Inhibidores MET para potenciar la eficacia de la radioterapia.

Inhibidor de Met para su uso en la potenciación de la eficacia de la radioterapia,

reduciendo y/o anulando la resistencia del paciente a dicha radioterapia, en el tratamiento de un paciente que padece un tumor, estando seleccionado dicho inhibidor de Met de:

i) anticuerpo monoclonal anti-Met DN30,

ii) un anticuerpo modificado genéticamente que contiene las seis regiones determinantes de la complementariedad (CDR) del anticuerpo monoclonal anti-Met DN30, teniendo dichas CDR las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID No.: 12 a 14 y 20 a 22, y

iii) un fragmento de (i) o (ii) que contiene las seis regiones determinantes de la complementariedad (CDR) del anticuerpo monoclonal anti-Met DN30, teniendo dichas CDR las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID No.: 12 a 14 y 20 a 22,

en el que dicho anticuerpo monoclonal anti-Met DN30 está producido por la línea celular de hibridoma ICLC PD 05006, en el que dicho inhibidor Met inhibidor es capaz de inducir la regulación por disminución del receptor codificado por el gen MET y contrarrestar la invasividad tumoral inducida por radiación.

Inhibidores MET para potenciar la eficacia de la radioterapia

Campo de la invención La presente divulgación se refiere al uso de inhibidores MET para potenciar la eficacia de la radioterapia en pacientes que padecen cánceres.

Antecedentes técnicos Aunque se emplea con éxito para tratar a pacientes con cáncer, la radioterapia puede que no logre erradicar el tumor, que recae con un fenotipo más agresivo. Consecuentemente, se ha descubierto un efecto prometastásico paradójico de la radiación ionizante (RI) por estudios clásicos en modelos animales. La progresión del tumor 15 después de la radioterapia podía resultar de la selección positiva de la subpoblación de "células madre cancerosas", que es intrínsecamente radioresistente. Sin embargo, pruebas destacadas indican que, además de la selección, la RI promueve un fenotipo adaptivo destinado a la regeneración adaptiva, que puede resultar en un comportamiento metastásico. Este fenotipo se define como la respuesta "estrés-y-recuperación" a daños en el ADN, que se producen tanto a nivel de una única célula como de tejido. En células individuales, la detección de daños en el ADN provoca mecanismos moleculares específicos, la mayoría orquestados por el eje ATM-p53, que bloquean la replicación y activan la reparación del ADN. Si el daño es irreversible, se programa una célula normal para ejecutar la apoptosis, o para hibernar su capacidad proliferativa a través de la senescencia. Sin embargo, después de la muerte de células mutantes, los tejidos deben restablecer un número y patrón de células adecuados, para recuperar la estructura y función originales. Por lo tanto, se inicia la regeneración (o "cicatrización") por las células supervivientes, normales o bien neoplásicas. Como se observa in vitro, este proceso incluye etapas tales como desprendimiento del borde de la herida, adquisición de un fenotipo fibroblástico, migración en el área rascada, y, posiblemente, proliferación. Todo el programa se ha denominado "transición epitelial-mesenquimal" (TEM) , una terminología que destaca las características morfológicas. Más recientemente, este programa también se ha definido como "crecimiento invasivo" (CI) , una expresión que enfatiza aspectos funcionales relevantes para el cáncer. Ahora se acepta ampliamente que el TEM/CI es un programa fisiológico para el desarrollo y la regeneración del tejido, que se usurpa por células cancerosas para realizar la invasión y la metástasis. El TEM/CI se activa en células cancerosas (a) a veces, como resultado de lesiones genéticas que apoyan la selección clonal; (b) más a menudo, como resultado de una respuesta adaptiva a condiciones ambientales adversas.

Por tanto, el TEM/CI es un programa genético finalmente por unos pocos factores de transcripción específicos, y orquestado por un puñado de señales extracelulares. Esto último incluye factores de dispersión, tales como factor de crecimiento de hepatocitos (FCH) y proteína estimulante de macrófagos (PEM) , que se unen a receptores de tirosina cinasas que pertenecen a la familia Met.

Objeto y sumario de la invención Por lo tanto, se siente la necesidad de obtener soluciones mejoradas para potenciar la eficacia de la radioterapia en pacientes que padecen tumores.

El objetivo de la presente divulgación es proporcionar dichas soluciones mejoradas.

De acuerdo con la invención, el objetivo anterior se logra gracias a la materia objeto reclamada específicamente en las reivindicaciones siguientes, que se entiende que forman una parte integral de la presente divulgación.

Un modo de realización de la invención proporciona el uso de un inhibidor Met en la potenciación de la eficacia de la radioterapia, reduciendo y/o anulando la resistencia del paciente a la radioterapia, en el tratamiento de un paciente que padece un tumor, preferentemente un tumor que presenta una ruta Met desregulada, en el que el inhibidor Met se selecciona de:

i) anticuerpo monoclonal anti-Met DN30,

ii) un anticuerpo modificado genéticamente que contiene las seis regiones determinantes de la complementariedad (CDR) del anticuerpo monoclonal anti-Met DN30, teniendo dichas CDR las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID No.: 12a 14 y 20 a22, y

iii) un fragmento de (i) o (ii) que contiene las seis regiones determinantes de la complementariedad (CDR) del anticuerpo monoclonal anti-Met DN30, teniendo dichas CDR las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID No.: 12 a 14 y 20 a 22, en el que el anticuerpo monoclonal anti-Met DN30 se produce por la línea celular de hibridoma ICLC PD 05006, y en el que el inhibidor Met inhibidor puede inducir la regulación por disminución del

receptor codificado por el gen MET.

Otro modo de realización de la presente divulgación se refiere a una secuencia de nucleótidos que codifica un

inhibidor Met para su uso en la potenciación de la eficacia de la radioterapia, reduciendo y/o anulando la resistencia del paciente a la radioterapia, en el tratamiento (por ejemplo, por tratamiento génico) de un paciente que padece un tumor, preferentemente un tumor que presenta una ruta Met desregulada, estando seleccionado dicho inhibidor Met de:

i) anticuerpo monoclonal anti-Met DN30,

ii) un anticuerpo modificado genéticamente que contiene las seis regiones determinantes de la complementariedad (CDR) del anticuerpo monoclonal anti-Met DN30, teniendo dichas CDR las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID No.: 12a 14 y 20 a22, y

iii) un fragmento de (i) o (ii) que contiene las seis regiones determinantes de la complementariedad (CDR) del anticuerpo monoclonal anti-Met DN30, teniendo dichas CDR las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID No.: 12a 14y 20 a22,

en el que el anticuerpo monoclonal anti-Met DN30 se produce por la línea celular de hibridoma ICLC PD 05006, y en el que dicho inhibidor Met inhibidor puede inducir la regulación por disminución del receptor codificado por el gen MET.

De acuerdo con un modo de realización preferente, el inhibidor Met es para su administración i) en forma de proteína soluble por inyección o infusión o ii) por medio de un vector para administración sistémica o intratumoral.

De acuerdo con otro modo de realización preferente, el inhibidor Met está en forma de un fragmento Fab opcionalmente conjugado con al menos una molécula estabilizadora, en el que la molécula estabilizadora se selecciona de polietilenglicol, dominio de unión a albúmina, albúmina.

La presente divulgación divulga que la irradiación regula por incremento la expresión de MET (oncogén conocido por conducir el "crecimiento invasivo" del cáncer) , que a su vez promueve la invasión celular y protege a las células de la apoptosis inducida por radiación. Por lo tanto, la anulación de la expresión de MET o la inhibición de su actividad cinasa por compuestos específicos, es decir, inhibidores Met específicos, promueve la apoptosis y contrarresta la invasividad inducida por radiación, potenciando de este modo la eficacia de la radioterapia.

Breve descripción de los dibujos La invención se describirá ahora, a modo de ejemplo sólo, con referencia a las figuras adjuntas, en las que:

-Figura 1. La RI induce la transcripción de MET.

a, proteína Met en MDA-MB-435S en los puntos temporales indicados después de la irradiación (10 Gy) . ctrl, Met a tiempo cero. b, proteína Met en MDA-MB-435S 12 h después de la irradiación (1-10 Gy) . c, transcrito MET en MDAMB-435S en los puntos temporales indicados después de la irradiación (10 Gy) . d, actividad de luciferasa conducida por el promotor de MET (construcción sin promotor, básica) en MDA-MB-231 en los puntos temporales indicados después de la irradiación (10 Gy; ctrl, células no irradiadas) . Columnas: media de análisis triplicados de dos experimentos independientes ± e.e.m. (* p<0, 05, n = 6, prueba de la t para datos emparejados) . u.a., unidades 45 arbitrarias.

-Figura 2. La transcripción de MET inducida por RI requiere NF-κB.

a, Acumulación nuclear de proteína en MDA-MB-435S analizado en los puntos temporales indicados después de la irradiación (10 Gy) , o después de 24 h de cultivo en hipoxia (1 % O2) . ctrl, células no irradiadas a tiempo cero. b, Inmunoprecipitación de cromatina en MDA-MB-231 irradiada (10 Gy; ctrl, células no irradiadas) . Las columnas representan la proporción entre anti-p65/RelA e inmunoprecipitación de IgG no específica de cada secuencia de unión a NF-κB (κB1 o κB2) en el promotor MET (media ± e.e.m. de análisis triplicados) . Se usó el promotor NFKBIA (IκBα) como control positivo. c, Actividad del promotor MET en MDA-MB-231,... [Seguir leyendo]

1. Inhibidor de Met para su uso en la potenciación de la eficacia de la radioterapia, reduciendo y/o anulando la resistencia del paciente a dicha radioterapia, en el tratamiento de un paciente que padece un tumor, estando 5 seleccionado dicho inhibidor de Met de:

i) anticuerpo monoclonal anti-Met DN30,

ii) un anticuerpo modificado genéticamente que contiene las seis regiones determinantes de la complementariedad (CDR) del anticuerpo monoclonal anti-Met DN30, teniendo dichas CDR las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID No.: 12a 14 y 20 a22, y

iii) un fragmento de (i) o (ii) que contiene las seis regiones determinantes de la complementariedad (CDR) del anticuerpo monoclonal anti-Met DN30, teniendo dichas CDR las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID

No.:12a14y20a22,

en el que dicho anticuerpo monoclonal anti-Met DN30 está producido por la línea celular de hibridoma ICLC PD 05006, en el que dicho inhibidor Met inhibidor es capaz de inducir la regulación por disminución del receptor codificado por el gen MET y contrarrestar la invasividad tumoral inducida por radiación.

2. Secuencia de nucleótidos que codifica un inhibidor de Met para su uso en la potenciación de la eficacia de la radioterapia, reduciendo y/o anulando la resistencia del paciente a dicha radioterapia, en el tratamiento de un paciente que padece un tumor, estando seleccionado dicho inhibidor de Met de:

i) anticuerpo monoclonal anti-Met DN30,

ii) un anticuerpo modificado genéticamente que contiene las seis regiones determinantes de la complementariedad (CDR) del anticuerpo monoclonal anti-Met DN30, teniendo dichas CDR las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID No.: 12a 14 y 20 a22, y

iii) un fragmento de (i) o (ii) que contiene las seis regiones determinantes de la complementariedad (CDR) del anticuerpo monoclonal anti-Met DN30, teniendo dichas CDR las secuencias de aminoácidos expuestas en SEQ ID No.: 12a 14y 20 a22,

en el que dicho anticuerpo monoclonal anti-Met DN30 se produce por la línea celular de hibridoma ICLC PD 05006, en el que dicho inhibidor Met inhibidor puede inducir la regulación por disminución del receptor codificado por el gen MET y contrarresta la invasividad tumoral inducida por radiación.

3. Inhibidor de Met de acuerdo con la reivindicación 1, en el que dicho inhibidor de Met es para la administración en forma de proteína soluble por inyección o infusión.

4. Secuencia de nucleótidos que codifica dicho inhibidor de Met de acuerdo con la reivindicación 2, en la que dicha secuencia de nucleótidos que codifica dicho inhibidor de Met se para la administración por medio de un vector, en la que dicho vector está en forma de partícula.

5. Secuencia de nucleótidos que codifica dicho inhibidor de Met de acuerdo con la reivindicación 4, en la que dicho vector es adecuado para dirigirse al tumor o a células asociadas al tumor.

6. Secuencia de nucleótidos que codifica dicho inhibidor de Met de acuerdo con la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en la que dicho vector es para una administración sistémica o intratumoral, preferentemente por inyección.

7. Inhibidor de Met o secuencia de nucleótidos que codifica un inhibidor de Met de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho fragmento es un fragmento Fab, preferentemente un fragmento Fab que comprende al menos una molécula estabilizadora.

8. Inhibidor de Met o secuencia de nucleótidos que codifica un inhibidor de Met de acuerdo con la reivindicación 7, en el que dicha al menos una molécula estabilizadora se selecciona de polietilenglicol, dominio de unión a albúmina, albúmina.

9. Inhibidor de Met o secuencia de nucleótidos que codifica un inhibidor de Met de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho inhibidor de Met y/o dicha secuencia de nucleótidos que codifica dicho inhibidor de Met es para la administración al menos una semana antes de someter a dicho paciente a radioterapia.

10. Inhibidor de Met o secuencia de nucleótidos que codifica un inhibidor de Met de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho inhibidor de Met y/o dicha secuencia de nucleótidos que codifica dicho inhibidor de Met es para la administración un día antes de someter a dicho paciente a radioterapia.

11. Inhibidor de Met o secuencia de nucleótidos que codifica un inhibidor de Met de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho inhibidor de Met y/o dicha secuencia de nucleótidos que codifica dicho inhibidor de Met es para la administración hasta al menos una semana, preferentemente de 6 a 48 horas, después de la finalización de la radioterapia.

12. Inhibidor de Met o secuencia de nucleótidos que codifica un inhibidor de Met de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que dicho tumor se selecciona de entre un carcinoma, un sarcoma musculoesquelético, un sarcoma de tejido blando, una neoplasia maligna hematopoyética, un tumor cerebral, melanoma, mesotelioma, tumor de Wilms.