compuesta por una membrana monocapa o bicapa, en la que la parte destinada para reemplazar la dermis es una estructura porosa que comprende factores plaquetarios, estando 5 dicha matriz caracterizada porque:

- dichos poros tienen un diámetro superior a 2 micrómetros;

- dichos factores plaquetarios están contenidos en una preparación compuesta por una mezcla de adhesivo

de fibrina, gel plaquetario, trombina.

10. dicho gel plaquetario y adhesivo de fibrina se forman en el interior de la matriz "in situ".

2. Matriz de acuerdo con la reivindicación 1, en la que dicha matriz está modificada por bioingeniería o es heteróloga.

3. Matriz de acuerdo con la reivindicación 2, en la que dicha matriz modificada por bioingeniería está compuesta por cualquier tipo de biomaterial tolerable y biocompatible que comprende un componente proteico y/o polisacarídico.

4. Matriz de acuerdo con la reivindicación 2, en la que dicha matriz heteróloga es una matriz de origen biológico humano y/o animal. 20

5. Matriz de acuerdo con las reivindicaciones 1-4, en la que dicha matriz está revestida con una película de material semi-permeable que forma la parte que reemplaza la epidermis.

6. Procedimiento para la preparación de matrices extracelulares de acuerdo con las reivindicaciones 1-5, en el que el

gel plaquetario y el adhesivo de fibrina se forman en el interior de la matriz "in situ" respectivamente a través de la acción de la trombina en el concentrado plaquetario (PRP) y en el crioprecipitado (CRIO) usados previamente para impregnar la matriz.

7. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 6, en el que: 30

- la matriz se aclara con una solución fisiológica que elimina todo el exceso, y se coloca en un recipiente de base plana;

- usando una jeringa, se ponen gotas de concentrado plaquetario y CRIO en la matriz en tal cantidad como

para impregnarla completamente; después se deja sedimentar, repitiéndose este procedimiento varias 35 veces;

- usando una jeringa, a la matriz se le añaden gotas de una mezcla de gluconato cálcico y trombina, después de lo cual se agita suavemente y se deja sedimentar hasta que se forma el gel.

8. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 7, en el que el gluconato cálcico está en una solución acuosa al 40 10% y la proporción de gluconato cálcico/trombina está entre 1:5-1:10 en volumen.

9. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 8, en el que la proporción (mezcla de gluconato cálcico y trombina) / (PRP-CRIO) está entre 1:5 y 1:10 en volumen.

10. Matriz de acuerdo con las reivindicaciones 1-5 que también contiene monocitos y/o células madre.