Materiales para el control de la enfermedad respiratoria en caninos.

Un virus de influenza canina aislado que es capaz de infectar un animal cánido,

donde dicho virus de la influenza comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido hemaglutinina (HA) que tiene una secuencia de aminoácidos que se muestra en la SEC ID Nº 62; o una secuencia madura de la misma donde la secuencia de señal de 16 aminoácidos del extremo N se ha retirado de la secuencia de longitud completa.

Materiales para el control de la enfermedad respiratoria en caninos

Antecedentes de la Invención La “tos de las perreras” o traqueobronquitis infecciosa (ITB) es una infección respiratoria aguda, contagiosa de los perros que se caracteriza principalmente por tos (Ford y col, 1998) . La ITB canina se considera una de las enfermedades respiratorias infecciosas más prevalente en perros de todo el mundo, los brotes pueden alcanzar proporciones epidémicas cuando los perros se alojan en sitios con alta densidad de población como son las perreras. La mayoría de los brotes se deben al contacto directo perro a perro o a la aerosolización de las secreciones respiratorias (Ford y col, 1998) . Los signos clínicos se producen por la infección con uno o una combinación de agentes bacterianos y víricos que colonizan el epitelio del tracto respiratorio superior e inferior. Los organismos aislados más comunes de los perros afectados son virus de la parainfluenza canina (CPiV) y Bordetella bronchiseptica, pero otros varios virus tales como el virus del moquillo canino (CDV) y adenovirus canino-1 y 2 (CAV-1, CAV-2) , junto con bacterias tales como Streptococcus sp., Pasteurella multocida y Escherichia coli, pueden tener alguna influencia en el curso clínico y en el resultado (Ford y col, 1998) . Aunque los brotes se producen con más eficacia y rápidamente en poblaciones con alta densidad con alta morbilidad, las infecciones respiratorias complicadas y la muerta son poco comunes. Aunque se pueden producir neumonías secundarias que pongan en peligro la vida, la mayoría de los casos de ITB son autolimitantes y se resuelven sin tratamiento (Ford y col, 1998) .

En julio de 1992, se produjo una infección respiratoria que se presumió como “tos de las perreras que llegó a ser epidémica en varios canódromos de galgos Greyhounds en Nueva Inglaterra, Florida, Virginia del Oeste, Wisconsin, Kansas, Colorado, Oklahoma y Arizona. Según los veterinarios, la mayoría de los perros afectados tenía una tos ligera que se resolvió, pero más de una docena de galgos Greyhounds desarrolló una neumonía hemorrágica aguda seguida de una muerte rápida (Greyhound Daily News, 1999) .

De finales de 1998 a principios de 1999, se produjeron varios brotes de “tos de las perreras” en las perreras de galgos Greyhounds de carreras por todo el país, lo que resultó en la orden de clausura de los canódromos y la cuarentena de todos los galgos Greyhounds de carreras en los EE. UU. durante varias semanas (Greyhound Daily News, 1999) . En un canódromo de Florida (Palm Beach Kennel Club) , la tos se registró en cerca del 40% de la población de perros en un solo día (comunicación personal del Dr. William Duggar) . Al igual que en el brote de 1992, la tos se resolvió en la mayoría de los galgos Greyhounds, pero 10 perros murieron en Florida de un síndrome de neumonía hemorrágica no característico de la “tos de las perreras” (Putnam, 1999) .

En marzo-abril de 2003, se produjo otro brote de “tos de las perreras” en canódromos de galgos Greyhounds en el este de los EE. UU. Se cree que el brote se originó en las perreras de cuatro canódromos de Florida y produjo la suspensión de las carreras y la cuarentena de los perros durante casi tres semanas. Cerca del 25% de los perros en el canódromo de West Palm Beach estaban afectados, mientras que casi el 50% de los 1.400 perros del Derby Lane en San Petersburgo desarrollaron tos. De nuevo, la mayoría de los perros se recuperaron, pero varios perros murieron de la infección respiratoria. El impacto económico estimado del brote respiratorio en el canódromo Derby Lane solo fue de 2 millones de dólares.

No se han publicado informes documentando la etiología o la clinicopatología de las epidemias de “tos de las 45 perreras” en las perreras de galgos Greyhounds de carreras de 1992, 1998-1999, o 2003. Se ha asumido que las infecciones se debieron a CPiV y/o B. bronchiseptica, las dos causas más comunes de tos de las perreras. Algunas comunicaciones insustanciales tales como páginas de internet han atribuido las neumonías hemorrágicas fatales comunicadas en algunos perros de la tos a infecciones por Streptococcus equi β-hemolíticos subespecie zooepidemicus, y se refieren al síndrome como “choque tóxico estreptocócico canino”.

La transmisión de virus de una especie huésped a otra es una característica crucial de la ecología y epidemiología del virus de la influenza (Webster, 1998) . Son posibles dos mecanismos básicos de la transmisión interespecies (Webster y col., 1992; Lipatov y col., 2004) . Uno es la transferencia directa de un virus esencialmente sin alterar de una especie a otra. Ejemplos de este mecanismo incluye las recientes infecciones humanas con el subtipo H5N1 del

virus de la influenza aviar (Subbarao y col., 1998; Peiris y col., 2004; Guan y col., 2004) y posiblemente la pandemia de 1918, conocida como gripe española (Reid y col., 2004) . El segundo mecanismo es consecuencia de la naturaleza segmentada del genoma de la influenza. La co-infección de un huésped con virus de diferentes especies puede dar lugar a una combinación de los genes segmentados víricos y la generación de un recombinante con la capacidad de infectar otras especies. Por ejemplo, los nuevos virus generados por combinación genética entre los virus de la influenza aviares y humanos dio como resultado la pandemia de influenza humana de 1957 y 1968 (Webster y col., 1992; Lipatov y col., 2004; Kawaoka y col., 1989) .

La mayoría de transmisiones directas de virus de la influenza sin modificar de la especie huésped natural a una especie diferente son acontecimientos terminales debido a que la transmisión sostenida entre individuos de la nueva 65 especie no se produce. Son necesarias las interacciones de huésped -múltiples virus para la replicación y la transmisión horizontal y proporciona una barrera formidable a la perpetuación de los virus de la influenza en el nuevo

huésped (Webby y col., 2004) . Por lo tanto, el establecimiento de nuevos linajes de virus específicos de huésped de la influenza es poco común y solo ha ocurrido en aves domésticas, cerdos, caballos y seres humanos (Webster y col., 1992; Lipatov y col., 2004) .

Debido a la naturaleza grave de la infección por virus de influenza, sigue habiendo una necesidad de métodos para diagnosticar, prevenir y tratar la infección por virus de la influenza.

Breve resumen de la Invención El objetivo de la invención se refiere a un virus de la influenza aislado que es capaz de infectar a cánidos y producir enfermedad respiratoria en los cánidos.

La invención es la siguiente:

1. Un virus de influenza canina aislado que es capaz de infectar un animal cánido, donde dicho virus de influenza comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido hemaglutinina (HA) que tiene una secuencia de aminoácidos que se muestra en la SEC ID Nº 62, o una secuencia madura del mismo donde se ha retirado la secuencia de señal de 16 aminoácidos del extremo N de la secuencia de longitud total.

2. El virus de la influenza de acuerdo con el punto 1, donde dicho virus de la influenza comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos que se muestra en cualquiera de las SEC ID Nos 48, 50, 52, 54, 56, 58, o 60, o un fragmento funcional y/o inmunogénico de la misma, o dicho polinucleótido codifica un polipéptido que tiene una identidad de secuencia del 95% o más con la secuencia de aminoácidos que se muestra en cualquiera de las SEC ID Nos 48, 50, 52, 54, 56, 58, o 60.

3. El virus de la influenza del punto 1, donde dicho polipéptido HA de dicho aislado vírico comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID Nº 62.

4. El virus de la influenza de acuerdo con el punto 1, donde dicho virus de la influenza comprende un polinucleótido que tiene la secuencia de nucleótidos que se muestra en cualquiera de las SEC ID Nos 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, or 61, o dicho polinucleótido tiene una identidad de secuencia del 98% o más con la secuencia de nucleótidos que se muestra en cualquiera de las SEC ID Nos 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, o 61.

5. El virus de la influenza del punto 1, donde dicho virus de la influenza está inactivado o atenuado. 35

6. Una composición que comprende un inmunógeno de un virus de la influenza del punto 1, donde dicho inmunógeno es capaz de inducir una respuesta inmunitaria contra un virus de la influenza que es capaz de infectar un animal cánido, y donde dicho inmunógeno comprende:

(a) un polipéptido HA como se define en el punto 1 y el punto 3; y/o

(b) un polinucleótido que codifica un polipéptido HA... [Seguir leyendo]

1. Un virus de influenza canina aislado que es capaz de infectar un animal cánido, donde dicho virus de la influenza comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido hemaglutinina (HA) que tiene una secuencia de aminoácidos que se muestra en la SEC ID Nº 62; o una secuencia madura de la misma donde la secuencia de señal de 16 aminoácidos del extremo N se ha retirado de la secuencia de longitud completa.

2. El virus de influenza de acuerdo con la reivindicación 1, donde dicho virus de influencia comprende un polinucleótido que codifica un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos que se muestra en cualquiera de las SEC ID Nos 48, 50, 52, 54, 56, 58, o 60, o un fragmento funcional y/o inmunogénico de la misma, o dicho polinucleótido codifica un polipéptido que tiene una identidad de secuencia del 95% o mayor con la secuencia de aminoácidos que se muestra en las SEC ID Nos 48, 50, 52, 54, 56, 58, o 60.

3. El virus de influenza de acuerdo con la reivindicación 1, donde dicho polipéptido HA de dicho aislado vírico comprende la secuencia de aminoácidos SEC ID Nº 62.

4. El virus de influenza de acuerdo con la reivindicación 1, donde dicho virus de influenza comprende un polinucleótido que tiene una secuencia de nucleótidos que se muestra en cualquiera de las SEC ID Nos 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, o 61, o dicho polinucleótido tiene una identidad de secuencia del 98% o mayor con la secuencia de nucleótidos que se muestra en cualquiera de las SEC ID Nos 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, o 61.

5. El virus de influenza de acuerdo con la reivindicación 1, donde dicho virus de influenza está inactivado o atenuado.

6. Una composición que comprende un inmunógeno de un virus de influenza de la reivindicación 1, donde dicho inmunógeno es capaz de inducir una respuesta inmunitaria contra un virus de influenza que es capaz de infectar un animal cánido, y donde dicho inmunógeno comprende:

(a) un polipéptido HA como se define en la reivindicación 1 o la reivindicación 3; y/o

(b) un polinucleótido que codifica un polipéptido HA como se define en la reivindicación 1 o la reivindicación 3.

7. La composición de acuerdo con la reivindicación 6, donde dicho inmunógeno comprende virus completo libre de células, o una parte del mismo; un polinucleótido vírico; una proteína vírica; un polipéptido o péptido vírico; una célula infectada por el virus; una construcción basada en un vector vírico recombinante; un virus combinado; o un ácido nucleico desnudo de dicho virus.

8. La composición de acuerdo con la reivindicación 7, donde dicha proteína vírica, polipéptido o péptido comprende una secuencia de aminoácidos que se muestra en cualquiera de las SEC ID Nos 48, 50, 52, 54, 56, 58, o 60, o un fragmento funcional y/o inmunogénico de la misma, o dicho polinucleótido codifica un polipéptido que tiene una identidad de secuencia del 95% o mayor con la secuencia de aminoácidos que se muestra en cualquiera de las SEC ID Nos 48, 50, 52, 54, 56, 58, o 60, o donde dicho polinucleótido vírico codifica un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos que se muestra en cualquiera de las SEC ID Nos 48, 50, 52, 54, 56, 58, o 60, o un fragmento funcional y/o inmunogénico de la misma, o dicho polinucleótido codifica un polipéptido que tiene una identidad de secuencia del 95% o mayor con la secuencia de aminoácidos que se muestra en cualquiera de las SEC ID Nos 48, 50, 52, 54, 56, 58, o 60, o donde dicho polinucleótido vírico comprende la secuencia de nucleótidos que se muestra en cualquiera de las SEC ID Nos 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, o 61, o un fragmento funcional de la misma.

9. Una vacuna de influenza canina, donde la vacuna comprende:

una cantidad terapéuticamente eficaz de un antígeno de al menos un virus de influenza de la reivindicación 1, y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable, donde dicho antígeno comprende:

(a) un polipéptido HA como se define en la reivindicación 1 o reivindicación 3; y/o

(b) un polinucleótido que codifica un polipéptido como se define en la reivindicación 1 o la reivindicación 3.

10. La vacuna de acuerdo con la reivindicación 9, donde el antígeno vírico comprende un virus inactivado o un virus vivo atenuado.

11. Un polinucleótido aislado que comprende todo o parte de un segmento genómico o gen de un virus de influenza de la reivindicación 1, donde el polinucleótido comprende una secuencia de ácidos nucleicos que codifica un polipéptido HA como se define en la reivindicación 1 o la reivindicación 3.

12. El polinucleótido de acuerdo con la reivindicación 11, donde dicho polinucleótido se formula en un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.

13. Una construcción de polinucleótido de expresión que comprende un polinucleótido de la reivindicación 11.

14. Un polipéptido HA aislado codificado por un polinucleótido de la reivindicación 11.

15. El polipéptido de la reivindicación 14, donde dicho polipéptido se formula en un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.